弗氏檸檬酸桿菌的鑒定及其藥敏試驗

許國洋,付文貴,付利芝,閆志強,高廣亮,鄧 娟,戴玉嬌,龐麗霞,翟少欽*

(1.重慶市畜牧科學院,重慶 402460;2.重慶市獸用生物制品工程技術研究中心,重慶 402460;3.重慶市潼南區農業農村委,重慶 402660)

弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)是腸桿菌科檸檬酸桿菌屬的一種革蘭氏陰性人畜共患條件性致病菌[1-2]。該菌誘發人、哺乳動物和魚類相關疫病的報道不斷增多[3-14]。2022年9月重慶某規模化豬場40～50日齡斷奶仔豬陸續出現細菌性腹瀉癥狀,糞便呈黃綠色或黃白色,部分仔豬出現精神不振、消瘦等癥狀,對肛拭子樣本進行病原菌分離鑒定,將純化菌株的16S rRNA基因序列在NCBI中Blast比對分析后,初步確定主要為大腸埃希氏菌和弗氏檸檬酸桿菌。研究表明,引起仔豬腹瀉的病原菌主要包括大腸埃希氏菌、產氣莢膜梭菌、豬痢疾短螺旋體和沙門氏菌等[15],關于豬源弗氏檸檬酸桿菌的病原特性研究及其是否會導致仔豬腹瀉罕見報道。本研究擬對從該豬場分離到的弗氏檸檬酸桿菌開展進一步鑒定分析,明確其病原特性和對小鼠的致病性,為該菌致病機理研究和仔豬潛在細菌性疫病防治提供數據支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康昆明小白鼠,6～8周齡,體重28 g±2 g,購自重慶米科斯生物科技有限責任公司。

1.1.2 主要試劑 2×TaqPCR Master Mix、DL 2 000 DNA marker,寶生物工程(大連)有限公司產品;大豆酪蛋白瓊脂(TSA)培養基,上海莼試生物技術有限公司產品;小牛血清(國產),上海啟達生物科技有限公司產品;TIANamp Bacteria DNA Kit、Tiangel Mini Purification Kit,天根生化科技(北京)有限公司產品。

1.1.3 主要儀器 凝膠成像系統(CL750),Thermo公司產品;全自動型生化培養箱(SPX-150B),山東霍爾德電子科技有限公司產品。……