金雀異黃素通過調控TGF-β1/Smad3 信號通路對2 型糖尿病大鼠心肌纖維化的影響

姜 欣，王 智，王 娟

（1.北華大學附屬醫院心血管科，吉林 吉林 132001； 2.吉林市中心醫院婦科，吉林 吉林 132001）

糖尿病心肌病是導致糖尿病患者心源性休克、心力衰竭甚至死亡的主要因素，是糖尿病最常見的并發癥之一［1-2］。糖尿病心肌病發病因素眾多，機制復雜，目前并沒有闡明確切的機制，但心肌纖維化在糖尿病心肌病發病進程中起著關鍵作用，同時也是引起糖尿病患者心功能降低的主要因素［3］。抑制心肌纖維化對于防治糖尿病心肌病具有深遠意義。

金雀異黃素是大豆異黃酮類化合物，又稱染料木黃酮或染料木素，具有抗炎、抗氧化、抗癌、治療骨質疏松及提高免疫力等多種作用［4-5］。文獻報道金雀異黃素可以通過降低Aβ 蛋白沉積和Tau 蛋白的磷酸化水平，增加神經生長因子和營養因子表達，改善糖尿病小鼠記憶功能障礙［6］； 可以提高腎皮質基質金屬蛋白酶-2/基質金屬蛋白酶抑制劑-1 比值，降低非肌肉型肌球蛋白重鏈表達，延緩糖尿病腎病進展［7］； 可逆轉糖尿病的氧化應激和炎癥，緩解血管功能障礙［8］。但目前為止，金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌纖維化的抑制作用及機制研究鮮有報道。

本實驗通過建立大鼠2 型糖尿病 （type 2 diabetes mellitus，T2DM） 模型，旨在探討金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌纖維化的影響，并闡明潛在的作用機制，從而為糖尿病心肌病的防治提供參考依據。

1 材料

1.1 動物及飼料 雄性SD 大鼠60 只，SPF 級，體質量180～220 g，購自長春市億斯實驗動物技術有限責任公司 ［實驗動物生產許可證號SCXK（吉） 2020-0002］，飼養于吉林醫藥學院動物實驗中心［實驗動物使用許可證號SYXK （吉） 2022-0003］，分籠飼養（5 只/籠），明暗各12 h，相對濕度50% ～60%，室溫23～25 ℃。本研究經北華大學動物倫理委員會批準（倫理號2021021601），符合動物倫理相關規定。高脂飼料由基礎飼料、膽酸鈉、蛋黃粉、豬油及膽固醇構成，各成分比例分別為83.5%、0.5%、5%、10% 及1%，由斯貝福（北京） 生物技術有限公司提供。

1.2 藥物與試劑 金雀異黃素（貨號YYI-023，含量98%） 購自陜西永源生物技術有限公司； 二甲雙胍（國藥準字H20023370，規格0.5 g/片） 購自中美上海施貴寶制藥有限公司。鏈脲菌素（streptozotocin，STZ，貨號18883-66-4） 購自美國Merck 公司； 肌酸激酶同工酶 （creatine kinase isoenzyme，CK-MB，貨號H197-1-2）、天冬氨酸氨基轉移酶 （aspartate aminotransferase，AST，貨號C010-2-1） 及乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH，貨號A020-2-2） 酶聯免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA） 試劑盒均購自南京建成生物工程研究所； Masson 染色試劑盒（貨號R21866-7） 購自上海尚寶生物科技有限公司； TRIzol （貨號15596026）、逆轉錄試劑盒（貨號K1691） 及qPCR 試劑盒（貨號A44360） 購自美國 Thermo Fisher Scientific 公司； Ⅰ型膠原（Collagen Ⅰ，貨號ab21286）、Ⅲ型膠原（CollagenⅢ，貨號ab7778）、轉化生長因子-β1 （transforming growth factor-β1，TGF-β1，貨號ab92486） 及Smad同源物3 （smad homolog 3，Smad3，貨號ab84177）多克隆抗體均購自美國Abcam 公司； 甘油醛-3-磷酸脫氫酶 （glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH，貨號TA-08） 及IgG 二抗（貨號10494-1-AP） 均購自北京中杉金橋生物科技有限公司；DAB 顯色試劑盒（貨號DA10155）、增強型化學發光試劑盒（enhanced chemiluminescence，ECL，貨號SW20305） 均購自北京索萊寶科技有限公司。

1.3 儀器 ZA600R3 型分析天平（上海贊維衡器有限公司）； OneTouch Ⅱ型血糖儀（美國Johnson＆ Johnson 公司）； Vevo 3100LT 型小動物超聲儀（美國 FUJIFILM Visualsonics 公司）； SuPerMax 3100 型酶標儀（上海閃譜生物科技有限公司）；RM2245 型切片機（德國Leica 公司）； 4XC20BD型光學顯微鏡（上海光學儀器廠）； 7500 型qPCR儀（美國ABI 公司）； DYCZMINI4 型電泳設備、DYCZ-TRANS2 型轉印設備（北京六一生物科技有限公司）。

2 方法

2.1 模型建立、分組與給藥 參照高振華等［9］的方法建立T2DM 大鼠模型。將SD 大鼠飼養1 周后，按照體質量隨機分為正常組（10 只） 及高脂組（50 只），正常組大鼠給予基礎飼料喂養，高脂組大鼠給予高脂飼料喂養。4 周后，各組大鼠均禁食12 h，高脂組大鼠腹腔注射35 mg/kg STZ 溶液（用pH 4.5 的檸檬酸鈉緩沖液溶解），正常組大鼠腹腔注射等體積檸檬酸鈉緩沖液。1 周后，測量空腹血糖值，空腹血糖值≥16.7 mmo/L 認為模型建立成功。共有42 只大鼠符合成模標準，將空腹血糖值最高和最低的大鼠各1 只排除，剩余40 只。成模大鼠隨機分為模型組、二甲雙胍組 （100 mg/kg） 及金雀異黃素低、高劑量組 （50、100 mg/kg），每組10 只，其中金雀異黃素給藥劑量參考楊琪等［10］的研究并結合預實驗結果而設定，二甲雙胍給藥劑量參考林心君等［11］的研究。給藥組每天灌胃給藥1 次，連續8 周； 正常組及模型組大鼠灌胃溶媒（0.5% 羧甲基纖維素鈉），灌胃體積均為10 mL/kg。

2.2 體質量、心功能、心臟質量及心臟指數等指標檢測 末次灌胃給藥24 h 后，稱定大鼠體質量。利用動物超聲儀檢測每搏輸出量（stroke volume，SV）、射血分數（ejection fraction，EF）、左心室收縮末期內徑（left ventricular internal diameter endsystole，LVIDs） 及左心室舒張末期內徑 （left ventricular internal diameter end-diastole，LVIDd） 等心功能指標。用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，通過腹主動脈取血，離心分離血清。迅速剖取心臟，反復清洗至無血液，擦干水分后稱定心臟質量，用心臟質量與體質量之比計算心臟指數。血清及心臟均保存于超低溫（－80 ℃） 冰箱。

2.3 血清CK-MB、AST 及LDH 活性檢測 采用ELISA 法檢測血清CK-MB、AST 及LDH 活性，相關操作步驟嚴格按照大鼠CK-MB、AST 及LDH 活性檢測試劑盒的說明書進行。

2.4 心肌纖維化程度觀察 心肌組織經常規固定、脫水、包埋及切片等步驟，根據Masson 染色試劑盒的操作指南進行處理。于光學顯微鏡下觀察，其中呈藍色的為膠原纖維，肌纖維呈紅色，并通過Image-Pro Plus 6.0 軟件分析心肌組織膠原相對面積。

2.5 心肌組織Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白分布及表達檢測 心肌組織經常規固定、脫水、包埋及切片等步驟，于枸櫞酸緩沖液中進行微波修復。在室溫下用3% H2O2孵育30 min，再用5%山羊血清封閉30 min，分別加入稀釋至合適比例的CollagenⅠ（1 ∶ 5 000） 和Collagen Ⅲ（1 ∶5 000） 多克隆抗體，在4 ℃環境下孵育過夜。再加入二抗（1 ∶5 000），在37 ℃環境下孵育30 min； 滴加ABC 工作液，在37 ℃環境下繼續孵育60 min。DAB 顯色后再用蘇木素復染，二甲苯透明后，進行脫水處理，封片。通過Image-Pro Plus 6.0 軟件分析積分吸光度。

2.6 心肌組織TGF-β1、Smad3 mRNA 表達檢測 心肌組織總RNA 采用TRIzol 試劑提取，隨后進行逆轉錄反應，獲得cDNA 模板。按照試劑盒說明書操作，行PCR 擴增反應，所需引物由吉林省庫美生物科技有限公司合成，引物序列見表1。通過2－ΔΔCT方法計算TGF-β1 及Smad3 mRNA 的相對表達量。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

2.7 心肌組織TGF-β1、Smad3 蛋白表達檢測 將組織裂解液預冷，每100 mg 心肌組織加入1 mL 組織裂解液，放入超聲破碎儀中，勻漿后離心收集上清，用二喹啉甲酸法測定蛋白含量。制備的上清液與5×上樣緩沖液混合后，于水浴鍋中煮沸10 min使蛋白變性。取10 μg 蛋白上樣，行10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳，半干法轉蛋白至聚偏二氟乙烯膜，用5% 脫脂奶粉溶液在室溫下封閉1 h。洗膜后，加入稀釋至合適比例的TGF-β1（1 ∶1 000）、Smad3 （1 ∶1 000） 及GAPDH （1 ∶2 500） 多克隆抗體，在4 ℃下孵育過夜。洗膜后，再加入二抗（1 ∶5 000），在室溫下孵育30 min。再次洗膜，滴加ECL 液顯色，曝光后拍照，通過Image J 1.8 軟件分析目的蛋白TGF-β1 及Smad3 相對表達量。

2.8 統計學分析 通過SPSS 22.0 軟件進行處理，計量資料以（±s） 表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 金雀異黃素對糖尿病大鼠體質量、心臟質量及心臟指數的影響 正常組大鼠反應靈敏，毛發光澤，飲水、飲食及尿量均正常； 模型組大鼠活動減少，毛發干枯發黃，飲水、飲食及尿量均增多；各給藥組大鼠上述糖尿病癥狀均有不同程度的緩解。如表2 所示，給藥8 周后，與正常組比較，模型組大鼠體質量降低（P＜0.01），心臟質量無明顯變化 （P＞0.05），心臟指數增加 （P＜0.01）； 與模型組比較，金雀異黃素各劑量組及二甲雙胍組大鼠體質量增加（P＜0.01），心臟質量無明顯變化（P＞0.05），心臟指數降低 （P＜0.05，P＜0.01）。

表2 金雀異黃素對糖尿病大鼠體質量、心臟質量及心臟指數的影響（±s，n＝10）Tab.2 Effects of genistein on weight of the body and heart，and cardiac indices levels in diabetic rats （±s，n＝10）

表2 金雀異黃素對糖尿病大鼠體質量、心臟質量及心臟指數的影響（±s，n＝10）Tab.2 Effects of genistein on weight of the body and heart，and cardiac indices levels in diabetic rats （±s，n＝10）

注： 與正常組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別劑量/（mg·kg－1）體質量/g心臟質量/g心臟指數/%正常組—682.86±49.351.65±0.200.241±0.031模型組—399.32±50.46??1.54±0.130.386±0.045??金雀異黃素低劑量組50438.56±63.71＃＃1.50±0.090.342±0.039＃金雀異黃素高劑量組100552.94±45.54＃＃1.52±0.120.275±0.024＃＃二甲雙胍組100564.30±58.28＃＃1.57±0.160.278±0.033＃＃

3.2 金雀異黃素對糖尿病大鼠心功能的影響 如表3 所示，與正常組比較，模型組大鼠SV、EF 降低（P＜0.01），LVIDs、LVIDd 升高（P＜0.05，P＜0.01）； 與模型組比較，金雀異黃素高劑量組及二甲雙胍組大鼠SV、EF 升高（P＜0.01），LVIDs、LVIDd 降低（P＜0.05，P＜0.01），金雀異黃素低劑量組大鼠SV、EF 升高（P＜0.01），LVIDs 降低（P＜0.05），LVIDd 無明顯變化（P＞0.05）。

表3 金雀異黃素對糖尿病大鼠心功能的影響（±s，n＝10）Tab.3 Effects of genistein on cardiac function of diabetic rats （±s，n＝10）

表3 金雀異黃素對糖尿病大鼠心功能的影響（±s，n＝10）Tab.3 Effects of genistein on cardiac function of diabetic rats （±s，n＝10）

注： 與正常組比較，?P＜0.05，??P＜0.01； 與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別劑量/（mg·kg－1）SV/μLEF/%LVIDs/mmLVIDd/mm正常組—185.10±19.2472.68±8.433.81±0.436.82±0.64模型組—83.61±11.76??45.53±5.27??5.92±0.51??7.56±0.82?金雀異黃素低劑量組50101.33±9.80＃＃52.85±5.66＃＃5.28±0.65＃7.24±0.67金雀異黃素高劑量組100125.79±10.47＃＃59.76±7.19＃＃4.73±0.38＃＃6.70±0.73＃二甲雙胍組100109.32±12.51＃＃61.09±6.38＃＃5.12±0.54＃＃6.75±0.59＃

3.3 金雀異黃素對糖尿病大鼠血清CK-MB、AST及LDH 活性的影響 如表4 所示，與正常組比較，模型組大鼠血清CK-MB、AST 及LDH 活性均升高（P＜0.01）； 與模型組比較，金雀異黃素各劑量組及二甲雙胍組大鼠血清CK-MB、AST 及LDH 活性均降低（P＜0.05，P＜0.01）。

表4 金雀異黃素對糖尿病大鼠血清CK-MB、AST 及LDH 活性的影響（±s，n＝10）Tab.4 Effects of genistein on serum levels of CK-MB，AST and LDH activities in diabetic rats （±s，n＝10）

表4 金雀異黃素對糖尿病大鼠血清CK-MB、AST 及LDH 活性的影響（±s，n＝10）Tab.4 Effects of genistein on serum levels of CK-MB，AST and LDH activities in diabetic rats （±s，n＝10）

注： 與正常組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別劑量/（mg·kg－1）CK-MB/（U·L－1）AST/（U·L－1）LDH/（U·L－1）正常組—619.84±72.4393.48±7.2635.60±4.07模型組—846.65±97.54??169.56±18.67??59.78±6.32??金雀異黃素低劑量組50764.03±68.91＃142.64±12.80＃42.54±5.86＃＃金雀異黃素高劑量組100720.47±83.66＃＃131.22±15.14＃＃33.19±4.36＃＃二甲雙胍組100651.71±51.34＃＃117.09±10.38＃＃35.20±3.15＃＃

3.4 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌纖維化的影響 如圖1 所示，正常組大鼠心肌細胞整齊排列，形態正常，心肌間質幾乎無膠原纖維分布； 模型組大鼠心肌細胞紊亂排列，心肌細胞肥大，部分細胞溶解、腫脹、變形，心肌間質可見膠原纖維大量沉積； 金雀異黃素各劑量組及二甲雙胍組大鼠心肌細胞排列紊亂的現象有不同程度的改善，結構形態較正常，心肌間質膠原纖維沉積情況有所緩解，尤其是金雀異黃素高劑量組及二甲雙胍組更為明顯。通過圖像分析系統進一步分析心肌組織膠原相對面積，結果見表5，與正常組比較，模型組大鼠心肌組織膠原相對面積增加（P＜0.01）； 與模型組比較，金雀異黃素各劑量組及二甲雙胍組大鼠心肌組織膠原相對面積減少（P＜0.01）。

圖1 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌纖維化的影響（Masson，×200）Fig.1 Effects of genistein on myocardial fibrosis in diabetic rats （Masson，×200）

表5 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織膠原相對面積的影響（±s，n＝6）Tab.5 Effects of genistein on relative collagen deposition area in myocardial tissue of diabetic rats （±s，n＝6）

表5 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織膠原相對面積的影響（±s，n＝6）Tab.5 Effects of genistein on relative collagen deposition area in myocardial tissue of diabetic rats （±s，n＝6）

注： 與正常組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃＃P＜0.01。

組別劑量/（mg·kg－1）膠原相對面積/%正常組—2.20±0.37模型組—9.45±1.24??金雀異黃素低劑量組505.86±0.89＃＃金雀異黃素高劑量組1003.21±0.55＃＃二甲雙胍組1003.67±0.61＃＃

3.5 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織CollagenⅠ和Collagen Ⅲ蛋白表達的影響 如圖2、表6 所示，正常組大鼠心肌組織Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白均呈弱陽性表達，在心肌組織中微量存在； 與正常組比較，模型組大鼠心肌組織Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表達均升高（P＜0.01）； 與模型組比較，金雀異黃素各劑量組及二甲雙胍組大鼠心肌組織Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表達均降低（P＜0.05，P＜0.01）。

圖2 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表達的影響（免疫組化，×200）Fig.2 Effects of genistein on protein expressions of Collagen Ⅰand Collagen Ⅲin myocardial tissue of diabetic rats （IHC，×200）

表6 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白積分吸光度的影響（±s，n＝6）Tab.6 Effects of genistein on integrated absorbance of Collagen Ⅰand Collagen Ⅲin myocardial tissue of diabetic rats （±s，n＝6）

表6 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白積分吸光度的影響（±s，n＝6）Tab.6 Effects of genistein on integrated absorbance of Collagen Ⅰand Collagen Ⅲin myocardial tissue of diabetic rats （±s，n＝6）

注： 與正常組比較，??P ＜0.01； 與模型組比較，＃P ＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別劑量/（mg·kg－1） Collagen ⅠCollagen Ⅲ正常組—0.08±0.010.10±0.01模型組—0.21±0.03?? 0.33±0.04??金雀異黃素低劑量組500.17±0.02＃ 0.15±0.02＃＃金雀異黃素高劑量組1000.11±0.01＃＃ 0.13±0.01＃＃二甲雙胍組1000.09±0.01＃＃ 0.12±0.02＃＃

3.6 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 mRNA 表達的影響 如表7 所示，與正常組比較，模型組大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 mRNA表達升高（P＜0.01）； 與模型組比較，金雀異黃素各劑量組大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 mRNA 表達降低（P＜0.01）。

表7 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 mRNA 表達的影響（±s，n＝3）Tab.7 Effects of genistein on mRNA expressions of TGF-β1 and Smad3 in myocardial tissue of diabetic rats （±s，n＝3）

表7 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 mRNA 表達的影響（±s，n＝3）Tab.7 Effects of genistein on mRNA expressions of TGF-β1 and Smad3 in myocardial tissue of diabetic rats （±s，n＝3）

注： 與正常組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃＃P＜0.01。

組別劑量/（mg·kg－1）TGF-β1/GAPDHSmad3/GAPDH正常組—1.02±0.041.05±0.06模型組—2.73±0.32??2.29±0.20??金雀異黃素低劑量組501.68±0.21＃＃1.51±0.18＃＃金雀異黃素高劑量組1001.26±0.17＃＃1.42±0.23＃＃二甲雙胍組1001.54±0.26＃＃1.27±0.14＃＃

3.7 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 蛋白表達的影響 如圖3、表8 所示，與正常組比較，模型組大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3蛋白表達升高（P＜0.01）； 與模型組比較，金雀異黃素各劑量組及二甲雙胍組大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 蛋白表達降低（P＜0.05，P＜0.01）。

圖3 各組大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 蛋白條帶圖Fig.3 Protein bands of TGF-β1 and Smad3 in myocardial tissue of rats in each group

表8 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 蛋白表達的影響（±s，n＝3）Tab.8 Effects of genistein on protein expressions of TGF-β1 and Smad3 in myocardial tissue of diabetic rats （±s，n＝3）

表8 金雀異黃素對糖尿病大鼠心肌組織TGF-β1、Smad3 蛋白表達的影響（±s，n＝3）Tab.8 Effects of genistein on protein expressions of TGF-β1 and Smad3 in myocardial tissue of diabetic rats （±s，n＝3）

注： 與正常組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別劑量/（mg·kg－1）TGF-β1/GAPDHSmad3/GAPDH正常組—0.33±0.050.19±0.03模型組—0.95±0.11??0.87±0.08??金雀異黃素低劑量組500.71±0.09＃0.62±0.04＃＃金雀異黃素高劑量組1000.46±0.05＃＃0.37±0.04＃＃二甲雙胍組1000.53±0.06＃＃0.48±0.05＃＃

4 討論

本研究給予T2DM 模型大鼠金雀異黃素8 周后發現，金雀異黃素可以增加大鼠體質量，減少心臟指數，升高SV、EF，降低LVIDs、LVIDd，同時還可降低血清CK-MB、AST 及LDH 活性，證實了金雀異黃素可以緩解心臟損傷，具有保護心臟功能的作用。

心肌纖維化是糖尿病性心肌病最典型的病理變化，其主要由膠原纖維含量升高、過量沉積或膠原成分發生變化所引起［12］。成纖維細胞是細胞外基質產生的重要來源，在心肌纖維化中起到關鍵作用，是心肌間質纖維化的重要效應細胞［13］。心肌成纖維細胞合成與分泌膠原纖維的主要類型為Collagen I、Collagen Ⅲ、Collagen Ⅳ和Collagen V，其中Collagen I 占80%，Collagen Ⅲ占11%。王振賢等［14］研究發現，白芍總苷可改善糖尿病大心肌組織鼠病理變化，降低心肌組織Collagen I、Collagen Ⅲ表達，抑制心肌纖維化。本研究同樣發現，金雀異黃素可以降低心肌組織膠原相對面積及Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白表達，具有減輕糖尿病大鼠心肌纖維化作用。

TGF-β1/Smad3 信號通路在心肌纖維化與合成心肌膠原過程中起著舉足輕重的作用，目前已成為心肌纖維化研究領域的焦點［15］。TGF-β1 可通過激活下游Smad3 等經典的Smads 途徑，活化心肌成纖維細胞，促進Collagen I 及Collagen Ⅲ的大量分泌，引起心肌纖維化，影響心臟功能［16］。阻斷TGF-β1/Smad3 信號通路能夠有效抑制心肌成纖維細胞的增殖與分化，減少Collagen I 及Collagen Ⅲ的合成，從而緩解心肌纖維化癥狀［17］。竹節參總皂苷能夠使心肌組織中TGF-β1、Smad3 蛋白表達降低，通過調節TGF-β1/Smad3 信號通路改善衰老大鼠心肌纖維化程度［18］。本研究發現，金雀異黃素可以降低TGF-β1、Smad3 mRNA 及蛋白表達，具有抑制TGF-β1/Smad3 信號通路的作用，該作用可能是其減輕糖尿病大鼠心肌纖維化，進而發揮保護心臟效應的潛在機制。金雀異黃素對TGF-β1/Smad3 信號通路的影響已在多項研究中被證實。研究發現，金雀異黃素可以通過降低TGF-β1、Smad3 等蛋白的表達，起到抗糖尿病大鼠腎臟纖維化作用［19］。金雀異黃素也可以通過TGF-β1/Smad3依賴性信號通路緩解雙腎單切高血壓大鼠血管功能障礙和腎臟損傷［20］。

綜上所述，金雀異黃素可以通過抑制TGFβ1/Smad3 信號通路，減輕糖尿病大鼠心肌纖維化，進而發揮保護心臟效應。本研究的相關工作可為糖尿病心肌病提供新的防治靶點，也可為金雀異黃素用于糖尿病心肌病的防治提供一定的實驗依據。