相同提取條件下野生大球蓋菇羊肚菌馬鞍菌多糖含量的比較研究

李文文， 努爾買買提，韓大勇，石 越

（1.伊犁師范大學(xué) 微生物資源保護(hù)與開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆伊寧 835000；2.伊犁師范大學(xué) 生物與地理科學(xué)學(xué)院，新疆 伊寧 835000）

1 概述

1.1 大球蓋菇

1.1.1 大球蓋菇種屬及外形特征

大球蓋菇（Stropharia rugoso-annulata）別稱皺環(huán)球蓋菇（Crinkled global mushroom），隸屬真菌界，擔(dān)子菌亞門（Basidiom ycotina）、層菌綱（Hymenomycetes）、同擔(dān)子菌亞綱（Homobasidiomycetes）傘菌目（Agaricales）、球蓋菇科（Strophariaceae）、球蓋菇屬（stropharia），其子實(shí)體單生、叢生或群生，中等至較大，單個(gè)菇團(tuán)可達(dá)數(shù)千克。菌蓋近半球形，后扁平，直徑5～45 cm；菌蓋肉質(zhì)，濕潤時(shí)表面觸感具有黏性。幼嫩子實(shí)體剛開始為白色，常有乳頭狀的小突起，隨著子實(shí)體長大，成熟菌蓋漸變成紅褐色或暗褐色，老熟后褪為褐色至灰褐色。菌蓋上有纖維狀鱗片，隨著子實(shí)體的生長成熟而逐漸消失。菌蓋邊緣內(nèi)卷，常附有菌幕殘片。菌肉肥厚，色白。菌褶直生，排列密集，初為污白色，成熟后變成灰白色，隨菌蓋平展，逐漸變成褐色或紫黑色。菌柄近圓柱形，靠近基部稍膨大，柄長5～20 cm，柄粗0.5～4.0 cm，菌環(huán)以上接近白色，接近光滑，菌環(huán)以下有黃色細(xì)條紋。

大球蓋菇見圖1。

圖1 大球蓋菇

1.1.2 生活習(xí)性

大球蓋菇適應(yīng)能力較強(qiáng)，高低溫都可生長，但是兩者培育出的菌種外形稍有不同，溫度高時(shí)生長快，菇蓋較小且薄，產(chǎn)量較低。溫度低時(shí)生長慢，菇蓋較厚，菇質(zhì)更高，溫度在25 ℃左右生長環(huán)境較適宜，在子實(shí)體生長期間需要光照，以此來沉淀菇身色素，增加菌種色澤，提高品質(zhì)。

1.1.3 分布地

大球蓋菇在主要分布在我國新疆、臺(tái)灣、香港、四川、陜西、甘肅、云南、吉林、西藏等地。

1.1.4 藥用價(jià)值

大球蓋菇對(duì)人體有較大的好處，子實(shí)體中含有大量的優(yōu)質(zhì)蛋白、多糖及其各種礦物質(zhì)，這些物質(zhì)經(jīng)過血液流通，可清除人體血液中的膽固醇、降血壓、軟化血管，還可促進(jìn)消化，增強(qiáng)人體免疫力。

1.2 羊肚菌

1.2.1 羊肚菌種屬及外形特征

羊肚菌（Morchella esculenta）別稱羊肚蘑、編笠菌、羊肚菜，隸屬真菌界，子囊菌門（Ascomycota）、子囊菌亞門（Ascomycotina）、盤菌綱（Discomycete）、盤菌目（Pezizale）、羊肚菌科（Morchella division）、羊肚菌屬（Morchella），其子實(shí)體菌蓋接近球形、橢圓形或卵形，可高達(dá)10 cm，其頂端鈍圓，菌種表面有類似羊肚狀的凹坑，凹坑深度不定，呈蛋殼色或淡黃褐色，柄近圓柱形，接近白色，中間呈空心，圓筒形。

羊肚菌見圖2。

圖2 羊肚菌

1.2.2 生活習(xí)性

羊肚菌喜低溫、高濕環(huán)境，在這種環(huán)境下易萌發(fā)子實(shí)體，所以野生羊肚菌子實(shí)體的生長時(shí)間一般在每年3—5 月或8—9 月。有研究表明，羊肚菌的野外生長條件主要取決于上一年11—12 月份的降雨量，而羊肚菌生長的快慢取決于當(dāng)年3—5 月份3～5 cm表層土壤溫度是否接近11 ℃。因此，羊肚菌的初生期與初生期地區(qū)的溫度、降雨量和降雨時(shí)間有很大關(guān)聯(lián)。羊肚菌多生長在土壤濕潤或降雨量多而且容易保濕的環(huán)境中。光線對(duì)子實(shí)體的形成有一定的促進(jìn)作用，子實(shí)體的生長發(fā)育具有趨光性。足夠的氧氣和通風(fēng)良好的場(chǎng)所是保證羊肚菌正常生長發(fā)育的必要條件。

1.2.3 分布地

羊肚菌在我國的分布及其廣泛，北至東北三省，南至廣東、福建、臺(tái)灣，東至山東，西至新疆、西藏、寧夏、貴州共28 個(gè)省、市、自治區(qū)。

1.2.4 藥用價(jià)值

羊肚菌含有大量的氨基酸、蛋白質(zhì)、脂類、維生素、碳水化合物及礦物質(zhì)，同時(shí)羊肚菌還含有可提高免疫力與抗腫瘤作用的多糖，且有促進(jìn)腸胃蠕動(dòng)、幫助消化、提神醒腦、補(bǔ)腎壯陽的功效。

1.3 馬鞍菌

1.3.1 馬鞍菌種屬及外形特征

馬鞍菌（Ascomycetes），別稱雞冠子，隸屬真菌界，子囊菌綱（Ascomycetes）、盤菌目（Pezizale）、馬鞍菌科（Saddle bacteria families），其子實(shí)體菌蓋呈馬鞍形，寬約2～4 cm，表面呈褐色或者近乎黑色，菇傘表面光滑或呈卷曲狀，傘邊緣與柄分離，柄呈圓柱形，內(nèi)呈空心狀，長4～9 cm。

馬鞍菌見圖3。

圖3 馬鞍菌

1.3.2 生活習(xí)性

馬鞍菌生長在夏季的4—5 月份，一般叢生，喜炎熱干旱環(huán)境，這種特有的環(huán)境使其肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富。

1.3.3 分布地

馬鞍菌生長時(shí)分為單生或群生，其主要分布在我國新疆、河北、山西、黑龍江、江蘇、浙江、西藏、陜西、甘肅、青海、四川等地。

1.3.4 藥用價(jià)值

馬鞍菌內(nèi)含有大量的蛋白質(zhì)、多糖、皂苷及大量礦物質(zhì)，這些物質(zhì)進(jìn)入人體后激活人體內(nèi)抗體，增強(qiáng)免疫力，其中礦物質(zhì)元素與人體內(nèi)自由基發(fā)生反應(yīng)，延緩人體衰老，同時(shí)馬鞍菌還可調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌，增強(qiáng)人體胰腺功能，可降低糖尿病的發(fā)生率。

2 試驗(yàn)過程

2.1 材料與方法

2.1.1 試驗(yàn)材料

自然曬干子實(shí)體大球蓋菇、羊肚菌、馬鞍菌3 種菌種；葡萄糖、濃硫酸、苯酚、石油醚、95%無水乙醇、三氯乙酸、果膠酶。

2.1.2 儀器設(shè)備

HH-S6 型數(shù)顯恒溫水浴鍋，江蘇金怡儀器科技有限公司產(chǎn)品；UPR-II-15TNZ 型優(yōu)普系列超純水機(jī)，四川優(yōu)普超純科技有限公司產(chǎn)品；RV 8 S096 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海愛郎儀器有限公司產(chǎn)品；H1750R 型高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司產(chǎn)品；DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；TU-1901 型全波段紫外分光光度計(jì)、布氏漏斗，北京譜析通用儀器有限公司產(chǎn)品。

2.1.3 試驗(yàn)方法

取自然曬干的3 種子實(shí)體各20 g，研磨成粉末狀，分3 次倒入濾紙疊好的紙包中，上下封口，將濾紙包塞入提取管中，紙包底部盡量與提取管底端接觸，不可高于虹吸管，將石油醚倒入提取瓶中，其量2/3 左右即可，抽提6～8 h，用玻璃棒蘸取提取管中的石油醚至無脂肪即可。提取結(jié)束后將濾紙包用鑷子夾出放入小燒杯中，將小燒杯放入通風(fēng)櫥中通風(fēng)，待濾紙包干燥以后，將菌種粉末倒入燒杯中，加果膠酶10 mg，蒸餾水60 mL，于40 ℃條件下靜置2 h 后取出，加入蒸餾水100 mL，用玻璃棒攪勻，于100 ℃沸水中水浴2 h，用布氏漏斗進(jìn)行第1 次抽提，第1 次抽提結(jié)束后將濾渣回收，加入蒸餾水100 mL，沸水浴1 h，再次抽提，第3 次加入蒸餾水50 mL，沸水浴30 min 再次進(jìn)行抽提，將3 次濾液合并，將濾液倒入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的1/3 左右，加入濃縮體積后7%的2 mol/L三氯乙酸溶液，充分振蕩使其混合均勻，將其放入4 ℃環(huán)境中靜置15 h 左右，將上清液用膠頭滴管吸出，溫度4 ℃條件下以轉(zhuǎn)速12 000 r/min 離心10 min，將離心后的上清液倒入燒杯內(nèi)，加入3 倍體積的95%的無水乙醇，再次于4 ℃環(huán)境中靜置15 h 左右進(jìn)行分層，將上層液體清除，下層沉淀于60 ℃烘箱烘干即為菌種多糖。

2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精確稱量葡萄糖10 mg，加入蒸餾水定容至100 mL，分別取0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 mL于試管中，加蒸餾水于1 mL，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的苯酚溶液1 mL，硫酸5 mL，靜置10～15 min混合均勻，沸水浴加熱20～25 min，冷卻至室溫，將分光光度計(jì)調(diào)至波長490 nm 處測(cè)吸光度，并繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4。

圖4 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 多糖樣品總含量的測(cè)定

精確稱量粗多糖10 mg，加入蒸餾水定容到100 mL，取多糖溶液1 mL，同上2.2 過程所示，于波長490 nm處測(cè)吸光度，根據(jù)上述葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品總糖含量。

2.4 多糖提取液多糖含量的測(cè)定

精確稱量3 種菌種各1 g，研磨成粉末狀，同2.1 試驗(yàn)方法過程所示，靜置分層以后，取上層清液各1 mL，加蒸餾水定容至100 mL，取此溶液1 mL，同2.2 過程所示，于波長490 nm 處測(cè)吸光度，根據(jù)上述葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出提取液中的糖含量。

3 結(jié)果與分析

3.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

經(jīng)計(jì)算葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=8.247 6X+0.050 8，R2=0.999 1。經(jīng)試驗(yàn)測(cè)定，測(cè)得大球蓋菇的吸光度為0.311，將吸光度帶入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線得大球蓋菇的葡萄糖質(zhì)量濃度為0.032 mg/mL。

3.2 換算因子公式

式中：W1——大球蓋菇菌種粗多糖的質(zhì)量，10 mg；

C1——粗多糖溶液中葡萄糖質(zhì)量濃度，0.032 mg/mL；

D——稀釋倍數(shù)，100。

將上述數(shù)據(jù)帶入公式得換算因子F=3.13。

同上3.1 計(jì)算過程得，羊肚菌吸光度為0.276，葡萄糖質(zhì)量濃度為0.027 mg/mL，換算因子為3.7；馬鞍菌吸光度為0.305，葡萄糖質(zhì)量濃度為0.031 mg/mL，換算因子為3.22。

3.3 多糖含量測(cè)定公式

式中：C2——大球蓋菇多糖提取液中葡萄糖質(zhì)量濃度，0.219 mg/mL（計(jì)算過程同3.1）；

D——稀釋倍數(shù)，100；

F——換算因子，3.13；

W2——大球蓋菇多糖提取液樣品質(zhì)量，1 g。

經(jīng)計(jì)算得大球蓋菇多糖含量為6.7%，羊肚菌多糖含量為8.1%，馬鞍菌多糖含量為7.1%。

4 結(jié)論與分析

4.1 結(jié)論

采用熱水浸提法提取不同菌種多糖，該方法簡(jiǎn)單且效率高，不會(huì)輕易破壞多糖內(nèi)部結(jié)構(gòu)，使得試驗(yàn)結(jié)論更具有真實(shí)性，以3 種不同菌種做比較，測(cè)其多糖含量，以蒸餾水作對(duì)比，采用苯酚硫酸法測(cè)3 種不同菌種的吸光度。由以上結(jié)果分析可得，在同種條件下3 種菌種吸光度不同，即提取的糖含量不同，故多糖總含量不同，羊肚菌多糖含量明顯高于大球蓋菇和馬鞍菌糖含量，其次是馬鞍菌，大球蓋菇糖含量最少，可看出多糖提取液顏色越深，糖含量越高。

多糖提取液見圖5。

圖5 多糖提取液

4.2 分析

造成此結(jié)果可能與不同菌種生長環(huán)境不同或者生長時(shí)間不同，獲得太陽照射時(shí)間或者降雨量有差別，從而使糖含量不同，具體原因還需進(jìn)一步研究。目前，對(duì)多糖的研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)多糖能提高免疫力、抗癌，其中礦物質(zhì)元素與人體內(nèi)自由基發(fā)生反應(yīng)，延緩人體衰老，同時(shí)還可調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌、增強(qiáng)人體胰腺功能，可降低糖尿病的發(fā)生率，可將菌種多糖應(yīng)用到日常生活中。通過3 種菌種多糖做對(duì)比，可知哪種菌種含糖量最高，營養(yǎng)價(jià)值更高，為日后人們進(jìn)一步研究多糖含量奠定基礎(chǔ)。例如，做成提高免疫力功能性飲料或者提高免疫力口服液或者用于食品等，使大自然的產(chǎn)物發(fā)揮最大的作用。菌種多糖無疑會(huì)成為開發(fā)健康產(chǎn)品的最佳原料選擇，市場(chǎng)前景非常廣闊。