新型冠狀病毒Nsp1 基因真核表達載體的構建及對宿主蛋白質翻譯的影響

王宏宇，田志飄，劉紅線，鄭亮，3，于雯，吳志軍，Matthew Kay，高振秋，曹宏偉，耿榮慶，張華，，3，4

（1.黑龍江八一農墾大學生命科學技術學院，大慶 163319；2.鹽城師范學院藥學院；3.黑龍江八一農墾大學動物科技學院；4.鹽城師范學院江蘇省腫瘤靶向納米診療材料工程研究中心）

2019 年暴發了由嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）感染引起的新型冠狀病毒肺炎（Coronavirus disease 2019，COVID-19），于2020 年流行至全球，給多個國家和地區人民的生命財產安全帶來巨大威脅[1-2]。截至2022 年9 月，全球報告的COVID-19病例數超過6 億，死亡人數超過650 萬，但疫苗接種率只有68%。而且SARS-CoV-2 基因組仍在不斷地變異，形成多種傳播力強的變異株，對研究高效的疫苗造成了嚴重的困難[3]。

SARS-CoV-2 屬于β 冠狀病毒，是一種有包膜的單股正鏈RNA 病毒[4]。SARS-CoV-2 基因組大約30 kb，包含一個5′-非翻譯區（5′-UTR）、3′-非翻譯區（3′-UTR）和十個單獨的蛋白質編碼開放閱讀框（ORF）。病毒基因組可翻譯出非結構蛋白（Nonstructural protein）、結構蛋白（Structural protein）和輔助蛋白（Accessory protein）3 大類[5-6]。其中，非結構蛋白的ORF 序列位于基因組上游，形成兩個開放閱讀框（ORF1a 和ORF1b），并在蛋白酶作用下水解形成16 個非結構蛋白（Nsp1-Nsp16）[7-8]；結構蛋白由核衣殼（N）蛋白、膜（M）蛋白、包膜（E）蛋白和刺突（S）蛋白組成，結構蛋白和輔助蛋白的ORF 位于基因組下游[9-10]。SARS-CoV-2 的基因組比對其他β 冠狀病毒基因組發現，與SARS-CoV 具有79.5%的序列同一性，但顯然SARS-CoV-2 與SARS-CoV 是不同的，它被認為是一種感染人類的新型β 冠狀病毒[11-12]。

Nsp1 是冠狀病毒編碼的第一個病毒蛋白，基因位于ORF1a 的5′端[13]。Nsp1 基因組長540 bp，蛋白由180 個氨基酸組成，大小為19.78 kDa，等電點5.36[14]。Nsp1 是冠狀病毒的毒力決定因子，是病毒用來確保自身在宿主中復制和傳播的核心武器之一；……