山羊源貝氏柯克斯體抗體間接ELISA檢測方法的建立與應用

張銳錚,于皓同,王凱茸,張 琪,許信剛

(西北農林科技大學動物醫學院,陜西楊凌 712100)

Q熱是由貝氏柯克斯體(Coxiellaburnetii)引起的一種自然疫源性人獸共患傳染病,主要的臨床癥狀表現為支氣管肺炎、高熱以及流產等,是一種嚴格的胞內寄生微生物。C.burnetii屬于變形軍團菌目貝氏柯克斯體屬[1],宿主范圍廣泛,節肢動物是野生動物與家養動物間主要的傳播媒介[2]。C.burnetii通過感染動物的糞便、尿液、陰道分泌物及氣溶膠進行傳播,其中氣溶膠是其傳播的主要方式,傳播范圍廣泛,根據貝氏柯克斯體血清流行病學調查顯示,我國Q熱分布范圍廣泛[3-5]。

血清學檢測是診斷Q熱及一些流行病的主要手段,在大規模流行病學調查中ELISA因靈敏度高、操作簡單則最為常用,現今C.burnetii的ELISA檢測抗原主要由全菌及重組抗原組成[6],C.burnetii全菌抗原需要在高等級生物安全實驗室對C.burnetii進行繁殖純化,制備風險較大,難以批量生產,相比全菌抗原,重組抗原制備風險適宜大批量制備,而com1基因是C.burnetii的外膜蛋白基因,在不同菌株均具有高度的保守性,無論是急性Q熱菌株和慢性Q熱菌株均存在com1基因[7]。本研究擬通過基因克隆、原核表達等方法純化復性C.burnetii外膜抗原com1蛋白,并將重組com1蛋白作為包被抗原,建立一種Q熱間接ELISA檢測試劑盒,進一步豐富Q熱的檢測技術,為Q熱的流行病學調查提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料、菌株和血清 Q熱陽性病料是臨床出現流產母山羊,陰道分泌物通過PCR檢測Q熱為陽性,流產羊血清通過虎紅平板凝集試驗為布魯氏菌血清陰性,陰道分泌物衣原體PCR檢測為陰性?！?br>