遼寧中部地區鯉“紅嘴病”的病原菌篩查及防治

唐治宇，徐小雅，關 麗

(遼寧省現代農業生產基地建設工程中心，遼寧 沈陽 110032)

沈陽、遼陽兩市為遼寧省中部淡水魚養殖主產區，以鯉、草、鯽等品種養殖為主。2023年4－5月，遼寧中部地區的淡水養殖池塘中暴發了一種急性傳染性疾病，在發病2個月左右時間內造成大批鯉科魚死亡，主要品種為鯉，鯽、草魚等品種也逐漸出現該病。病因不明，因病魚嘴發紅，當地俗稱“紅嘴病”，死亡率高達20%，造成嚴重的經濟損失。筆者單位接到養殖戶求助電話后對該地區池塘養殖發病的鯉魚進行現場調查采樣，經中心省級水生動物疫控實驗室篩查后確定為維氏氣單胞菌感染。本文就此病檢測及防治情況介紹如下，以期對今后鯉“紅嘴病”的防治提供參考。

一、發病情況

2023年4月初至5月末，遼寧省沈陽市遼中區部分池塘養殖的鯉(建鯉、鏡鯉)陸續發病，與此同時，相鄰區域遼陽市燈塔地區單品種精養池塘也相繼發病。發病時水溫為22℃以下，發病個體在250～1 000克/尾。

二、臨床病理變化

病魚發病初期精神萎頓，游動緩慢，不到餌料臺附近攝食，食欲漸絕，隨后出現“溜邊”“打晃”“側倒”，陸續出現死亡，直至當地池塘水溫升高到25℃以上，發病率逐漸降低，發病死亡持續2 月余。魚一旦染病，基本無治愈，死亡率很高。本病典型癥狀為紅嘴、紅頭，并伴有凸眼、爛鰓、鰭條及體表腹部充血、泄殖腔紅腫現象。解剖后發現肌肉嚴重充血、體腔內壁有出血點，鰾外膜充血、脾充血腫大呈紫黑色，腸道內食糜少或無。

三、實驗室診斷

1.病原分離培養 筆者單位疫控中心檢測人員選取2 尾具有典型癥狀瀕死狀態的鯉“紅嘴病”病魚樣品，以無菌操作從體表(紅嘴部)、肝胰臟、腎臟、脾臟組織取樣接種于腦心浸液瓊脂平板上，在28℃恒溫培養箱中培養28 小時，均出現一種正圓形、表面濕潤、直徑2毫米左右的灰白色純培養物(編號：HZ1)。

2.生理生化鑒定 采用杭州濱和微生物試劑有限公司生產的細菌微量生化反應管，用微量移液器在每支微量管中加入25微升的被檢菌液(菌液濁度為0.5 麥氏單位)，同時接種一支同化對照管作陰性對照，再放入35℃培養箱孵育24～48 小時，取出觀察結果。鑒定結果顯示，在進行的35項生理生化鑒定中(見表1)，除纖維二糖的結果不同之外，分離株HZ1與維氏氣單胞菌模式種的其余項目結果完全相同。上述反應結果表明，菌株HZ1可能是維氏氣單胞菌。

表1 分離菌株與維氏氣單胞菌生理生化特征比較

3.16s rDNA 序列測定 在生化鑒定的基礎上，采用DNA 提取試劑盒對該純培養物進行DNA 提取并進行16s rDNA 擴增，在約 1 500bp 時獲得擴增片段(見圖1)，測序后在生物數據庫(NCBI)上進行比對，結果顯示分離菌株與維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)的同源性最高，序列相似性達100%(ID:cp024933.1)。因此，結合分離菌株形態、生化特性及16s rDNA 鑒定結果將其鑒定為維氏氣單胞菌。

4.藥敏試驗 采用杭州濱和微生物試劑有限公司生產的革蘭氏陰性桿菌藥敏試劑盒，運用紙片擴散法定性測定革蘭氏陰性桿菌在體外對氨卞西林、頭孢唑啉、頭孢他啶等17 種抗菌藥物的敏感性。將選取的17 種藥敏紙片貼于平板上，然后于26℃培養箱中培養24 小時后測量抑菌圈直徑，判斷菌株對抗生素的敏感性。通過藥敏試驗發現，本病病原菌株對頭孢他啶、妥布霉素、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨曲南、氧氟沙星、頭孢吡肟、頭孢西叮、哌拉西林等10 種藥物敏感；對頭孢哌酮、卡那霉素、頭孢噻吩、鏈霉素等4 種藥物中度敏感；對氨芐西林、麥迪霉素、頭孢唑啉等3種藥物不敏感。

四、防治措施

據相關資料報道，維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)廣泛存在于淡水、海水及污泥等多種水體生態系統中，對多種水生動物具有較強感染性和致病力，對水產養殖業具有較大危害性。因此，針對本次沈陽中部地區鯉魚池塘養殖中由于感染維氏氣單胞菌造成的“鯉紅嘴”病，應采取“以防為主、防重于治”的原則。在治療上可依據藥物敏感性試驗結果，有針對性地采用內服敏感抗菌素，同時外用消毒藥物進行治療。從此次實驗結果來看，維氏氣單孢菌對頭孢類藥物及喹諾酮類藥物較敏感，可在養殖過程中用于拌餌投喂，來防治“紅嘴”病，具體用量需結合生產實際。除此以外，在生產過程中，常用氟苯尼考、恩諾沙星等拌料投喂，用量為30毫克/千克,每天3 次，連用5 天。同時采用二氧化氯、溴氯海因對養殖水體進行消毒，每天1次，連續使用2天。

預防方面主要做好以下幾點：一是提高池塘越冬前后管理。因東北冬季漫長，池塘越冬鯉近半年未攝食，且在高密度的環境下本身處于虛弱和應激的狀態，要靠自身去恢復體質是很慢的過程，這也是此病在開春后大規模暴發的原因之一。在提高飼料品質的同時，可在飼料中添加維生素、益生菌、中草藥和酶等物質，以增強魚體的免疫力。二是培育良好水質。水質的惡化，如氨氮、亞硝酸鹽等含量過高，會直接導致魚體免疫力降低，調查發現，所有水質較好的池塘，即使發病，死亡數量也相對較少。反之水質差的池塘，發病率與死亡率都較高。因此，要重視對水質、底質的管理，對水質參數要定期監測，了解動態變化，及時調節不利于魚生長和抗病力的因素。三是控制放養密度。在一定范圍內,池塘苗種的放養量與經濟效益成正比，但超過池塘的最大載魚量，會導致水體富營養化，影響養殖動物的生長，同時增加養殖管理和水質管控難度，發病率和死亡率大幅升高，因此盲目增大苗種的放養量往往會得不償失。