miR-146a及MUC5AC在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織中的表達及臨床意義

王忠巧　高妍　司峰志

【摘要】 目的：探討微小RNA-146a（miR-146a）及黏蛋白5AC（MUC5AC）在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織中的表達及其臨床意義。方法：選取2022年1月—2023年1月新疆醫科大學第二附屬醫院耳鼻喉科所收治的慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者40例（觀察組）及同期因鼻外傷、鼻中隔偏曲、單純鼻竇囊腫接受手術治療患者40例（對照組）。檢測對照組鼻黏膜組織和觀察組鼻息肉組織的miR-146a水平及MUC5AC水平，并分析兩組的VAS評分、鼻內鏡評分，以及鼻息肉組織的miR-146a、MUC5AC表達水平與VAS評分、鼻內鏡評分、炎癥細胞百分比的相關性。結果：觀察組miR-146a水平低于對照組，MUC5AC水平高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）；鼻息肉組織中的miR-146a水平與VAS評分及鼻內鏡評分均呈負相關（r=-0.637、-0.339，P<0.05），而MUC5AC水平與VAS評分及鼻內鏡評分均呈正相關（r=0.525、0.471，P<0.05）；miR-146a的表達水平與嗜酸性粒細胞的百分比呈負相關（r=-0.701，P<0.05），MUC5AC的表達水平與嗜酸性粒細胞百分比呈正相關（r=0.587，P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表達水平與中性粒細胞百分比、淋巴細胞百分比均無相關性（P>0.05）。結論：在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉疾病診斷中，鼻息肉組織的miR-146a水平低表達及MUC5AC水平高表達均提示病情加重，均與組織炎性程度有關。

【關鍵詞】 miR-146a水平 MUC5AC水平 慢性鼻-鼻竇炎 鼻息肉 相關性

The Expression and Clinical Significance of miR-146a and MUC5AC in Chronic Sinusitis with Nasal Polyps/WANG Zhongqiao， GAO Yan， SI Fengzhi. //Medical Innovation of China， 2024， 21（05）： -138

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of microRNA-146a （miR-146a） and mucin 5AC （MUC5AC） in chronic sinusitis with nasal polyps. Method： From January 2022 to January 2023， 40 patients with chronic rhinosinusitis with nasal polyps admitted to the Department of Otolaryngology， the Second Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University （the observation group） and 40 patients with nasal trauma， deflection of the nasal septum， and simple sinus cyst received surgery at the same time （the control group） were selected. The miR-146a and MUC5AC levels in the control group nasal mucosal tissue and the observation group nasal polyp tissue were detected. The VAS score， nasal endoscopy score， as well as the correlation between miR-146a and MUC5AC expression levels in nasal polyp tissue and VAS score， nasal endoscopy score， and percentage of inflammatory cells in both groups were analyzed. Result： The level of miR-146a in the observation group was lower than that in the control group， and the level of MUC5AC was higher than that in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The level of miR-146a in nasal polyps was negatively correlated with VAS score and nasal endoscopic score （r=-0.637， -0.339， P<0.05）， while the level of MUC5AC was positively correlated with VAS score and nasal endoscopic score （r=0.525， 0.471， P<0.05）. The expression level of miR-146a was negatively correlated with the percentage of eosinophils （r=-0.701， P<0.05）， and the expression level of MUC5AC was positively correlated with the percentage of eosinophils （r=0.587， P<0.05）. The expression levels of miR-146a and MUC5AC were not correlated with the percentage of neutrophils and lymphocytes （P>0.05）. Conclusion： In the diagnosis of chronic sinusitis with nasal polyp tissue diseases， the low expression of miR-146a and the high expression of MUC5AC levels indicate an aggravation of the condition and inflammatory degree.

[Key words] miR-146a level MUC5AC level Chronic rhinosinusitis Nasal polyp Correlation

慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉是臨床上較為常見的一類疾病，多因急性鼻竇炎未及時治療或反復發作引發呼吸道感染經久不愈所致，會使得患者出現一定程度的頭昏頭痛、精神萎靡、記憶力退化等癥狀；部分患者會出現鼻塞，且常伴有膿涕、嗅覺減退；病情嚴重者易出現疲乏、食欲下降、注意力不集中、失眠等癥狀，且該病病程一般較長，可長達數十年，并且該病較難治愈，通常會反復發作[1-3]。黏蛋白5AC（MUC5AC）是呼吸道黏液中主要的黏蛋白，在感染、炎癥反應等多種因素的影響下，可通過轉錄、遺傳等多種方式實現表達調控，其為鼻腔及鼻腔黏膜的主要成分，若該物質大量生成則很有可能會導致鼻腔及鼻竇內黏液出現引流障礙，進而使得慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織癥狀加重[4-7]。微小RNA-146a（miR-146a）水平于自身免疫性疾病中的變化或miR-146a基因敲除，均會影響通路相關蛋白的表達，繼而影響疾病的進展[8-11]。于此，本研究將對新疆醫科大學第二附屬醫院耳鼻喉科2022年1月—2023年1月所收治的慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者40例及同期因鼻外傷、鼻中隔偏曲、單純鼻竇囊腫接受手術治療患者40例展開研究，旨在為臨床治療提供借鑒，現研究結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為2022年1月—2023年1月本科所收治的慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉患者40例（觀察組）及同期因鼻外傷、鼻中隔偏曲、單純鼻竇囊腫接受手術治療患者40例（對照組）。納入標準：（1）病癥均符合臨床診斷要求[12]；（2）臨床診斷及病例資料均完善；（3）均于研究開展前留有鼻黏膜或鼻息肉組織待測。排除標準：（1）在納入研究前1個月使用過糖皮質激素；（2）在患有該疾病的同時合并有較為嚴重的臟器類疾病；（3）有鼻炎、哮喘等可能影響研究結果的疾病；（4）精神功能異常或認知功能障礙，不能有效配合本次研究的開展。本研究經醫院醫學倫理委員會審批。患者知情同意本研究。

1.2 方法

miR-146a水平表達檢測：取對照組鼻黏膜組織及觀察組鼻息肉組織展開檢測，試劑盒為miR提取分離試劑盒，測定樣本組織中的miR。使用miR cDNA第一鏈合成試劑盒進行反轉錄反應及合成miR所對應的cDNA，本次所選用的試劑盒均來自北京天根公司。使用miR熒光定量檢測試劑盒進行PCR檢測，根據說明書配置反應20 μL的體系，分別使用miR-146a、U6的特異性引物，于PCR儀上進行40個循環的擴增反應，最后根據循環所得曲線計算miR-146a水平表達結果。在操作過程中應當注意要經常更換新手套，避免皮膚表面的細菌造成待測組織的感染；為防止造成交叉感染，可使用無核苷酸酶的塑料制品及槍頭；RNA于裂解液中不會被RNase降解，但提取后繼續處理時應使用不含RNase的塑料及玻璃器皿。玻璃器皿可于150 ℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min，再以清水清洗，滅菌，便能消除RNase。

MUC5AC水平表達檢測：取對照組鼻黏膜組織及觀察組鼻息肉組織展開檢測，在兩組待測組織樣本中添加RIPA裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的PAGE、Western blot、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（co-IP）和ELISA等。采用BCA試劑盒檢測蛋白含量，將含有20 μg蛋白的樣本用于測定MUC5AC表達，將待測樣本添加SDS-聚丙烯酰胺凝膠，電泳、電轉PVDF膜，5%脫脂牛奶室溫孵育60 min，并依照1∶1 000的比例稀釋稀釋患者的MUC5AC，1∶2 000的比例稀釋二抗，室溫孵育60 min，于凝膠成像系統的顯影中獲得所需的MUC5AC及β-actin的蛋白條帶，其表達水平便可依據蛋白條帶上的灰度值計算。為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用，實驗期間全程佩戴一次性手套。

1.3 觀察指標及評價標準

（1）miR-146a水平及MUC5AC水平。（2）VAS評分：采用VAS評分量表從鼻塞、瘤體、頭痛或頭暈、面部脹痛、嗅覺減退5個項目評價患者的癥狀情況，量表總分為10分，每個項目2分，得分越高即表示患者癥狀越嚴重[13]。（3）鼻內鏡評分：依照Lund-Kennedy評分標準對鼻內鏡展開評分，評價項目包括息肉、水腫、鼻漏、瘢痕、結痂5個方面，每個方面得分0～2分，且兩側均展開評價，該量表總分為20分，得分越高即表示患者病情越嚴重[14]。（4）炎癥細胞檢測：嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和淋巴細胞。

1.4 統計學處理

所得數據運用SPSS 22.0處理，計量資料采用（x±s）進行表述，采用t檢驗，計數資料采用率（%）表述，采用字²檢驗，采用直線相關性分析鼻息肉組織的miR-146a、MUC5AC表達水平與VAS評分、鼻內鏡評分、炎癥細胞百分比的相關性。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組基線資料對比

對照組男24例，女16例，年齡22～70歲，平均（40.68±9.57）歲，病程6～21周，平均（16.17±1.04）周。觀察組男25例，女15例，年齡22～70歲，平均（41.13±9.32）歲，病程5～22 周，平均（17.13±2.12）周。兩組性別、年齡對比，差異均無統計學意義（P>0.05）。

2.2 兩組miR-146a水平及MUC5AC水平對比

觀察組miR-146a水平低于對照組，MUC5AC水平高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.3 兩組VAS評分及鼻內鏡評分對比

觀察組VAS評分及鼻內鏡評分均高于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.4 鼻息肉組織中miR-146a、MUC5AC水平與VAS評分及鼻內鏡評分相關性分析

經直線相關性分析顯示，鼻息肉組織中miR-146a水平與VAS評分及鼻內鏡評分均呈負相關（r=-0.637、-0.339，P<0.05），而MUC5AC水平與VAS評分及鼻內鏡評分均呈正相關（r=0.525、0.471，P<0.05）。

2.5 鼻息肉組織中miR-146a、MUC5AC表達水平與炎癥細胞百分比相關性

鼻息肉組織中的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、淋巴細胞的百分比分別為（7.87±1.48）%、（7.56±1.29）%、（5.52±0.89）%，直線相關性分析顯示，在鼻息肉組織中，miR-146a的表達水平與嗜酸性粒細胞的百分比呈負相關（r=-0.701，P<0.05），MUC5AC的表達水平與嗜酸性粒細胞百分比呈正相關（r=0.587，P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表達水平與中性粒細胞百分比、淋巴細胞百分比均無相關性（r=0.043、0.031、0.014、0.005，P>0.05）。

3 討論

合并鼻息肉的慢性鼻-鼻竇炎是慢性鼻竇炎的一個亞型，鼻息肉在一般情況下會繼發于慢性鼻竇炎，并且還有一部分息肉可能是因為變態反應水腫、不明原因等因素所導致的[14]。患得該疾病會導致患者出現頭暈頭痛、萎靡不振、記憶力變差、疲倦、注意力變差等癥狀。對患者行鼻腔檢查時，常提示中鼻甲呈肥大、水腫或息肉樣變化。鼻竇炎若治療不及時或不當，會累及至鄰近組織器官，也會順管道延伸，繼而影響呼吸系統、消化道[15-17]。黏液過度分泌是慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織的主要特征，黏液中的黏蛋白數量增加將會使得黏液黏性增加且彈性提高，進而使得慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織在發病的過程中病情的進一步加重。黏液高黏彈性主要是因為MUC的存在，呼吸道中MUC主要分為3類：第一類分泌但不聚合的粘蛋白（MUC7）；第二類分泌并聚合形成凝膠的粘蛋白（MUC5AC、MUC5B）；最后跨膜結構域且與細胞表面相關的粘蛋白（MUC1、MUC4、MUC16、MUC20）。其中MUC5AC和MUC5B這兩種分泌性MUC被認為與呼吸道炎性疾病有密切關系，前者主要表達于氣道上皮的杯狀細胞上，后者主要表達于黏膜下腺體內，其中MUC5AC是氣道主要的黏蛋白類型[18-20]。

在本次研究中，觀察組miR-146a水平低于對照組，MUC5AC水平高于對照組；鼻息肉組織中miR-146a水平與VAS評分及鼻內鏡評分均呈負相關，而MUC5AC水平與VAS評分及鼻內鏡評分均呈正相關。miR-146a的表達水平與嗜酸性粒細胞的百分比呈負相關（P<0.05），MUC5AC的表達水平與嗜酸性粒細胞百分比呈正相關（P<0.05），miR-146a、MUC5AC的表達和中性粒細胞百分比、淋巴細胞百分比均無相關性（P>0.05）。因為嗜酸性粒細胞的浸潤或可影響MUC5AC、miR-146a的進一步表達，使得鼻黏膜受到刺激，進而加重患者病情，使得患者VAS評分及鼻內鏡評分提高。臨床相關研究分析ROC曲線后可得，miR-146a及MUC5AC可以作為慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織病情診斷的標志物，對于該疾病的臨床診斷也可以提供借鑒，且miR-146a作為一種非編碼RNA，能在轉錄后對于多種基因的水平進行調節，且其生物學作用廣泛，具有抗炎意義，可靶向抑制EGFR的表達及減少MUC5AC的水平[21]，與本研究結果相似。

上述研究結果表明，慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織病情的引發及加重與miR-146a水平及MUC5AC水平密不可分，且其還參與調控嗜酸性粒細胞的浸潤，是臨床用來研究慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織疾病的一個新靶點。但本次研究僅僅只分析了MUC5AC水平與miR-146a水平在慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉組織中可起到一定的調控作用，但仍未明確其直接調控作用及調控機制，可進一步通過細胞實驗或動物實驗展開進一步的探討。

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