BVDV 非結構蛋白NS4B 的結構分析及其蛋白表達與鑒定

柳凱月，董亞尊，吳雙雙，馬一瑄，劉鴻雁，王北艷，于立權，宋佰芬，馬金柱

（1.黑龍江八一農墾大學生命科學技術學院，大慶 163319；2.中國農業大學動物醫學院）

牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV）為黃病毒科瘟病毒屬的成員[1]，是牛病毒性腹瀉病的病原，會引起牛的流產、先天性缺陷、腸炎、呼吸系統疾病、不孕癥和乳房炎等癥狀[2-6]。BVDV 傳染性極強，呈世界性流行，嚴重阻礙了農場養殖業的健康持續發展，給各個國家的養殖業造成了巨大的經濟損失。

BVDV 是單股正鏈RNA 病毒，全基因組長約12.4 kb，共編碼11 種蛋白，包括4 種結構蛋白和7種非結構蛋白。NS4B 是BVDV 編碼的非結構蛋白之一。研究表明[7-8]，NS4B 是誘導膜交替的完整膜蛋白，可作為形成病毒復制復合物的支架[7-8]。BVDV NS4B蛋白顯著抑制RIG-I 樣受體（RLR）介導的干擾素-β（IFN-β）啟動子活性和內源性MDA5 mRNA 水平，BVDV NS4B 蛋白直接與MDA5 的N 末端CARD 相互作用，定位于細胞質中發揮免疫抑制功能[9]。此外，NS4B 蛋白能顯著抑制RIG-I 或Cardif 誘導的IFNβ 啟動子的激活，而STING 誘導的IFN-β 激活則被NS4B 蛋白抑制，這表明NS4B 蛋白在幫助BVDV 逃逸宿主免疫方面，也發揮著重要的作用[10]。

目前為止，關于牛病毒性腹瀉病毒NS4B 作用機制的研究報道較少。對BVDV ns4b 基因進行了結構分析，該序列全長為1 041 bp，可編碼347 個氨基酸，且編碼的蛋白是疏水性的穩定蛋白。同時成功克隆出BVDV ns4b 基因全長序列，構建了p3×Flag-CMV10-ns4b 真核表達載體，并在HEK-293T 細胞中穩定表達。實驗為后續研究BVDV NS4B 蛋白在抗病毒反應中所發揮的作用奠定了基礎。

1 材料與方法

1.1 生物信息學分析軟件

使用 Prot-Param 在線分析軟件分析 BVDV ns4b 基因編碼的氨基酸組成、理論分子質量、等電點等基本理化性質；……