蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛隱形乳房炎的藥效評(píng)價(jià)

彭清潔， 蔡大亮， 姜 鵬， 黃 鑫， 陳敬幫，周 迪， 張 彥， 王蘋蘋 ， 胡龍飛， 戴晉軍

（1.農(nóng)業(yè)微生物資源發(fā)掘與利用全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北宜昌 443003；2.湖北省酵母功能湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北宜昌 443003；3.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)藥創(chuàng)新中心，北京 100193）

隱性乳房炎作為奶牛養(yǎng)殖業(yè)中一項(xiàng)常見的健康問題， 對奶牛的生產(chǎn)性能和乳制品質(zhì)量構(gòu)成了嚴(yán)重威脅（王豪杰等，2022）。蒲公英以其抗炎和免疫調(diào)節(jié)的潛力為人熟知（李利博等，2023；王瑞等，2019），而酵母培養(yǎng)物作為一種富含營養(yǎng)成分和具有生物活性物質(zhì)的補(bǔ)充， 在免疫調(diào)節(jié)和炎癥緩解方面發(fā)揮著獨(dú)特作用（胡寶成等，2023；楊之恒等，2022）。本研究旨在深入探討蒲公英提取物和酵母培養(yǎng)物在隱性乳房炎防治中的獨(dú)特優(yōu)勢， 并重點(diǎn)關(guān)注兩者的協(xié)同效應(yīng)， 為奶牛隱性乳房炎的防治提供一種更加行之有效的方法。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器及材料 DHI 乳成分分析儀 （丹麥FOSS 公司）， 邁瑞bc-2800vet 全自動(dòng)血液分析儀， 奶樣專用瓶，10 mL 一次性注射器， 記號(hào)筆。 蒲公英提取物（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)藥創(chuàng)新中心），主要成分為蒲公英，規(guī)格：10：1，使用方法：牛10 ～50 g（10：1 提取物），連用5 ～10 d。酵母培養(yǎng)物，主要成分：粗蛋白質(zhì)≥15%，粗灰分≤10% ，甘露聚糖≥2%，水分≤10%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本試驗(yàn)在湖北俏牛兒牧業(yè)有限公司進(jìn)行，試驗(yàn)選取28 頭同胎次泌乳牛，其中21頭患有隱形乳房炎， 分別用不同的耳標(biāo)號(hào)進(jìn)行區(qū)分并記錄每頭奶牛的初始體細(xì)胞數(shù)量， 以體細(xì)胞數(shù)量為核心指標(biāo)采用Excel 隨機(jī)分為A、B、C 三個(gè)處理組， 保證每個(gè)區(qū)隱性乳房炎患病牛的體細(xì)胞數(shù)無顯著性差異（P＞0.05）；另7 頭健康奶牛作為陰性對照D 組，每組7 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1 頭奶牛。 具體分組詳見表1。

表1 試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)?zāi)膛ＩB(yǎng)， 每日投喂2 次，自由飲水， 試驗(yàn)組中的試驗(yàn)產(chǎn)品拌于TMR 中，飼喂時(shí)間為每天的6：00 和18：00。

1.4 體細(xì)胞計(jì)數(shù)法 （1）檢測前，對奶牛乳房、乳頭及擠奶人員的手部進(jìn)行清洗， 用熱毛巾和酒精對奶牛乳房進(jìn)行擦拭和消毒。采集牛乳時(shí)，棄去前三把奶， 并標(biāo)明所采樣品的編號(hào)和日期，2 ～4 ℃冷藏并盡快運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。（2）采用乳成分分析儀進(jìn)行體細(xì)胞檢測。 按照上述試驗(yàn)方法分別于試驗(yàn)開始前、給藥第6 天、給藥第11 天，采集每頭試驗(yàn)牛的奶樣，進(jìn)行體細(xì)胞計(jì)數(shù)，記錄相關(guān)反應(yīng)狀態(tài)和體細(xì)胞數(shù)量。

1.5 產(chǎn)奶量的測定 每日分別在6：00 和18：00各擠奶一次。分別于試驗(yàn)開始前和試驗(yàn)第6、11 天準(zhǔn)確測定每頭奶牛全天的產(chǎn)奶量。

1.6 乳成分分析 試驗(yàn)開始前和試驗(yàn)第6、11 天早晨擠奶同時(shí)， 從牛奶計(jì)量器中分別采集每個(gè)區(qū)泌乳牛的奶樣100 mL 鮮奶注入專用樣品瓶中。采集的奶樣2 ～4 ℃保存并盡快運(yùn)送回實(shí)驗(yàn)室對牛奶指標(biāo)進(jìn)行測定。

1.7 血常規(guī)分析 靜脈采集試驗(yàn)開始前和試驗(yàn)第6、11 天牛抗凝血（EDTA 抗凝），血常規(guī)分析儀檢測血紅蛋白含量（HGB）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、中性粒細(xì)胞百分比（Neut）、嗜酸性細(xì)胞百分比（Eos）、嗜堿性細(xì)胞百分比（Baso）、淋巴細(xì)胞百分比（Lymph）、單核細(xì)胞百分比（Mono）等指標(biāo)。

1.8 數(shù)據(jù)處理 采用Excel 表記錄試驗(yàn)所有數(shù)據(jù)， 結(jié)果分析采用Minitab21.3.1.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行Tukey 檢驗(yàn)。 結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛乳房炎的治療效果 牛奶中體細(xì)胞數(shù)量一定程度上可間接反映牛乳房的健康程度， 體細(xì)胞數(shù)是評(píng)價(jià)藥物作用效果的指標(biāo)之一。由表2 可知，試驗(yàn)開始時(shí)，A、B、C 三組奶牛均患有隱形乳房炎， 其牛乳中體細(xì)胞數(shù)處于同一水平， 而D 組為正常奶牛，其牛乳中體細(xì)胞數(shù)顯著低于其他三組。試驗(yàn)第6 天，與陽性對照C 組相比，日糧添加蒲公英提取物以及蒲公英提取物復(fù)配酵母培養(yǎng)物組， 牛乳中體細(xì)胞數(shù)分別下降63.2%和40.1%， 二者體細(xì)胞數(shù)均達(dá)到陰性對照D 組正常奶牛水平，其中蒲公英提取物組達(dá)到顯著差異水平（P＜0.05），而蒲公英提取物復(fù)配酵母培養(yǎng)物組表現(xiàn)出下降趨勢（0.05 ＜P＜0.1）。 試驗(yàn)第11 天，牛乳中體細(xì)胞數(shù)結(jié)果顯示，與陽性對照C 組相比，日糧添加蒲公英提取物以及蒲公英提取物復(fù)配酵母培養(yǎng)物組，牛乳中體細(xì)胞數(shù)分別下降68.0%和79.85%，均達(dá)到顯著差異水平（P＜0.05），且與陰性對照D 組相比分別下降52.48%和70.1%，達(dá)到顯著差異水平（P＜0.05）。 結(jié)果表明，日糧添加蒲公英提取物以及蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物均可以有效降低牛奶中體細(xì)胞數(shù)， 對治療隱形乳房炎有顯著效果。

表2 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對泌乳牛牛乳中體細(xì)胞數(shù)的影響萬個(gè)/mL

2.2 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛奶產(chǎn)量的影響 由表3 可知，與C 組陽性對照組相比，在第6 天、第11 天，蒲公英提取物組和蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物組在泌乳量上均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。說明蒲公英提取物及蒲公英提取物復(fù)配酵母培養(yǎng)物對泌乳量無顯著影響。

表3 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛奶產(chǎn)量的影響kg/d

2.3 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對牛奶品質(zhì)的影響 乳脂是牛奶的重要成分， 是衡量牛奶質(zhì)量的主要指標(biāo)之一。 由表4 可知， 試驗(yàn)第0天、第6 天，各組乳脂率差異均不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)第11 天，與陽性對照C 組相比，日糧添加蒲公英提取物組乳脂率差異不顯著（P＞0.05），而日糧中添加蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物組乳脂率提高25%，表現(xiàn)出上升的趨勢（0.05 ＜P＜0.1），且與陰性對照D 組相比分別上升18.6%和29.3%，A 組表現(xiàn)出上升的趨勢（0.05 ＜P＜0.1），B 組達(dá)到顯著差異水平（P＜0.05）。 結(jié)果表明，日糧添加蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物可以提高牛奶的乳脂率。

表4 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對牛奶乳脂率的影響%

2.4 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛血液指標(biāo)的影響 血液指標(biāo)在一定程度上可間接反映牛體的健康程度。 由表5 可知，3 次采集血液檢測的各項(xiàng)指標(biāo)每組間差異均不顯著（P＞0.05）。

表5 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對奶牛血液指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對泌乳牛牛乳中體細(xì)胞數(shù)的影響 牛奶中體細(xì)胞主要是白細(xì)胞和乳房分泌組織的上皮細(xì)胞， 體細(xì)胞數(shù)（SCC）是衡量生奶中微生物狀況的一個(gè)重要指標(biāo)。 隨著體細(xì)胞數(shù)的提高，牛乳中蛋白酶和脂解酶活性升高，致使清蛋白含量升高，酪蛋白含量降低，牛奶及其制品的貨架期縮短、風(fēng)味發(fā)生改變，國際上在原料奶的收購標(biāo)準(zhǔn)中，普遍已經(jīng)把生奶體細(xì)胞數(shù)的高低作為一個(gè)計(jì)價(jià)和拒收的依據(jù)（何天武等，2006）。 國內(nèi)外通常以每毫升牛奶中的體細(xì)胞數(shù)作為反映隱性乳房炎的重要指標(biāo)，并應(yīng)用于奶牛育種。 隨著SCC 的升高，中國荷斯坦牛產(chǎn)奶量、乳脂量和乳蛋白量均下降，而乳蛋白率上升（馬裴裴等，2010）。 中草藥提取物在體細(xì)胞上的作用， 飼糧中添加蒲公英水提物可降低乳中SCC，正向調(diào)節(jié)機(jī)體抗氧化能力和免疫功能（李趙嘉等，2023）。 酵母產(chǎn)品在乳房炎上的應(yīng)用， 釀酒酵母培養(yǎng)物可在一定程度上提高熱應(yīng)激下奶牛采食和產(chǎn)奶量， 降低乳中的SCC，緩解奶牛熱應(yīng)激 （王曉芳等，2022）。 本研究發(fā)現(xiàn)， 日糧中添加酵母培養(yǎng)物和蒲公英提取物能夠顯著降低牛奶的體細(xì)胞數(shù)， 該研究結(jié)果與前人一致。 在第6 天、11 天，A 蒲公英提取物組與B 蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物組體細(xì)胞數(shù)都呈下降趨勢（P＜0.05）。 在第6、11 天體細(xì)胞數(shù)為A 組分別下降63.22%和67.96%，B 組分別下降40.14%和79.85%。 結(jié)果表明，相對于蒲公英提取物組， 蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物組在后期對體細(xì)胞數(shù)量的控制效果更佳。

3.2 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對泌乳牛產(chǎn)奶量的影響 圍產(chǎn)期奶牛飼喂中草藥添加劑可顯著提高產(chǎn)奶量， 產(chǎn)奶量的提高主要是選用的中草藥能有效防治奶牛乳房炎的結(jié)果，研究表明， 產(chǎn)奶量下降是隱性乳房炎的最主要特點(diǎn)，70%產(chǎn)奶量的損失可歸于隱性乳房炎。 蒲公英主要有效成分是萜類化合物，主治乳癰等（張善芝等，2011）。 研究表明蒲公英提取物可以提高牛奶的產(chǎn)奶量（李趙嘉等，2023），而酵母培養(yǎng)物與對照組相比表現(xiàn)出更高的產(chǎn)奶量（劉慶等，2023）。 有研究表明，酵母培養(yǎng)物能夠增加奶牛乳量， 由于其具有刺激瘤胃微生物特定區(qū)系生長及活力的能力，增加瘤胃微生物菌群；由于瘤胃菌群的增加， 使得瘤胃內(nèi)飼料代謝后形成的低級(jí)揮發(fā)脂肪酸的含量明顯增加， 從而血液中葡萄糖數(shù)量及合成乳脂的乙酸數(shù)量增加， 同時(shí)隨著瘤胃細(xì)菌總數(shù)增加， 增強(qiáng)了對營養(yǎng)物質(zhì)的消化能力， 進(jìn)而提高奶牛產(chǎn)奶量 （郭園等，2016）。 在本研究中，與C 組陽性對照組相比，在第6 天、第11 天，蒲公英提取物組和蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物組在泌乳量上均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。 本次試驗(yàn)蒲公英提取物及蒲公英提取物復(fù)配酵母培養(yǎng)物在提升牛泌乳量上沒有顯著效果，可能是由于試驗(yàn)周期太短的原因，后期的效果沒有顯現(xiàn)。

3.3 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對泌乳牛牛奶品質(zhì)的影響 飼糧中添加復(fù)合植物提取物能夠提高乳腺炎奶牛產(chǎn)奶量和干物質(zhì)采食量，改善乳品質(zhì)，降低體細(xì)胞數(shù)，增強(qiáng)機(jī)體抗炎能力（宋潔等，2020）。 飼糧中添加蒲公英水提物可提高乳脂率（李趙嘉等，2023）。 在其基礎(chǔ)日糧中分別添加0 g/d 的酵母培養(yǎng)物（對照組）、25 g/d 的酵母培養(yǎng)物 （試驗(yàn)組1）、50 g/d 的酵母培養(yǎng)物（試驗(yàn)組2）。 試驗(yàn)為期30 d，分別在第0、15、30 天對各試驗(yàn)組奶牛進(jìn)行泌乳性能與血清炎癥指標(biāo)檢測。結(jié)果表明，在第15 ～30 天內(nèi)，兩試驗(yàn)組奶牛與對照組相比表現(xiàn)出更高的產(chǎn)奶量、乳蛋白和更低的體細(xì)胞數(shù) （P＜0.05）（劉慶等，2023）。 飼喂酵母培養(yǎng)物后，乳脂率在產(chǎn)后30 d和60 d 顯著提高（郭婷等，2023）。 添加3%的酵母培養(yǎng)物可以顯著提高牛奶中的乳脂率 （王衛(wèi)正等，2016）。 本研究觀察到蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物組在第11 天期間乳脂率有提高的趨勢，這一結(jié)果與之前的研究相同。

3.4 蒲公英提取物及其復(fù)合酵母培養(yǎng)物對泌乳牛血常規(guī)的影響 肉牛日糧中添加蒲公英草粉，可顯著提高血清葡萄糖、總蛋白、球蛋白、氯、鈣及堿性磷酸酶（SKP）的含量（P＜0.05）（高雅等，2014）。 在日糧中添加酵母培養(yǎng)物可顯著降低血液中淋巴細(xì)胞數(shù)量， 提升血液中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量， 并有效提升血液中血紅蛋白水平（姚凱勇等，2023）。 酵母培養(yǎng)物組奶牛血清中尿素氮（BUN）和白蛋白（ALB）含量均顯著高于對照組（P＜0.05）。 酵母培養(yǎng)物組奶牛血清谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH-Px） 活性提高0.73 μmol/L （P＞0.05）（李琛等，2021）。 前面研究血液檢測主要在生化指標(biāo)方面， 而本試驗(yàn)檢測的是血常規(guī)，是對反芻動(dòng)物血液指標(biāo)檢測的補(bǔ)充。本研究進(jìn)行了3 次采集， 發(fā)現(xiàn)各項(xiàng)指標(biāo)在不同組之間沒有顯著差異， 這與前人研究結(jié)果不一致。 可能的原因是試驗(yàn)周期較短，各項(xiàng)血液指標(biāo)的差異未顯現(xiàn)出來。

4 結(jié)論

日糧添加蒲公英提取物以及蒲公英提取物復(fù)合酵母培養(yǎng)物均可以有效降低牛奶中體細(xì)胞數(shù)，對治療隱形乳房炎有顯著效果； 蒲公英提取物和蒲公英提取物復(fù)配酵母培養(yǎng)物對乳品質(zhì)及血常規(guī)指標(biāo)無顯著影響。