復(fù)方中草藥對大口黑鱸幼魚肝胰臟抗氧化能力的影響

國洺達(dá)，梁新琪，李佳昕

(天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384)

中草藥作為一種天然綠色的飼料添加劑，對魚機(jī)體具有抗菌、提高消化能力、維持魚健康、促進(jìn)生長發(fā)育的作用。劉海芳(2022)研究發(fā)現(xiàn)用黃芪和紅棗等中草藥提取物投喂虹鱒8周降低了促炎癥因子TNF-α 基因表達(dá)水平，表明其提升了虹鱒對病菌的抵抗能力。大口黑鱸在我國養(yǎng)殖規(guī)模逐步擴(kuò)大，但因長期攝食配合飼料易出現(xiàn)抗病力減弱、肝胰臟病變等問題。基于此，本試驗(yàn)選擇山楂、半夏和神曲按照6∶2∶2 的比例添加投喂，探討其對大口黑鱸幼魚消化系統(tǒng)健康的影響，為循環(huán)水條件下大口黑鱸幼魚健康養(yǎng)殖提供參考。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料 試驗(yàn)用750尾健康大口黑鱸水花取自天津藍(lán)科水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，在水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心養(yǎng)殖、馴化20 天后測量體重和體長，初始體重為(0.61±0.01)克，初始體長為(3.14±0.02)厘米。

飼料選用微囊料，成分為粗灰分水平12.35%、粗脂肪水平17.88%、粗蛋白質(zhì)水平56.67%，用于暫養(yǎng)期間；特種魚苗膨化飼料粒徑0.3毫米，成分為粗灰分水平11.63%、粗脂肪水平11.61%、粗蛋白質(zhì)水平51.12%，魚苗專用飼料粒徑1毫米，成分為粗灰分水平12.80%、粗脂肪水平16.02%、粗蛋白質(zhì)水平56.81%。

山楂、神曲、半夏均購自九州大藥房，將3種中草藥分別粉碎后過80 目篩，按6∶2∶2 比例混勻，參考詹富強(qiáng)(2007)的中草藥方法對其進(jìn)行煎煮，待藥液冷卻后按照2.5‰、5‰、7.5‰、10‰噴灑到配合飼料表面，分別制成4種不同飼料，現(xiàn)用現(xiàn)做，不噴灑組作為對照，設(shè)定為0。

2.試驗(yàn)方法 試驗(yàn)方法如下。

(1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理。采用循環(huán)水系統(tǒng)進(jìn)行養(yǎng)殖，將試驗(yàn)魚隨機(jī)分為5 組，分別投喂0、2.5‰、5‰、7.5‰、10‰復(fù)方中草藥飼料，每組3 個重復(fù)，每個重復(fù)50 尾魚。試驗(yàn)期間24 小時連續(xù)充氣，每日投喂3次(8:00、13:00、18:00)，采用表觀飽食法。每2日換1次水，試驗(yàn)周期為8周。

(2)樣品采集。養(yǎng)殖8 周后禁食12 小時采樣，從每個重復(fù)組隨機(jī)選取20 尾魚用MS-222 進(jìn)行快速麻醉在冰盤上剖開腹腔取出肝胰臟，用預(yù)冷生理鹽水清洗內(nèi)外，迅速塑封袋，凍存于-80℃冰箱內(nèi)備用。

(3)樣品測定。T-AOC、SOD、CAT、MDA和GSHPx 指標(biāo)均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)試劑盒進(jìn)行測定。

(4)數(shù)據(jù)分析。結(jié)果采用SPSS 26 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)，采用單因素ANOVA 檢驗(yàn)，選擇LSD 和Duncan法多重比較，P＜0.05表示差異顯著，數(shù)據(jù)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤來表示。

二、結(jié)果與分析

隨著山楂、神曲和半夏添加量的上升，肝胰臟SOD的活力呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢，且當(dāng)中草藥添加量為2.5‰時，SOD 活性達(dá)到最大值，顯著高于其余各組(P＜0.05)，但5‰～10‰組與對照組無顯著差異(P＞0.05)(圖1)。

圖1 中草藥對大口黑肝胰臟SOD 活力的影響

在飼料中添加復(fù)方中草藥時，各添加組與對照組的CAT 活力無顯著差異(P＞0.05)，但5‰組CAT活性顯著高于2.5‰組(圖2)。

圖2 中草藥對大口黑肝胰臟CAT 活力的影響

隨著復(fù)方中草藥添加水平的上升，肝胰臟的GSH-Px活性先上升、后下降，在7.5‰添加水平時達(dá)到最大值，且顯著高于各組(P＜0.05)(圖3)。

圖3 中草藥對大口黑肝胰臟GSH-Px 活力的影響

5‰組大口黑鱸幼魚肝胰臟T-AOC 的活性最高，顯著高于其余各組(P＜0.05)(圖4)。

圖4 中草藥對大口黑肝胰臟T-AOC活力的影響

在飼料中加入山楂、神曲和半夏能夠顯著降低肝胰臟中MDA 的含量(P＜0.05)，其中5‰組最低，但各實(shí)驗(yàn)組間無顯著差異(P＞0.05)(圖5)。

圖5 中草藥對大口黑肝胰臟MDA含量的影響

由上述結(jié)果發(fā)現(xiàn)，復(fù)方中草藥不同添加量能夠顯著影響大口黑鱸幼魚肝胰臟抗氧化能力，在T-AOC、SOD、MDA和GSH-PX指標(biāo)上均有體現(xiàn)。

三、討論

肝胰臟作為維持大口黑鱸機(jī)體正常生命活動的重要器官，主要負(fù)責(zé)營養(yǎng)代謝、解毒和抗氧化等工作。當(dāng)魚體SOD、CAT 和GHS-PX 的活力過低時，體內(nèi)的自由基無法被清除，就會破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)而損傷機(jī)體健康、減弱抗病能力，甚至導(dǎo)致死亡，因此魚體的抗氧化能力是評價機(jī)體健康的重要指標(biāo)之一。自由基是在受到外界不良環(huán)境刺激下產(chǎn)生的具有強(qiáng)氧化性的活性化學(xué)物質(zhì)，使脂質(zhì)發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生丙二醛(MDA)，當(dāng)MDA 的含量持續(xù)增長會引起機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的交聯(lián)聚合，導(dǎo)致細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，引起細(xì)胞受損進(jìn)而破壞機(jī)體健康，減弱抗病能力甚至死亡。SOD是魚體內(nèi)存在的一種抗氧化酶，作為酶類抗氧化系統(tǒng)的第一道防線，能夠?qū)⒆杂苫庪x子轉(zhuǎn)化為過氧化氫，CAT 再將SOD 反應(yīng)產(chǎn)生的過氧化氫催化生成水和氧氣，以達(dá)到保護(hù)細(xì)胞、組織和減少過氧化物含量的目的。GSH-Px 作為魚體內(nèi)廣泛存在的一種抵抗氧化應(yīng)激的酶類之一，與CAT共同作用，能夠催化GSH產(chǎn)生GSSG，將有害的過氧化物變?yōu)闊o毒的有機(jī)化合物，降低魚體內(nèi)過氧化物的水平，以達(dá)到保護(hù)機(jī)體健康的目的。

在魚健康生長繁育、機(jī)體免疫、降低機(jī)體敏感性和減少外界刺激對魚體的影響均需要酶類抗氧化系統(tǒng)的參與。國內(nèi)外學(xué)者有關(guān)中草藥應(yīng)用到魚健康養(yǎng)殖中的研究最早出現(xiàn)在20 世紀(jì)。Yu Zhang(2021)等研究指出將川芎、五味子和蓮子等中草藥混合飼喂凡納濱對蝦30 天，結(jié)果發(fā)現(xiàn)中草藥添加量為10克/千克組的蝦肝胰腺抗氧化能力顯著提高(P＜0.05)，且提升了肝胰腺中SOD 和CAT的基因表達(dá)水平。張建明(2022)等發(fā)現(xiàn)投喂桔梗和貫眾等中草藥顯著提高了長江鱘幼魚的GSH-Px的活力，降低了MDA 和COR 的含量(P＜0.05)。何勤等(2021)研究表明在基礎(chǔ)飼料中加入不同水平的銀杏葉提取物飼喂鯉魚60 天，顯著升高了肝臟中T-AOC、SOD 和CAT 含量(P＜0.05)，增強(qiáng)了魚體抗氧化能力。本試驗(yàn)中，中草藥添加量5‰時，TAOC 含量顯著上升(P＜0.05)，當(dāng)添加量為2.5‰時，SOD 活性顯著升高(P＜0.05)，且較對照組而言，飼喂復(fù)方中草藥均抑制了MDA的生成，表明提高了機(jī)體抗氧化能力，與上述研究結(jié)果相似，表明山楂、半夏和神曲能增強(qiáng)大口黑鱸魚體抗氧化防御的能力，減少了組織受損的情況發(fā)生，對機(jī)體維持正常的生命活動具有積極意義。