Co-γ射線輻照滅菌對(duì)牡丹皮質(zhì)量影響的多元評(píng)價(jià)研究

毛騰霄 黃春燕 伍欣然 張 良 陳 紅 何 江 黃 敏

（1成都市藥品檢驗(yàn)研究院化學(xué)藥品質(zhì)量研究與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610045；2四川省原子能研究院輻照保藏四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610101）

牡丹皮，別名丹皮、木芍藥、洛陽(yáng)花，為毛莨科植物牡丹（PaeoniasuffruticosaAndr.）的干燥根皮，具有清熱涼血、活血化瘀功能，為《中華人民共和國(guó)藥典2020 年版 一部》［1］收載品種。牡丹皮的產(chǎn)地分布于安徽、重慶、山東［2］、四川和陜西［3］等地。現(xiàn)代藥理研究表明，牡丹皮的藥效成分丹皮酚具有降溫、鎮(zhèn)痛及抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用［4-5］，其水提物具有抑菌作用［6］。牡丹皮質(zhì)量常用的評(píng)價(jià)方法有形態(tài)學(xué)方法［7］、微性狀觀察法、多指標(biāo)性成分測(cè)定法［8］和指紋圖譜對(duì)比法［9］等。

中藥材在流通過(guò)程中儲(chǔ)藏不當(dāng)易受微生物污染［10-11］。60Co-γ輻照滅菌是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的滅菌方法［12］，屬于非熱殺菌技術(shù)，具有穿透力強(qiáng)、消毒均勻、快速簡(jiǎn)單等特點(diǎn)［13］，常用于中藥材或中成藥滅菌處理［14］。我國(guó)對(duì)輻照滅菌有相關(guān)規(guī)定，原中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部于1997 年發(fā)布的《60Co 輻照中藥滅菌劑量標(biāo)準(zhǔn)（內(nèi)部試行）》（衛(wèi)藥發(fā)［1997］第38號(hào)）［15］規(guī)定中藥原料粉輻照的最大吸收劑量不得大于6 kGy，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告《中藥輻照滅菌技術(shù)指導(dǎo)原則》（2015年第86號(hào)）［16］規(guī)定中藥最大總體平均輻照劑量原則上不超過(guò)10 kGy。

牡丹皮是中藥材的一個(gè)單品，因此屬于允許輻照的對(duì)象。前期調(diào)研顯示，成都地區(qū)一些藥品生產(chǎn)企業(yè)在對(duì)藥材進(jìn)行60Co-γ 輻照滅菌時(shí)往往超吸收劑量照射，一般為10～15 kGy，個(gè)別品種可達(dá)30 kGy。輻照后的藥材，如果仍達(dá)不到衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，會(huì)再次照射［17］。

60Co-γ 輻照滅菌對(duì)牡丹皮化學(xué)成分的影響已有報(bào)道。如陳小堅(jiān)［18］采用分光光度法測(cè)定丹皮酚含量，經(jīng)10 kGy 吸收劑量輻照后含量無(wú)變化。范鐵林等［19］研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)10 kGy 吸收劑量輻照后的丹皮酚含量基本不變。李躍輝等［20］采用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測(cè)定了6 kGy吸收劑量輻照后牡丹皮中丹皮酚和芍藥苷含量，認(rèn)為輻照對(duì)其無(wú)影響。上述研究?jī)H對(duì)牡丹皮1～2種化學(xué)成分進(jìn)行了考察，缺乏系統(tǒng)性，且劑量設(shè)置也遠(yuǎn)低于當(dāng)前企業(yè)普遍采用劑量。鑒于此，本研究以牡丹皮為研究對(duì)象，通過(guò)考察不同吸收劑量60Co-γ 輻照前后微生物負(fù)載、HPLC 指紋圖譜、抑菌活性和近紅外光譜變化來(lái)評(píng)價(jià)60Co-γ 輻照滅菌對(duì)牡丹皮質(zhì)量的影響，旨在為其質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

20 批牡丹皮藥材樣品購(gòu)自于成都荷花池中藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地為重慶市墊江縣，經(jīng)成都市藥品檢驗(yàn)研究院中藥材質(zhì)量監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)重點(diǎn)試驗(yàn)室鑒定后備用。

金黃色葡萄球菌［CMCC（B） 26003］，中國(guó)食品藥品檢定研究院（北京）；甲醇（色譜純）和甲酸，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；自配抗生素檢定用培養(yǎng)基Ⅰ（胨5 g、牛肉浸出粉3 g、磷酸氫二鉀3 g、瓊脂15 g、水1 000 mL，滅菌后備用，終pH值7.9）；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（批號(hào)：200224-21），北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters 2695 液相色譜儀，沃特世科技（上海）有限公司；MATRIX-F 在線傅立葉變換近紅外光譜儀，布魯克（北京）科技有限公司；ZY-300Ⅳ多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀，北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開(kāi)發(fā)公司；GHP9270隔水式恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；Rotavapor R-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士BUCHI；AEG 220電子天平（精度：萬(wàn)分之一），島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司；FSJ-A05N6高速粉碎機(jī)，佛山市小熊廚房電器有限公司；Waters 色譜柱（×Bridge C18 5 μm 4.6×250 mm Colum），沃特世（科技）上海有限公司；MNT919102 游標(biāo)卡尺，德國(guó)美耐特。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備 分別取牡丹皮樣品，經(jīng)高速粉碎機(jī)粉碎后，過(guò)60目篩，收集篩出的粉末，全部混勻后用聚乙烯（polyethylene，PE）無(wú)菌自封袋分裝，每批5 袋，每袋100 g。

1.3.2 樣品輻照（60Co-γ） 輻照在四川省輻照中心進(jìn)行，吸收劑量分別設(shè)置為0（未輻照）、5、10、20 和30 kGy。輻照完成后30 d內(nèi)完成各項(xiàng)檢測(cè)。

1.3.3 微生物限度檢查 經(jīng)預(yù)試驗(yàn)選取需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)及耐膽鹽革蘭陰性菌數(shù)超過(guò)《美國(guó)藥典》（USP-NF2023）［21］相關(guān)限量值的3批牡丹皮樣品，分別取其0、5、10、20和30 kGy 5個(gè)吸收劑量的樣品，按照《中華人民共和國(guó)藥典 2020 年版 四部》［22］1108 中藥飲片微生物限度檢查法檢查上述項(xiàng)目，檢查前需按要求進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。

1.3.4 HPLC 指紋圖譜采集 樣品溶液的制備：隨機(jī)選取3 批微生物檢查結(jié)果未超限值（《美國(guó)藥典》USPNF2023）［21］的正常牡丹皮樣品，分別取其0、5、10、20和30 kGy 吸收劑量的樣品，進(jìn)行以下操作。精密稱(chēng)取供試品0.5 g 置于具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，穩(wěn)定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)重并用70%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 mL 置于10 mL 量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，即得。色譜條件：流動(dòng)相為甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（0～10 min，7% A；10～20 min，7%～20% A；20～40 min，20%～40% A；40～60 min，40%～65%A；60～70 min，65%～90% A；70～75 min，90%～7% A），流速1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃。以70%甲醇作為空白溶劑，吸取樣品溶液10 μL，于280 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定，即得HPLC指紋圖譜。

1.3.5 近紅外一致性評(píng)價(jià)模型建立 取全部20 批牡丹皮樣品，每一批分別對(duì)其0、5、10、20 和30 kGy 吸收劑量的樣品使用光纖漫反射探頭進(jìn)行圖譜采集：分辨率8 cm-1，光譜掃描范圍12 000～4 000 cm-1，每個(gè)樣品重復(fù)掃描3 次，同時(shí)采集背景光譜并在每個(gè)檢測(cè)光譜中予以扣除，求取平均光譜。將未輻照（0 kGy）樣品的圖譜設(shè)置為參考光譜，將輻照后樣品的圖譜設(shè)置為測(cè)試光譜，對(duì)預(yù)處理方法、平滑點(diǎn)數(shù)等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，創(chuàng)建一致性評(píng)價(jià)模型。

1.3.6 抑菌活性評(píng)價(jià)模型建立

1.3.6.1 牡丹皮水提物制備 取1.3.4 中的3 批樣品，每一批分別取0、5、10、20 和30 kGy 吸收劑量的輻照樣品制備水提物。稱(chēng)取50 g 至三角瓶中，加500 mL純化水，精密稱(chēng)定質(zhì)量，浸泡30 min 后煎煮，煮沸后用文火再煮40 min，放冷，稱(chēng)定質(zhì)量，加水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，取全部煎煮液，3 000 r·min-1離心5 min，收集全部上清液，旋轉(zhuǎn)濃縮至1 g·mL-1，即得。取金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株適量，接種至100 mL 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，于33 ℃培養(yǎng)24 h，備用（濃度約為107CFU·mL-1）。

1.3.6.2 牡丹皮水提物對(duì)金黃色葡萄球菌活性的量效關(guān)系考察 取直徑為90 mm 的平皿，注入已融化的抗生素檢定用培養(yǎng)基Ⅰ 20 mL，使之在皿底均勻攤布平整，待凝固后作為底層；另取培養(yǎng)基適量，加熱融化后放冷至50 ℃，加入適量金黃色葡萄球菌菌液，使菌液濃度約為105CFU·mL-1，搖勻后分別向每一平皿注入5 mL，使之在底層培養(yǎng)基上均勻攤布平整，放置水平臺(tái)面冷卻后使用。取牡丹皮未輻照（0 kGy）樣品的水提物，用無(wú)菌水梯度稀釋成各種濃度的溶液，各濃度之間劑距為0.8，抑菌圈直徑測(cè)定采用管碟法，取備妥的雙碟若干，每只碟內(nèi)以等距離均勻放置6 個(gè)牛津杯，分別依次加入各種濃度的提取液，用無(wú)菌陶瓦蓋覆蓋后，置36 ℃培養(yǎng)16 h。取出，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑，預(yù)試驗(yàn)完成后，選取適宜的系列濃度重復(fù)3 次試驗(yàn)，取抑菌圈直徑平均值，以濃度劑量為橫坐標(biāo)、抑菌圈直徑大小為縱坐標(biāo)擬合回歸方程。找到水提物劑量和抑菌圈直徑呈線性關(guān)系的劑量范圍。

1.3.6.3 牡丹皮抑菌活性測(cè)定 根據(jù)量效關(guān)系曲線，選取適宜的濃度測(cè)定牡丹皮抑菌活性。測(cè)定每1 批樣品時(shí)，取雙碟6只，各碟內(nèi)間隔的3只牛津杯滴滿某一濃度的水提物（1只為未輻照對(duì)照，另2只為某一劑量輻照樣品），另3 只牛津杯按以上設(shè)置滴滿另一濃度的水提物，按照1.3.6.2量效關(guān)系考察方法進(jìn)行培養(yǎng)和測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用IBM SPSS Statistics 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 60Co-γ輻照滅菌對(duì)牡丹皮微生物負(fù)載的影響

由于《中華人民共和國(guó)藥典 2020 年版 四部》未規(guī)定使用前需煎煮的中藥材或飲片的微生物限度，故參照《美國(guó)藥典》USP-NF2023“非無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)和膳食補(bǔ)充劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”中“使用前用沸水處理的植物”標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。即1 g牡丹皮藥材中需氧菌總數(shù)應(yīng)≤106，霉菌和酵母菌總數(shù)應(yīng)≤104，耐膽鹽革蘭陰性菌應(yīng)≤102。由表1 可知，3 批樣品未輻照（0 kGy）前需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)以及耐膽鹽革蘭陰性菌指標(biāo)均超過(guò)限量值。經(jīng)5 kGy 吸收劑量處理后，各批次1 g 樣品中需氧菌總數(shù)下降至360～540 CFU·g-1，霉菌和酵母菌總數(shù)下降至120 CFU·g-1及以下，耐膽鹽革蘭陰性菌數(shù)量也降至10 CFU·g-1以下。上述結(jié)果說(shuō)明5 kGy60Co-γ 輻照吸收劑量能夠較好地殺滅試驗(yàn)樣品中的微生物。

表1 不同吸收劑量60Co-γ射線輻照對(duì)牡丹皮微生物存活數(shù)的影響Table 1 Effects of different dose of 60Co-γ irradiation on the microorganism of Cortex Moutan/（CFU·g-1）

2.2 60Co-γ輻照滅菌對(duì)牡丹皮指紋圖譜的影響

分別將3 批樣品0、5、10、20 和30 kGy 吸收劑量輻照后測(cè)得的HPLC 圖譜導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)分析軟件（2012.130723 版本）。選擇工作狀態(tài)為生成對(duì)照，將未輻照樣品（0 kGy）設(shè)置為參照?qǐng)D譜，采用多點(diǎn)校正的方式對(duì)各圖譜共有峰進(jìn)行峰匹配，共匹配到56個(gè)共有峰（圖1）。相似度計(jì)算結(jié)果表明，吸收劑量為5 kGy 時(shí)，相似度下降至0.905～0.944；劑量為30 kGy時(shí)，相似度下降至0.864～0.916（表2），說(shuō)明在設(shè)定劑量范圍內(nèi)輻照后，牡丹皮指紋圖譜發(fā)生了變化。

圖1 不同劑量60Co-γ輻照處理后牡丹皮指紋圖譜Fig.1 HPLC fingerprint chromatograms of Cortex Moutan irradiated by different dose of 60Co-γ

表2 不同吸收劑量60Co-γ輻照滅菌后牡丹皮HPLC指紋圖譜相似度Table 2 HPLC fingerprint chromatograms similarity evaluation of Cortex Moutan irradiated by different dose of 60Co-γ

2.3 牡丹皮60Co-γ輻照滅菌近紅外一致性評(píng)價(jià)

由圖2 可知，20 批牡丹皮樣品共得到100 張?jiān)脊庾V，輻照與未輻照樣品難以進(jìn)行區(qū)分。采用OPTUS 5.0 圖譜處理軟件，以20 張未輻照（0 kGy）樣品的光譜作為參考光譜并進(jìn)行平均光譜處理，以平均光譜作為建立一致性模型的基礎(chǔ)。以80 張輻照（5～30 kGy）樣品的光譜作為測(cè)試光譜進(jìn)行驗(yàn)證。模型的預(yù)處理采用二階導(dǎo)數(shù)，平滑點(diǎn)為9。對(duì)建立的模型進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明，所建立的一致性評(píng)價(jià)模型能有效識(shí)別出未輻照的牡丹皮樣品和輻照后的牡丹皮樣品，一致性指標(biāo)（consistency index，CI）值為3.6，且區(qū)分度較大（圖3），說(shuō)明可以通過(guò)建立近紅外一致性評(píng)價(jià)模型對(duì)輻照后的牡丹皮進(jìn)行辨別。

圖2 牡丹皮樣品近紅外光譜圖Fig.2 Near infrared spectrogram of Cortex Moutan samples

圖3 牡丹皮樣品近紅外一致性評(píng)價(jià)模型Fig.3 Near-infrared consistency evaluation model of Cortex Moutan samples

2.4 60Co-γ輻照滅菌對(duì)牡丹皮抑菌活性的影響

對(duì)牡丹皮未輻照樣品不同濃度水提物抑菌圈直徑進(jìn)行測(cè)量（圖4-A），以濃度（C）為橫坐標(biāo)，抑菌圈直徑大小（D）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合。得到量效關(guān)系直線方程式：

圖4 牡丹皮水提物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性Fig.4 The water extract showed inhibitory activity against Staphylococcus aureus of Cortex Moutan

擬合系數(shù)R2=0.985 6，表明當(dāng)牡丹皮水提取物濃度為0.13～0.41 g·mL-1時(shí)，提取物濃度與抑菌圈大小線性關(guān)系良好。

根據(jù)量效關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果，在建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，選擇0.13 和0.41 g·mL-1兩個(gè)濃度，采用管碟法進(jìn)行抑菌活性測(cè)試（圖4-B）。對(duì)于同一批樣品，分別比較在同一濃度下各吸收劑量之間抑菌圈直徑差異（采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析）。測(cè)量結(jié)果如表3所示，同一批樣品不同輻照劑量下的抑菌圈直徑均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。上述結(jié)果表明，輻照未顯著影響牡丹皮水提物對(duì)金黃色葡萄球菌的活性。

表3 牡丹皮水提物對(duì)金黃色葡萄球菌活性抑菌圈直徑測(cè)量結(jié)果Table 3 Measurement results of the diameter of the zone of inhibition of the Staphylococcus aureus/mm

3 討論

3.1 牡丹皮60Co-γ輻照滅菌劑量應(yīng)控制在5 kGy以下

吸收劑量與滅菌效果的量效關(guān)系已有較多報(bào)道［23］。如尚炳嫻等［24］研究了開(kāi)心散最佳60Co-γ 射線輻照工藝，當(dāng)吸收劑量達(dá)到6 kGy 及以上時(shí)能完全殺滅制劑中的微生物。周詩(shī)施等［25］研究發(fā)現(xiàn)，60Co-γ 吸收劑量達(dá)4 kGy 時(shí)，已能完全殺滅紅花生粉中的微生物。為考察不同吸收劑量60Co-γ輻照對(duì)牡丹皮的滅菌效果，本研究選取具有代表性的高負(fù)載微生物樣品進(jìn)行測(cè)試，當(dāng)吸收劑量為5 kGy 時(shí)，衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)均達(dá)到《美國(guó)藥典》USP-NF2023［21］中“使用前用沸水處理的植物”的控制標(biāo)準(zhǔn)；當(dāng)吸收劑量達(dá)到10 kGy 時(shí)，未檢出需氧菌、霉菌和酵母菌及耐膽鹽革蘭陰性菌。因此，在對(duì)牡丹皮進(jìn)行滅菌時(shí)，建議將60Co-γ 吸收劑量控制在5 kGy以下。

3.2 60Co-γ輻照對(duì)牡丹皮化學(xué)成分有一定影響

中藥指紋圖譜是指中藥經(jīng)適當(dāng)方法處理后，應(yīng)用一定手段獲得的能夠標(biāo)示該藥材特征的共有峰圖譜［26］。中藥指紋圖譜能夠反映一些化學(xué)成分的種類(lèi)和數(shù)量，在一定程度上可表征中藥質(zhì)量。本研究HPLC指紋圖譜分析表明，隨著吸收劑量的增加，指紋圖譜相似度呈下降趨勢(shì)，說(shuō)明即使在國(guó)家允許的60Co-γ 吸收劑量下也會(huì)引起牡丹皮樣品某些化學(xué)成分的改變。關(guān)于輻照引起中藥材及制劑HPLC 指紋圖譜發(fā)生變化的結(jié)果已有較多報(bào)道，如張夢(mèng)晨等［27］研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)吸收劑量達(dá)到8 kGy 時(shí)，山藥指紋圖譜中一些共有峰的相對(duì)保留時(shí)間與未輻照樣品相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；蔣桃［28］研究了輻照對(duì)六味安消散的影響，結(jié)果表明，經(jīng)10 kGy 輻照后，樣品HPLC 指紋圖譜與未輻照的相似度降低至0.827。本研究結(jié)果表明，當(dāng)輻照吸收劑量為5 kGy 時(shí)，既可以達(dá)到較好的殺菌效果，又不會(huì)引起牡丹皮指紋圖譜發(fā)生較大改變，可為牡丹皮加工過(guò)程中輻照滅菌的劑量設(shè)置提供參考。

3.3 近紅外一致性評(píng)價(jià)模型可區(qū)分輻照與未輻照牡丹皮

近紅外一致性評(píng)價(jià)模型常被用于藥品質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別等［29-31］。其基本原理是測(cè)定一組參考光譜，計(jì)算參考光譜在各個(gè)波長(zhǎng)的吸光度和標(biāo)準(zhǔn)偏差，將各個(gè)波長(zhǎng)的平均值加減若干倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差作為該波長(zhǎng)的可信區(qū)間［32］。待測(cè)光譜在該波長(zhǎng)下，吸光度與平均值的差值除以標(biāo)準(zhǔn)偏差為一致性指數(shù)，即預(yù)設(shè)置的倍數(shù)值CI，一致性評(píng)價(jià)時(shí)將待測(cè)光譜的CI值與之前設(shè)置的CI 值進(jìn)行比較，可快速判斷測(cè)試光譜與參考光譜的一致性［33］。本研究建立的牡丹皮一致性評(píng)價(jià)模型，采用二階導(dǎo)數(shù)進(jìn)行預(yù)處理，并設(shè)置適宜的平滑點(diǎn)數(shù)以消除背景干擾，能有效區(qū)分輻照與未輻照樣品，未輻照的樣品CI 值小于3.6，而輻照（＞5 kGy）后的樣品CI 值大于3.6。說(shuō)明輻照與未輻照牡丹皮樣品在近紅外光譜上存在差異，推測(cè)輻照引起牡丹皮中含氫基團(tuán)變化，從而導(dǎo)致特征信息改變。

3.4 60Co-γ輻照滅菌對(duì)牡丹皮抑菌活性無(wú)顯著影響

據(jù)報(bào)道，牡丹皮的水提物具有一定的抑菌作用，例如宮毓靜等［34］考察了10種中藥材水提物對(duì)白色念珠菌浮游菌最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）和抑制50%生物膜的作用，發(fā)現(xiàn)僅牡丹皮和高良姜對(duì)白色念珠菌的生物膜有抑制作用。胡永志等［35］將牡丹皮提取物丹皮酚添加到漱口水配方中，發(fā)現(xiàn)其對(duì)牙齦卟啉單胞菌、變形鏈球菌有一定的抑制作用。傅若秋等［36］研究發(fā)現(xiàn)，牡丹皮水提物和醇提物對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和大腸桿菌均有較好的抑制作用。在前期藥敏試驗(yàn)時(shí)，本研究也發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌對(duì)牡丹皮水提物最敏感，故選為試驗(yàn)菌株。參照《中華人民共和國(guó)藥典 2020 年版 四部》［22］“中藥生物活性測(cè)定指導(dǎo)原則”，本研究設(shè)置劑量梯度試驗(yàn)，找到了水提物與抑菌活性呈線性關(guān)系的濃度范圍，并選取適宜濃度對(duì)輻照前后的抑菌活性進(jìn)行了對(duì)比。測(cè)定結(jié)果表明，經(jīng)5～30 kGy 吸收劑量輻照后，牡丹皮水提物對(duì)金黃色葡萄球菌活性未發(fā)生明顯變化，推測(cè)輻照雖然改變了一些化學(xué)成分，但未對(duì)相關(guān)的抑菌成分物質(zhì)產(chǎn)生影響。

4 結(jié)論

本研究基于化學(xué)指紋圖紋-近紅外光譜-抑菌活性分析了60Co-γ 輻照滅菌對(duì)牡丹皮質(zhì)量的影響。結(jié)果表明，輻照會(huì)引起指紋圖譜相似度發(fā)生變化，且與輻照劑量存在一定相關(guān)性；通過(guò)近紅外光譜一致性評(píng)價(jià)模型能較好地區(qū)分輻照與未輻照樣品，說(shuō)明輻照引起牡丹皮含氫基團(tuán)發(fā)生改變；輻照后牡丹皮水提物的抑菌活性未出現(xiàn)顯著變化，推測(cè)與抑菌活性相關(guān)的成分未受到輻照影響。綜上，建議相關(guān)企業(yè)對(duì)牡丹進(jìn)行60Co-γ 輻照滅菌時(shí)將吸收劑量控制在5 kGy 以下。由于輻照應(yīng)用于中藥滅菌的時(shí)間較短，作用機(jī)理等基礎(chǔ)研究薄弱，本研究?jī)H對(duì)上述項(xiàng)目作了考察，今后還應(yīng)收集不同產(chǎn)地樣品，考察60Co-γ 低劑量輻照（＜5 kGy）對(duì)滅菌效果、指紋圖譜的影響；進(jìn)一步在藥效成分、穩(wěn)定性影響方面展開(kāi)研究。