分子標記輔助選擇在油菜育種中的應用現狀與展望

摘要： 油菜是我國主要的油料作物之一，除用來滿足人們日常所需的食用油外，油菜還可以作飼料、綠肥、生物柴油等多功能用途。近年來，分子標記輔助選擇（marker-assisted selection，MAS）與傳統育種手段相結合，大幅度地提高了油菜選育效率，加快了油菜產業的育種進程，使得我國油菜育種進入高速穩步發展的狀態，對油菜高產、抗逆及高品質育種具有重要意義。本文以分子標記輔助選擇在油菜育種中的應用現狀為主要內容，比較了分子標記輔助育種和傳統育種的優缺點，介紹了常見的分子標記的類型及特點，分別從油菜產量、品質、抗逆育種、適宜生育期、適應機械化收割、油菜觀花推動旅游經濟發展等方面闡述了分子標記輔助選擇在油菜品種選育方面的應用現狀及分子標記輔助選擇給油菜育種提供的便利，同時分析了分子標記輔助選擇在油菜育種方面的局限性，展望了分子標記輔助選擇在油菜育種上的應用前景和發展趨勢，進一步表明分子標記輔助選擇在油菜育種中的重要性和必然性，為后續我國油菜高效育種提供理論參考。

關鍵詞： 油菜育種；DNA分子標記；分子標記輔助選擇

中圖分類號：S634.303 "文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2024）01-0010-07

油菜（Brassica campestris L.）隸屬于十字花科、蕓薹屬植物，在我國的油料作物生產上具有主導地位。我國油菜種植面積達到726萬hm2，占世界油菜種植面積的1/3［1］。目前我國主栽油菜類型有甘藍型油菜（Brassica napus L.，基因組為AACC，2n=38）、芥菜型油菜（B. juncea，2n=36）、白菜型油菜（B. rapa，2n=20）3類［2］，白菜型油菜可以在我國大部分地方種植，其生育期較短，可以在積溫較低的地方生長，芥菜型油菜主要種植于我國西南、西北、華北一帶，其生育期較長，但具有耐旱、耐貧瘠等特點，甘藍型油菜種植于長江流域一帶，因其具有高產、抗逆等優勢，是我國栽培面積最大的類型，也是推動油菜產業發展最強有力的類型。隨著人民生活水平的提高，人類對食用油的需求量連續上升，我國的油菜籽總產量不能完全滿足我國人民的需求，加之油菜種植面積相對減少，致使我國每年40%～50%的食用油依靠進口，因此，大力發展我國油菜種植是解決國內食用油需求的關鍵途徑，育成高產、高品質、早熟、抗逆、適用于機械化收割、低種植成本的油菜品種是推動油菜產業發展的基礎［3-4］。傳統的油菜育種方式，一般是育種工作者們在親本材料譜中進行田間觀測選出某一個或多個性狀優良的單株，然后再將單株與遺傳背景較優，但在某個或多個性狀有缺陷的材料進行雜交，回交5～6代，再套袋自交，最終獲得可以穩定遺傳的品系。傳統方法往往比較費時、費力，不能滿足目前我國油菜產業發展所需的大量的優良油菜品種的需求。近年來，隨著分子生物學的發展，DNA分子標記作為油菜育種輔助選擇的手段，相比傳統育種而言，分子標記輔助選擇（marker-assisted selection，MAS）技術極大地縮短了作物育種年限，從DNA水平上解析作物的特異性，不受環境影響，使得選育后代能夠穩定遺傳，為實現分子水平上的直接選擇提供了可能［5］。MAS是將分子標記直接應用到作物遺傳育種過程中的一種新型作物選育技術，它的基本原理是利用標記與控制相關性狀的目的基因結合起來，一般表現為目的基因與標記緊密連鎖或者共分離的現象，它可以在某個植物個體的全基因組進行篩選，能夠從基因層面直接篩選出表現特定性狀的個體［6］，該技術不受時間、空間以及環境的限制，通過分子輔助選擇之后，再結合傳統育種的手段進行選育，提高育種效率［7］，隨著國內外分子標記的開發與在育種上的應用，分子輔助選擇育種技術為較復雜性狀的鑒定及重要農藝性狀的聚合奠定了分子選擇基礎。

1 常見分子標記技術分類及特點

分子標記即DNA標記，DNA分子標記是通過分子生物學手段直接獲取生物體基因組核酸序列變異信息的技術，它能夠反映DNA水平上的遺傳差異性，具有操作簡單，準確性和靈敏度高，不受外界環境影響的特點。要想實現分子層面的輔助選擇，分子標記的的開發是輔助選擇的關鍵，隨著現代分子生物學的深入研究，截至目前，分子標記技術已經從第1代更新至第4代分子。如第1代具有代表性的限制性片段長度多態性（restriction fragment length polymorphism，簡稱RFLP）標記，也是最早的分子標記技術［8］，其優點為共顯性的標記，結果可靠，有良好的重現性，是作物遺傳圖譜構建的好方法［9］，缺點為DNA質量的要求較高，試驗成本高，它是基于Southern雜交開展的，操作復雜且費時費力，試驗試劑對人體有害［10］，利用該標記所構建的遺傳連鎖圖譜與目的基因的距離較大［11］，即使該技術出現較早，由于其缺點的存在，制約了該分子標記技術在分子輔助育種中的發展［12］。

繼第1代分子標記技術RFLP之后生物學家們又開發出了第2代分子標記，該類標記是基于聚合酶鏈式反應PCR擴增技術實現標記結果的，如利用隨機引物進行PCR標記的隨機擴增多態性（randomly amplified polymorphic DNA，RAPD）標記，它克服了RFLP標記的缺點，成本低，操作簡單，不需要同位素做標記，安全性較高，但其敏感的反應條件，給試驗結果帶來了不確定性，重現性較差［13］，與RFLP標記類似的標記還有簡單重復序列（inter simple sequence repeat，ISSR），ISSR標記除了具有RFLP標記的優點外，還具有多態性高和穩定性強的特點［14］，第2代分子標記技術中還有利用特異性引物進行PCR擴增展現出DNA多態性的簡單重復序列（simple sequence repeat，SSR），是一種由1～4個核苷酸為重復單位形成的串聯重復序列，每個串聯重復SSR序列兩側一般是相對保守的單拷貝序列［15］，該標記方法在基因組上的多態性較一般標記高，重復性高，且穩定，結果準確，具有共顯性遺傳的特點［16］，但其對擴增條件要求較嚴格，必須探索出精確的退火溫度才能保證進行特異性擴增，達到試驗目的，SSR標記是目前分子標記上應用較廣泛的標記。除此之外，還有特定序列擴增（sequence characterized amplified regions，SCAR）和相關序列擴增多態性（sequence related amplified polymorphism，SRAP）標記技術，其中SCAR標記可由RAPD、SSR、SRAP等標記通過產物回收，并設計特異性引物擴增轉化而來［17］，2代標記技術中還包含一類基于限制性核酸內切酶和PCR擴增的標記，如片段長度多態性（amplified fragment length polymorphism，AFLP）標記和CAPS標記，二者均具有豐富的多態性，AFLP標記僅用少量的引物組合就可以遍布整個基因組，但該標記對DNA的質量要求較高，操作相對SSR標記復雜，成本較高［18-20］。

19 世紀 70 年代中期，DNA末端終止法測序技術的出現，使得人類直接從基因組讀取物種遺傳信息成為可能，隨著各大測序平臺的建立，基于2代測序技術開發的第3代分子標記問世，1996 年，Lander正式提出 SNP 標記，打開了分子標記新大門，它是單個核苷酸變異引起的基因組DNA序列多態性，其遺傳穩定性高、位點豐富且分布廣泛，具有效率高，結果可靠的特點，但開發該標記成本較高［21-22］。該類標記對物種系統進化的研究有很大的輔助作用，該標記技術在生物信息學方面被生命科學研究者認為是一個不可或缺的分子工具［23-25］， 同時，第3代分子標記技術加快了生物遺傳信息的獲得，也為分子輔助育種提供了更可靠的分子水平的選擇依據。

第3代分子標記技術結合輔助選擇技術，推動了作物育種進程飛速發展，隨著分子生物學的高速發展，各大測序平臺的建立，基于3代高通量測序技術開發的第4代標記也被稱為新型分子標記技術問世，如由英國LGC公司開發的用于SNP分型的競爭性等位特異性基因PCR技術（kompetitive alle-specific PCR，KASP）標記，因該類標記技術準確率高，通量靈活，檢測成本低廉等特點［26］，該技術已經被廣泛應用于較大群體的SNP位點分型，特別是對于某些SNP標記數量較少的群體，KASP標記可以精確地對分離群體進行基因分型。陸海燕等利用205份玉米自交系的重測序數據，篩選出多態性較好的SNP位點，再結合側翼序列信息，開發了KASP標記，并利用其中的46份玉米資源進行了驗證，最終開發了一套均勻分布在玉米染色體上的KASP標記，為玉米的SNP分型提供了分析依據和方法［27］。張立國利用已公布的抗病材料ECD04的測序信息與已測序完成的白菜感病材料Chiffu進行基因組信息比對，共獲得3 022 901個SNP位點，在全基因組范圍內對SNP位點進行篩選，分別在染色體A01、A02、A03、A08上選3個SNP位點進行KASP標記設計，最終獲得8個穩定、可靠，對自然群體材料可以精確鑒別的KASP標記，為后續白菜抗病資源的選育提供分子輔助標記［28］。

2 分子標記輔助選擇在油菜育種中的應用

分子標記輔助選擇（molecular marker assisted selection，MAS）技術，是通過篩選與目標性狀緊密連鎖標記或共分離標記來對目標性狀基因型進行選擇，從而快速高效準確地培育鑒定新品種，它包括前景選擇和背景選擇，前景選擇是指對目標性狀的選擇，背景選擇是指對全基因組除目標基因以外的其他部分進行的選擇［29］。隨著分子標記在控制作物相關性狀基因定位方面的研究，DNA分子標記被廣泛應用到了油菜育種上，油菜育種除了以高產、優質、抗逆、適宜各地生育期及適應機械化收割等指標作為育種目標外，油菜的觀光旅游和早熟油菜品種的選育也是重要的育種方向和目標。為了我國南方地區實現稻—稻—油模式，解決冬季田閑置問題，充分利用土地資源，增加農村經濟收入，早熟油菜育種也是油菜產業發展的重中之重［30］。同時為了達到油菜觀花旅游增加各地旅游經濟收入的目的，育成絢爛多彩的油菜花色也成為了油菜育種的重要目標［31］。但油菜育種要適應現如今高速發展的社會經濟以及人們日益增長的物質和精神需求，傳統的育種手段難以配套這個高速發展的時代，加之油菜的大部分農藝性狀均為數量性狀，存在微小多基因控制［32］，利用常規選育手段選育相關農藝性狀基因存在難度，因此，分子標記輔助選育在油菜育種中的應用越來越普遍，開發與油菜相關農藝性狀基因緊密連鎖的各類高效分子標記，可以實現從分子水平的直接篩選，快速獲得控制相關性狀合適的基因型，精確選擇優良株系，也可以選擇優良的分子模塊，精準地通過雜交技術導入受體資源，能夠快速獲得遺傳穩定且性狀優良的品系，進一步加速油菜育種進程［33］。

2.1 分子標記輔助選擇在油菜高產育種中的應用

高產育種一直以來在油菜育種中發揮著重要的指導作用［34］，油菜的經濟性狀主要以油菜籽產量為主，油菜中影響產量性狀的有3個因素，分別為全株有效角果數、每角果粒數、千粒質量，全株有效角果數又被株高、有效分枝數決定，每角果粒數又受角果長制約，千粒質量同樣也受部分性狀影響［35］，所以想要育成高產油菜品種就需要從以上這些經濟性狀去出發，科研工作者就是利用與各個經濟性狀連鎖DNA分子標記開展了一系列油菜高產育種的試驗。彭偉通過構建近等基因系等方法，篩選得到標記BrSF*-101與標記BrSF*-2389，將調控角果長與千粒質量性狀的位點 "qSWP.LA9-1 "鎖定到A9染色體140 kb區間，此區間包含31個候選基因［36］。Shen等通過構建群體，創建近等基因系，利用SNP 分析結合圖位克隆的方法，將控制角果長度和角果質量的單基因定位到A09染色體的98.47 kb 區間上，在本研究中篩選出SSR標記1253和1270，并設計了InDel標記，大大縮短了目標基因 "BnSLA09的距離，在BnSLA09 "的靶區找到2個候選基因 "BnaA09g39470D和BnaA09g55530D "，并對這2個候選基因進行驗證，證明基因 "BnaA09g55530D "是影響角果長度和角果質量的候選基因［37］。因此，在油菜育種過程中，可以選擇具有該位點的植株，從而在角果長和角果質量上提高產量。焦仰苗通過構建DH系群體，根據DH群體株系的基因型構建了遺傳連鎖圖譜，對每角果粒數相關性狀QTL進行初級定位，在A8染色體上定位到1個新的多效性 QTL（un.A8），再根據初定位的側翼標記BM1355和 BM1360 設計InDel標記，最終將調控每角粒數和影響胚珠敗育主效位點un.A8定位于標記BM1668和BM1672 之間，該位點縮短距離到A8染色體的 58.5 kb 區間，該位點的挖掘為通過增加每角粒數途徑實現高產油菜育種提供了分子標記，為分子輔助選育每角粒數多的油菜品種打下分子基礎［38］。

千粒質量是甘藍型油菜單株產量構成的主要因素，是甘藍型油菜遺傳改良的重要目標，通過增大油菜千粒質量來提高油菜產量，是油菜高產的有效方法。Fan等通過構建千粒質量性狀的相關定位群體，在A7染色體上檢測到穩定遺傳的千粒質量QTL位點 "TSWA7b "［39］。張科巧等通過構建群體，篩選標記，構建了遺傳連鎖圖譜結合分子標記輔助選擇等，將千粒質量位點TSWA7b初定位到 4.1 cM［40-41］。孟慶偉根據張科巧和李金果初定位的結果，開發InDel標記，構建遺傳連鎖圖，將QTL位點 "TSWA7b "縮距到190 kb并確定其候選基因為 "Gene8 "［42］。王浩通過構建DH系群體，創建遺傳連鎖圖譜，分別對武漢、荊州兩地群體的千粒質量進行QTL分析，結果表明除 "cqSW.C02-1 "外，所有主效 QTL 的增效等位基因型均來自于大粒親本ZY50。 接著構建近等基因系，設計標記，對QTL ""cqSW.A03-2 ""進行精細定位，在候選基因 "Bna A03g37960D "內檢測到2個與千粒質量顯著關聯的SNPs。對產量相關的5個性狀（單株角果數、每角粒數、主枝角果數、一次有效分枝數和角果長）進行考察，結果表明， "cqSW.A03-2 "對這5個產量相關性狀沒有影響［43］。 綜上所述，在油菜培育過程中，可以選擇含千粒質量位點的植株作為高產油菜選育的基礎資源，進一步育成千粒質量較大的高產油菜品種。

2.2 分子標記輔助選擇在油菜抗逆育種中的應用

油菜抗逆育種是通過提高油菜抗病蟲、抗寒旱、抗鹽堿等途徑選育出高抗、廣適的資源，進一步適應油菜多變的氣候環境。油菜病蟲害、凍害、干旱脅迫、鹽堿土危害是威脅油菜生長、正常成熟和高產的最大因素［44］，如油菜根腫病、菌核病是油菜種植區普遍存在的病害，根腫病主要為真菌病害，危害油菜根，嚴重時可致油菜幼苗枯死［45］，傳統的病蟲害防治辦法就是以化學防治為主，但化學防治對土壤污染和人體危害極大，所以選育高抗油菜品種是新時代油菜育種的重要工作，近年來，利用DNA分子標記輔助選育抗逆油菜資源相繼被報道。戰宗祥等通過回交以及分子標記輔助選擇的方法選育出含有 "PbBa8.1 "位點的抗病品系ZHE226，并開發了與該位點緊密連鎖的分子標記A08-300［46］。付蓉利用與目標基因緊密連鎖的分子標記對目標基因進行定向選擇，將抗病基因 "CRb和Pb Ba8.1 "聚合，獲得農藝性狀優良的抗根腫病高油酸材料［47］。鐘婷婷等開發了一套精準檢測抗感根腫病基因型的KASP標記，用于準確高效快速地篩選抗根腫病甘藍型油菜材料，為了防止油菜菌核病的發生［48］。王轉茸將 "OsPGIP2 "基因通過農桿菌介導法轉入3種不同遺傳背景的甘藍型油菜，試驗結果證明，甘藍型油菜轉入 "OsPGIP2 "基因能夠提高油菜的苗期菌核病抗性且不影響油菜的千粒質量和品質［49］。張姍姍也通過試驗驗證了 "BnTNLR1 "基因的表達可以增強甘藍型油菜對菌核病的抗性。在面對油菜病害，化學防治效果顯著，但同時影響油菜的品質，造成土壤污染和環境破壞，隨著分子育種技術日漸成熟，可以選擇抗病的油菜品種或者選擇相應的分子標記篩選抗病植株，抗病品種是當前油菜生產上防治油菜菌核病最經濟、直接、有效和安全的措施，選擇抗病品種種植，加快育種進程，培育新品種，提高油菜產量［50］。在油菜凍害問題上，趙娜等定位到5個與抗寒相關的QTL位點［51］，袁淑培篩選出3份強耐寒品種：華黃1號、JANPOL、P27，并且利用全基因組關聯分析挖掘到11個與甘藍型油菜耐寒性顯著相關的SNP位點，對甘藍型油菜耐寒育種具有指導意義［52］。

2.3 分子標記輔助選擇在油菜品質育種上的應用

隨著時代的進步，人民生活水平日益提高，油菜育種除了高產目標外，優質這一目標也被加入油菜育種的重點，我國油菜品質育種是從20世紀70年代開始的，主要以“雙低”油菜品種為主，即以低芥酸、低硫代葡萄糖苷為育種方向［53］，隨著歷史的發展，油菜籽在被用作食用油方面，除了要求雙低外，還要求提高油菜籽中的油酸、亞油酸含量，降低飽和脂肪酸和亞麻酸含量［54］。經過育種學家的不懈努力，與有關油菜品質性狀基因緊密連鎖的分子標記被開發出來，并應用到了油菜品質育種上。郭聚領等將分子標記輔助選擇與回交策略相結合，將高油酸優良等位基因 "fad2 "導入到株系中，改良株系的油酸含量，為油菜高油酸育種提供了基礎資源［55］。李旭通過油菜9012AB核不育品種材料，根據序列之間的SNP差異，得到1個共顯性KASP標記，對高油酸核不育系ZH5和ZS9的遺傳相關性進行聚類分析，利用分子標記輔助選擇，將優良基因聚合到品種中，在品質方面改良了該油菜品種［56］。

2.4 分子標記輔助選擇在油菜適宜生育期育種中的應用

我國氣候復雜多樣，從溫度帶分類，可以分為6類，分別為熱帶、亞熱帶、暖溫帶、中溫帶、寒溫帶和青藏高原氣候區，從南到北溫度差異顯著，光照時長不同，降水量各地不均，正是因為各地氣候不同的原因，需要選育出適宜各地種植的油菜品種［57］，我國油菜按照種植時間可分為冬油菜和春油菜，冬油菜主要種植在長江流域及西南地區，春油菜主要種植在我國西北地區，適宜生育期的油菜品種在我國熱帶和亞熱帶地區可以實現1年3熟制“稻—稻—油”模式［58］。在青藏高原地區，每年無霜期較短，生育期長的油菜品種無法正常成熟，所以青藏高原海拔大于3 000 m的地方，主栽本土白菜油菜品種，其生育期短，可以正常成熟，但相比甘藍型油菜，白菜型油菜較短的生育期，限制了它的產量數據，難以滿足青藏高原地區的油菜籽產量需求，因此選育特早熟的油菜品種（甘藍型油菜）在海拔 3 000 m 以上種植，是目前春油菜區油菜育種的重要目標，也是增加高原人民經濟收入的重要途徑［59］。油菜早熟育種在油菜產業發展上屬于較火熱的話題，油菜早熟的前提就是營養生長轉入生殖生長的時間提前，早花即早熟，隨著早花課題的開展，與早花位點緊密連鎖的分子標記也相繼被開發。潘云龍等通過甘藍型油菜NNDH系中定位到 "cqDTFA7a 和 cqDTFC8 ""2個早花主效QTL位點，開發了分別與2個位點緊密連鎖的SSR 標記 G1803、InDel 標記 IA7-4 和SSR 標記 S035、SNP11標記，并利用這4個標記進行資源篩查，進一步利用含有不同位點的資源進行基因聚合，最終獲得了含雙早花位點且開花期較短的甘藍型油菜資源，為后續早熟油菜育種提供優良資源，并為MAS技術在甘藍型春油菜早熟育種中的應用打下了基礎［60］。

2.5 分子標記輔助選擇在油菜適應機械化收割育種中的應用

第1次綠色革命發生的主要特征是水稻高稈變矮稈，作物經歷綠色革命后，農業機械化水平逐步提高，也大大降低了生產成本。隨著我國勞動力的缺乏，近些年來，油菜收獲缺乏勞力問題日益突出，因此選育適應機械化收割的油菜品種成為油菜育種的主要任務［61］， 油菜花序一般表現為無限花序，其生長特點為在適宜的生長環境中，頂端分生組織可以不斷地分化出花蕾，致使油菜株高較高，熟期不一致等，這制約了油菜機械化收割的發展，為了選育出適應機械化收割的油菜品種，育種家們必須要降低油菜株高，解決熟期不一致的問題。2017年，Li等發現了有限花序性狀的甘藍型油菜，并對其相關基因進行精細定位，開發出與甘藍型油菜有限花序形狀基因緊密連鎖的標記10359、SC09-45、C092-6 等， 利用這些標記可以在油菜苗期進行有限花序基因型的篩選，盡早排除顯性純合或雜合基因型的單株，有目的地進行有限花序資源的選育工作，加速有限花序性狀油菜品種的育種進程，同時也加快了適應機械化收割的油菜新品種的選育［62］。

2.6 分子標記輔助選擇在油菜花色方面的應用

花瓣顏色是油菜作物的一項重要性狀指標，因其易于區分且穩定遺傳，在品種純度鑒定和性狀轉移等方面顯得尤為重要。隨著基因組學的發展，人們對油菜發色展開研究并且應用于旅游產業方面［63］。淡亞彬初定位到橘紅花色基因在甘藍型油菜A9連鎖群上，心葉紫色基因在C6連鎖群1.1 Mb的區間上［64］。接著，姚艷梅等利用SSR和AFLP等標記，將橘紅花色基因 "Bnpc2 "定位在1.86 cM區間并且選育出1個甘藍型油菜橘紅花色恢復品系4750R，進行了三系配套，審定了甘藍型油菜雜交種青雜15號［65］。在油菜花色的應用上，從各個省份一年一度的油菜花旅游節可看出油菜花色應用的商機和前景。由傳統的生態農業轉化到了現代觀賞農業，做到食用和觀賞兩不誤，還帶動了當地經濟的發展。

3 分子標記輔助選擇在油菜育種中的問題與展望

目前，分子標記輔助育種已經應用于油菜品種選育的各個方面，科研工作者們也開發了大量與作物農藝性狀或標記性狀連鎖的分子標記，為目標基因的定位和油菜品種鑒定等提供了高效快速的途徑，但MAS技術在油菜品種選育方面也存在一定的局限性：開發的標記大多集中于質量性狀，數量性狀有關的標記較少；在實際應用過程中，部分油菜農藝性狀受基因調控較為復雜，并且受多基因控制，有些開發的標記只能用于基因定位，而不能應用于油菜分子輔助選育；針對油菜高產育種，目前篩選挖掘到利于油菜產量提高的基因較少，相應的功能基因較少，對應的分子標記尚未開發，開發的分子標記難以應用到育種中，限制了油菜高產育種的快速發展；部分開發的分子標記可以應用到油菜分子選育，但準確度不夠，不能達到精準選擇的目的，造成部分優良資源流失；分子輔助選育在育種過程中，也會出現隨著選育代數的增加，準確率變低的問題。即使分子輔助選育在油菜育種應用中存在一定的問題，但分子標記輔助選擇育種技術是我國作物品種選育技術中一個重要的組成部分，對于該技術在育種上的應用，相比于傳統選育方式，它具有很大的優勢，隨著分子生物學的發展，開發越來越多的與油菜相關農藝性狀緊密連鎖的標記是油菜育種基礎研究的重要工作，除了開發大量的分子標記外，還需要追求分子標記的質量，如基因功能區的分子標記開發等，相信解決了分子輔助選擇在育種上應用的一系列問題，將會推動油菜產業進一步快速發展，選育出農藝性狀更加優良的新品種。

參考文獻：

［1］ 涂金星，張冬曉，張 毅，等. 我國油菜育種目標及品種審定問題的商榷［J］. 中國油料作物學報，2007，29（3）：350-352.

［2］王建林，欒運芳，大次卓嘎，等. 中國栽培油菜的起源和進化［J］. 作物研究，2006，20（3）：199-205.

［3］張 毅. 我國油菜生產及油料需求分析［J］. 農業技術與裝備，2009（13）：14-16.

［4］劉后利. 油菜遺傳育種學［M］. 北京：中國農業大學出版社，2000.

［5］張浩文.甘藍型油菜高油酸分子標記輔助育種［D］. 長沙：湖南農業大學，2012：4-7.

［6］倪西源，黃吉祥，柳 寒，等. 應用分子標記輔助選育甘藍型油菜雜交種的可行性［J］. 浙江大學學報（農業與生命科學版），2017，43（2）：173-182.

［7］石笑蕊. 利用分子標記輔助選育甘藍型油菜高油酸恢復系及不育系［D］. 武漢：華中農業大學，2018：9-15.

［8］付增娟. 甜菜抗叢根病種質資源的鑒定與評價［D］. 呼和浩特：內蒙古農業大學，2008：11-15.

［9］趙 君，于長虹，云生園. RFLP分子標記技術及其在植物育種中的應用［J］. 內蒙古農業科技，1999，27（增刊1）：49-51.

［10］ 孟金陵，田志宏，傅廷棟，等. 用RFLP標記分析甘藍型油菜的遺傳多樣性［J］. 遺傳學報，1996，23（4）：293-306.

［11］馬占強，林良斌. 分子標記技術在油菜育種中的應用［J］. 分子植物育種，2004，2（5）：728-732.

［12］周延清. DNA分子標記技術在植物研究中的應用［M］. 北京：化學工業出版社，2005：123-139.

［13］ 胡學軍，邱正明，李金泉. RAPD分子標記技術及其在十字花科蔬菜研究中的應用［J］. 湖北農業科學，2005，44（3）：107-110.

［14］唐 楠，保艷霞，唐道城. ISSR分子標記在白芥和芥菜型油菜品種鑒定中的應用［J］. 分子植物育種，2018，16（19）：6365-6371.

［15］姜格格. 小麥“中國春”——長穗偃麥草7E易位系的分子細胞遺傳學鑒定［D］. 哈爾濱：哈爾濱師范大學，2014：5-31.

［16］郭瑞星，劉小紅，榮廷昭，等. 植物SSR標記的發展及其在遺傳育種中的應用［J］. 玉米科學，2005，13（2）：8-11.

［17］劉 瀛，唐 維. SCAR分子標記在甘藍型油菜S單倍型分類中的應用［J］. 現代農業科技，2010（1）：29-30.

［18］侯富恩，楊瑪麗，趙統敏，等. 與抗TYLCV基因連鎖的AFLP標記篩選及CAPS標記的轉化［J］. 江蘇農業學報，2011，27（5）：1047-1052.

［19］王 斌，翁曼麗. AFLP的原理及其應用［J］. 雜交水稻，1996，11（5）：27-30.

［20］王曉濤，姚志剛，甕巧云. AFLP分子標記技術及其應用［J］. 農技服務，2010，27（8）：1099-1100.

［21］Lander E S.The new genomics：global views of biology［J］. Science，1996，274（5287）：536-539.

［22］周龍華，蔣立希. SNP分子標記及其在甘藍型油菜中應用的研究進展［J］. 農業生物技術學報，2016，24（10）：1608-1616.

［23］桑世飛，王 會，梅德圣，等. 利用全基因組SNP芯片分析油菜遺傳距離與雜種優勢的關系［J］. 中國農業科學，2015，48（12）：2469-2478.

［24］汪文祥，儲 文，梅德圣，等. 基于SNP遺傳圖譜定位甘藍型油菜分枝角度QTL［J］. 作物學報，2019，45（1）：37-45.

［25］高愛保，肖 劍，吳登俊. SNPs基因分型技術［J］. 生物技術，2004，14（3）：63-65.

［26］楊青青，唐家琪，張昌泉，等. KASP標記技術在主要農作物中的應用及展望［J］. 生物技術通報，2022，38（4）：58-71.

［27］陸海燕，周 玲，林 峰，等. 基于高通量測序開發玉米高效KASP分子標記［J］. 作物學報，2019，45（6）：872-878.

［28］張立國. 白菜抗根腫病KASP分子標記開發與資源材料鑒定［D］. 烏魯木齊：新疆農業大學，2022：29-55.

［29］張俊英，蔣美艷，江建霞，等. 甘藍型油菜顯性核不育系的分子標記輔助選擇［J］. 核農學報，2018，32（11）：2119-2125.

［30］張堯鋒，余華勝，曾孝元，等. 早熟甘藍型油菜研究進展及其應用［J］. 植物遺傳資源學報，2019，20（2）：258-266.

［31］李梁平. 花海旅游地農戶景觀油菜種植行為研究——以江西婺源為例［D］. 南昌：江西農業大學，2016：37-41.

［32］鄭本川，崔 成，李浩杰，等. 長江流域甘藍型油菜育種親本農藝性狀的遺傳變異、相關及主成分分析［J］. 南方農業學報，2019，50（10）：2196-2204.

［33］柳海東，趙緒濤，杜德志. 利用QTL-seq技術定位甘藍型春油菜早花位點cqDTFC8及其近等基因系構建［J］. 植物生理學報，2020，56（2）：219-234.

［34］譚祖猛，李云昌，胡 瓊，等. 分子標記在油菜雜種優勢利用中的研究進展［J］. 植物學通報，2008，43（2）：230-239.

［35］石柳柳. 甘藍型油菜角果長和粒重主效QTL ""qSLWA9 "的克隆與功能分析［D］. 武漢：華中農業大學，2019：2-17.

［36］彭 偉. 甘藍型油菜粒重和角果長多效性主效QTL- "qSWPL.A9-1 "的精細定位和細胞學機制解析［D］. 武漢：湖北大學，2016：16-29.

［37］Shen W H，Qin P，Yan M J，et al. Fine mapping of a silique length and seed weight-related gene in Brassica napus［J］. Theoretical and Applied Genetics，2019，132（11）：2985-2996.

［38］焦仰苗. 甘藍型油菜每角粒數主效位點 "un.A8 "的精細定位和候選基因分析［D］. 武漢：華中農業大學，2021：36-66.

［39］Fan C C，Cai G Q，Qin J，et al. Mapping of quantitative trait loci and development of allele-specific markers for seed weight in Brassica napus［J］. Theoretical and Applied Genetics，2010，121（7）：1289-1301.

［40］張科巧. 甘藍型油菜千粒質量QTL ""TSWA7a和TSWA7b "的精細定位［D］. 武漢：華中農業大學，2014：16-30.

［41］李金果. 甘藍型油菜千粒質量QTL ""TSWA7b "的精細定位［D］. 武漢：華中農業大學，2015：19-30.

［42］孟慶偉. 甘藍型油菜千粒質量QTL ""TSWA7b "的精細定位和候選基因鑒定［D］. 武漢：華中農業大學，2016：19-34.

［43］王 浩. 甘藍型油菜千粒質量的遺傳分析和主效QTL ""cqSW.A03-2 "的精細定位［D］. 武漢：華中農業大學，2020：56-71.

［44］陳 良. 油菜抗逆相關基因的鑒定和功能研究［D］. 武漢：華中師范大學，2011：4-19.

［45］王燕燕，楊植全，楊慶勇，等. 油菜根腫病抗性遺傳改良與應用［J］. 華中農業大學學報，2021，40（2）：1-5.

［46］戰宗祥，江瑩芬，朱紫媛，等. 與位點 "PbBa8.1 "緊密連鎖分子標記的開發及甘藍型油菜根腫病抗性育種［J］. 中國油料作物學報，2015，37（6）：766-771.

［47］付 蓉. 分子標記輔助選擇在油菜抗根腫病和高油酸育種中的應用［D］. 武漢：華中農業大學，2019：16-33.

［48］鐘婷婷，郭詩芬，盧文斌，等. 甘藍型油菜抗根腫病KASP標記開發和利用［J］. 華北農學報，2021，36（4）：184-190.

［49］王轉茸. 超表達 "OsPGIP2 "提高油菜菌核病抗性及其防衛反應機理的解析［D］. 武漢：華中農業大學，2018：39-83.

［50］張姍姍. 甘藍型油菜菌核病抗性基因 "BnTNLR1 "功能研究［D］. 太原：山西大學，2020：25-30.

［51］趙 娜，郎麗娜，盧 虹，等. 甘藍型油菜抗寒相關基因的QTL初步定位［J］. 華北農學報，2016，31（5）：14-20.

［52］袁淑培. 油菜種質資源耐寒性鑒定與全基因組關聯分析［D］. 北京：中國農業科學院，2019：8-38.

［53］劉 成，馮中朝，肖唐華，等. 我國油菜產業發展現狀、潛力及對策［J］. 中國油料作物學報，2019，41（4）：485-489.

［54］姚 琳，孫 璇，咸拴獅，等. 甘藍型油菜籽粒油酸、亞油酸、亞麻酸和蛋白質含量變異及相關性分析［J］. 中國糧油學報，2021，36（5）：82-87.

［55］郭聚領，石笑蕊，辛 強，等. 分子標記輔助選育甘藍型油菜高油酸pol TCMS不育兩用系及其恢復系［J］. 中國油料作物學報，2021，43（3）：418-425.

［56］李 旭. 分子標記輔助選擇改良油菜核不育系［D］. 武漢：華中農業大學，2019：24-41.

［57］苘娜娜，蔣寧飛，黃惠芳，等. 不同油菜品種的比較試驗分析［J］. 農業與技術，2020，40（21）：42-44.

［58］王靜馳. 甘藍型油菜高產和低產品種離子組差異及其對低磷脅迫的響應［D］. 武漢：華中農業大學，2021：52-60.

［59］張曉梅，姚艷梅，徐 亮，等. 青藏高原早熟甘藍型春油菜遺傳資源研究［J］. 植物遺傳資源學報，2011，12（3）：374-380.

［60］潘云龍，柳海東. 甘藍型春油菜早花位點 "cqDTFA7a "加密及其近等基因系構建［J］. 分子植物育種，2019，17（21）：7047-7057.

［61］崔海龍，翟珊珊，劉常龍. 油菜機械化收割不同種植方式與密度試驗［J］. 安徽農學通報，2015，21（2）：88-89.

［62］Li K X，Yao Y M，Xiao L，et al. Fine mapping of the Brassica napus ""Bnsdt1 ""gene associated with determinate growth habit［J］. Theoretical and Applied Genetics，2018，131（1）：193-208.

［63］任 韻，朱建方，馬善林，等. 我國彩色油菜育種及在生態農業中的應用［J］. 浙江農業科學，2018，59（2）：165-167，170.

［64］淡亞彬. 甘藍型油菜橘紅花色基因和心葉紫色基因的初步定位［D］. 西寧：青海大學，2016：19-27.

［65］姚艷梅，張亞妮，杜德志.甘藍型油菜橘紅花色基因 "Bnpc2 "緊密連鎖標記的開發及其應用［J］. 分子植物育種，2021，19（11）：3638-3645.

收 稿日期：2023-07-04

基金項目：“帥才科學家負責制”項目（編號：2022-NK-170）。

作者簡介：何鳥飛（1991—），女，云南宣威人，碩士研究生，研究方向為春油菜分子生物學。E-mail：1601005580@qq.com。

通信作者：杜德志，碩士，研究員，博士生導師，研究方向為春油菜分子遺傳育種。E-mail：qhurapa@126.com。