肺癌患者GASP-1、LCN2 和TPX2 的表達水平及其與TNM 分期和預(yù)后的相關(guān)性分析

黃彥澤，文英娟

肺癌是我國患病率相對較高的惡性腫瘤，近年來患病率呈逐年上升趨勢，且病死率居惡性腫瘤的首位。肺癌患者早期癥狀不典型，且具隱匿性，極易有漏診與誤診的情況出現(xiàn)，進而延誤最佳治療時機，增加死亡風(fēng)險［1］。臨床通常用TNM（tumor-nodemetastasis classification）分期對惡性腫瘤的病理進行分類，明確TNM 分期后實施對癥干預(yù)，可抑制癌性病灶擴散，延長生存期限［2］。G 蛋白偶聯(lián)受體相關(guān)分選蛋白1（G protein-coupled receptor-associated sorting protein 1， GASP-1）是G 蛋白偶聯(lián)受體膜蛋白家族的重要成員，主要在細胞膜、細胞質(zhì)中表達，研究發(fā)現(xiàn)GASP-1 具有促血管內(nèi)皮生長因子受體調(diào)控惡性腫瘤的作用［3］。脂質(zhì)運載蛋白-2（lipocalin-2， LCN2）的表達水平與胰島素抵抗、細胞凋亡、血管病變等多個生理、病理過程密切相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)LCN2 表達水平上調(diào)與惡性腫瘤進展相關(guān)［4］。相關(guān)文獻報道，Xklp2 靶蛋白（targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2， TPX2）表達下調(diào)可抑制癌細胞增殖，促進癌細胞凋亡［5］。本研究著重探究肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平及其與TNM 分期和預(yù)后的相關(guān)性，旨在為肺癌病理分期的明確和預(yù)后判斷提供思路。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2019 年4 月至2022 年5 月南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院接受治療的肺癌患者92 例作為觀察組。選取同期92 例健康體檢者作為對照組。將觀察組按預(yù)后情況分為預(yù)后良好組和預(yù)后不佳組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合中華醫(yī)學(xué)會《肺癌臨床診療指南（2022 版）》中診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］；（2）TNM 分期經(jīng)細胞學(xué)或病理學(xué)明確；（3）均首次診斷、確診為非小細胞癌；（4）預(yù)計生存期限≥6 個月；（5）肺癌患者入院前未接受靶向治療、放化療等；（6）入院后接受4 個周期的卡瑞利珠單抗化療；（7）病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴自身免疫系統(tǒng)疾病；（2）合并其他器官惡性腫瘤；（3）伴有認知、語言障礙或精神類疾病，難以配合完成檢查。觀察組男性58 例（63.04%）、女性34 例（36.96%），年齡49～75 歲［（63.49 ± 7.52）歲］，TNM 分期Ⅰ期16 例（17.39%）、Ⅱ期24 例（26.09%）、Ⅲ期30 例（32.61%）、Ⅳ期22 例（23.91%）。對照組男性56 例（60.87%）、女性36 例（39.13%），年齡48～74 歲［（65.14 ± 7.82）歲］。2 組研究對象年齡、性別等基礎(chǔ)資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 采集觀察組入院前、4 個化療周期結(jié)束后以及對照組外周靜脈血樣6 ml，血樣置于37 ℃恒溫水浴中30 min，以LDL-5L 型低速離心機離心15 min，轉(zhuǎn)速3 000 r/min（r=8 cm），取血清，盛裝于EP 管中，貯存于冰箱中待檢［7］。采用ELISA 法及配套試劑盒檢測血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平，其中GASP-1 試劑盒來自上海研尊生物科技有限公司，LCN2 試劑盒來自上海西唐生物科技有限公司，TPX2 試劑盒來自上海澤葉生物科技有限公司。預(yù)后情況評價參考療效評價標(biāo)準(zhǔn)［8］，完全緩解（complete response， CR）為腫瘤病灶完全消除，無其他臨床表現(xiàn)；部分緩解（partial response， PR）為病灶縮小＞50%，未出現(xiàn)新病灶；疾病穩(wěn)定（stable disease， SD）為癥狀未好轉(zhuǎn)，病灶縮小25%～50%；疾病進展（progressive disease， PD）為腫瘤病灶增大或出現(xiàn)新病灶，增大＞25%。預(yù)后良好為CR 及PR，預(yù)后不佳為SD 及PD。評價時間為化療周期結(jié)束后隨訪5 個月。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)通過SPSS 22.0 軟件處理。計量資料以±s 描述，組間比較采用t或F檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）描述，采用χ2檢驗。相關(guān)性采用Spearman 分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組治療前血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平比較 治療前觀察組血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平高于對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 觀察組與對照組治療前血清GASP-1、LCN2、TPX2表達水平比較（±s）

表1 觀察組與對照組治療前血清GASP-1、LCN2、TPX2表達水平比較（±s）

注：GASP-1 為G 蛋白偶聯(lián)受體相關(guān)分選蛋白1，LCN2 為脂質(zhì)運載蛋白-2，TPX2 為Xklp2 靶蛋白

TPX2（ng/μl）6.89 ± 1.85 2.96 ± 0.34 12.870＜0.001組別觀察組對照組t 值P 值例數(shù)92 92 GASP-1（ng/ml）163.49 ± 20.34 31.56 ± 6.71 44.251＜0.001 LCN2（ng/ml）205.11 ± 46.25 86.59 ± 16.24 35.201＜0.001

2.2 不同TNM 分期的患者治療前血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平比較 TNM 分期為Ⅱ期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平與TNM分期Ⅰ期的肺癌患者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；TNM 分期為Ⅲ期、Ⅳ期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平高于TNM 分期為Ⅰ期、Ⅱ期的肺癌患者（P＜0.05）；且TNM 分期為Ⅳ期的患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平均高于TNM 分期Ⅲ期患者（P＜0.05）。見表2。

表2 治療前不同TNM 分期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平比較（±s）

表2 治療前不同TNM 分期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平比較（±s）

注：與Ⅰ期比較aP＜0.05；與Ⅱ期比較bP＜0.05；與Ⅲ期比較cP＜0.05。GASP-1 為G 蛋白偶聯(lián)受體相關(guān)分選蛋白1，LCN2 為脂質(zhì)運載蛋白-2，TPX2 為Xklp2 靶蛋白

TPX2（ng/μl）3.80 ± 0.69 3.97 ± 1.02 7.81 ± 1.62ab 10.62 ± 2.01abc 197.533＜0.001 TNM分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期F 值P 值例數(shù)16 24 30 22 GASP-1（ng/ml）128.64 ± 26.12 130.11 ± 24.27 178.08 ± 19.63ab 202.33 ± 20.17abc 113.567＜0.001 LCN2（ng/ml）169.47 ± 21.86 174.32 ± 22.03 216.35 ± 23.68ab 240.32 ± 41.20abc 5.260＜0.001

2.3 肺癌患者治療后血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平與預(yù)后的關(guān)系 92 例肺癌患者中預(yù)后良好者49 例、預(yù)后不佳者43 例。預(yù)后良好組患者治療后血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平均低于預(yù)后不佳組（P＜0.05）。見表3。

表3 預(yù)后良好組與預(yù)后不佳組患者的治療后血清GASP-1、LCN2、TPX2 水平比較（±s）

表3 預(yù)后良好組與預(yù)后不佳組患者的治療后血清GASP-1、LCN2、TPX2 水平比較（±s）

注：GASP-1 為G 蛋白偶聯(lián)受體相關(guān)分選蛋白1，LCN2 為脂質(zhì)運載蛋白-2，TPX2 為Xklp2 靶蛋白

TPX2（ng/μl）6.25 ± 1.07 10.32 ± 2.06 21.305＜0.001組別預(yù)后良好組預(yù)后不佳組t 值P 值例數(shù)49 43 GASP-1（ng/ml）141.32 ± 22.31 211.35 ± 34.71 34.528＜0.001 LCN2（ng/ml）175.33 ± 16.25 243.56 ± 45.31 32.014＜0.001

2.4 肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平與TNM 分期和預(yù)后的相關(guān)性 肺癌患者治療前血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平均與TNM 分期呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r為0.547、0.545、0.539（P＜0.05）；肺癌患者治療后血清GASP-1、LCN2、TPX2表達水平均與預(yù)后呈負相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r為-0.512、-0.509、-0.522（P＜0.05）。

3 討論

肺癌的發(fā)生、進展是多因素、多途徑共同作用的結(jié)果。當(dāng)前臨床多以癌性病灶的影像學(xué)特征進行腫瘤的初步診斷、判斷，但影像學(xué)檢查圖像受檢測者的主觀影響，可能存在誤診及漏診情況，加之肺穿刺活檢、纖維支氣管鏡等檢查對部分伴禁忌證患者而言難以實施［9-10］。而血清學(xué)檢查的優(yōu)勢明顯，取材便捷、創(chuàng)傷性小、費用相對偏低，在惡性腫瘤病理分期預(yù)判方面具有一定的應(yīng)用價值［11］。

本研究著重探究肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平及其與TNM 分期和預(yù)后的相關(guān)性，旨在為腫瘤臨床肺癌病理分期的明確和預(yù)后判斷提供思路，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相比于對照組，觀察組患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 水平均升高（P＜0.05），表明肺癌患者血清中GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平高于健康人。GASP-1 是近年來新發(fā)現(xiàn)的潛在惡性腫瘤標(biāo)志物，有望成為肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤的靈敏標(biāo)志物。TPX2 基因嚴格調(diào)控極光激酶A（Aurora-A）的活性，精確控制細胞有絲分裂進程，其在乳腺癌、肺癌、膀胱癌等中的表達水平高度異常，癌組織與癌旁組織相比，TPX2 表達水平顯著升高，且其過表達與癌癥預(yù)后不良密切相關(guān)。LCN2 在肺癌患者血清中高表達，與病理組織的分化、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，有望成為一種潛在的用于臨床診斷的新型肺癌腫瘤標(biāo)志物。

分析治療前不同TNM 分期肺癌患者的血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平，結(jié)果顯示，觀察組TNM 分期為Ⅲ、Ⅳ期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平高于TNM 分期為Ⅰ、Ⅱ期的肺癌患者（P＜0.05），且TNM 分期為Ⅳ期的患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平均高于TNM 分期為Ⅲ期的患者（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，GASP-1、LCN2、TPX2 可作為判斷肺癌患者TNM 分期的腫瘤標(biāo)志物。經(jīng)統(tǒng)計，92 例肺癌患者預(yù)后良好者49 例、預(yù)后不佳者43 例。相比于預(yù)后不佳組，預(yù)后良好組患者治療后血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平均下降（P＜0.05），表明當(dāng)肺癌患者預(yù)后良好時，血清GASP-1、LCN2、TPX2 表達水平會降低，而預(yù)后不佳時則會升高。

相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，肺癌患者治療前血清GASP-1、LCN2、TPX2 水平均與TNM 分期呈正相關(guān)（P＜0.05），肺癌患者治療后血清GASP-1、LCN2、TPX2水平均與預(yù)后呈負相關(guān)（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，肺癌患者入院時血清GASP-1、LCN2、TPX2 水平高于正常值，則TNM 分期通常在Ⅲ期與Ⅳ期，經(jīng)過治療后患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 水平降低，一定程度上能反映患者預(yù)后情況。GASP-1 對腫瘤細胞增殖有一定的促進作用，當(dāng)GASP-1 高表達，其通過負向競爭作用降解組織細胞，從而起到促進血管內(nèi)皮生長因子受體調(diào)節(jié)腫瘤的作用，加之癌性腫瘤生長會誘使GASP-1 高表達，進一步將相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件激活，加速癌性細胞遷移［12］。LCN2 通過促進腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移而促進腫瘤的進展，且可調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，其介導(dǎo)的細胞內(nèi)鐵含量抑制腫瘤細胞的凋亡，并能通過與其他蛋白的相互作用調(diào)控腫瘤的進展［13］。TPX2 屬于微管相關(guān)蛋白，參與微管的形成，在一定程度上可促癌性細胞增殖，且具有調(diào)控細胞分裂周期的作用，TPX2 可下調(diào)鈣黏蛋白E 水平，提升癌性細胞侵襲能力。TPX2 高表達會進一步激活強化TLR4 信號，抑制癌性細胞凋亡，提升細胞侵襲能力，在肺癌發(fā)生與進展中作用顯著［14］。

綜上所述，通過檢測肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2 的表達水平，可判斷出其TNM 分期，在對癥治療后檢測上述血清指標(biāo)，可在一定程度上反映患者預(yù)后情況，為臨床醫(yī)師判斷病情與預(yù)后提供參考。