Lp-PLA2基因多態性與高血壓大動脈粥樣硬化性腦梗死的風險關聯

豆峰 李丹丹 張秋艷

榆林市星元醫院神經內科，榆林 719000

腦梗死尤其是高血壓大動脈粥樣硬化性腦梗死（hypertensive large artery atherosclerotic stroke，LAAS），是全球范圍內致殘率和病死率極高的疾病之一［1］。此類腦梗死通常與大動脈粥樣硬化病變相關，而高血壓則是其主要的風險因素［2］。近年來，隨著分子遺傳學的發展，研究人員發現基因多態性在許多心血管疾病的發生發展中扮演關鍵角色。 脂蛋白相關磷脂酶A2（lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2）是與心血管疾病緊密相關的酶類之一［3］，在動脈粥樣硬化病變形成中起著重要作用。Lp-PLA2 的活性受到其基因多態性的影響，并影響其在心血管疾病中的表達和功能。盡管如此，目前關于Lp-PLA2 基因多態性與高血壓LAAS 的風險關聯的研究還相對有限［3］。鑒于此，本研究通過分析Lp-PLA2 基因多態性與高血壓LAAS的風險關聯，旨在揭示這一特定基因變異與疾病風險之間的潛在關系，有助于更好地理解高血壓和LAAS 的遺傳基礎，還為疾病的預防、早期診斷和治療提供新的思路。

資料與方法

1.一般資料

本研究為前瞻性研究。選取榆林市星元醫院神經內科2020 年1 月至2023 年1 月收治的以LAAS 住院的106 例高血壓患者作為病例組。（1）納入標準：符合《中國腦血管診治指南與共識》［4］中LAAS 診斷標準；臨床和影像學（如CT 或MRI）資料確診；患者及家屬能夠提供書面知情同意。（2）排除標準：有小血管病變或心源性腦梗死病史；未控制的嚴重心臟疾病、肝腎功能衰竭或惡性腫瘤。病例組中男53 例，女53 例，年齡（75.07±7.13）歲，體質量（74.60±10.25）kg；體質量指數（BMI）（23.73±4.06）kg/m2，心率（75.32±8.34）次/min；血液檢查：血紅蛋白（145.00±15.00）g/L；白細胞計數（7.07±2.10）×109/L；生化指標：丙氨酸氨基轉移酶（ALT）（30.34±14.30）U/L，肌酐（1.10±0.30）mg/dl。

同期從體檢中心選取160例與病例組一般資料相符的高血壓患者作為對照組。對照組男80例，女80例，年齡（74.72±6.60）歲，體質量（75.11±10.75）kg，BMI（24.15±3.20）kg/m2，心率（72.35±8.25）次/min；血液檢查：血紅蛋白（150.55±20.65）g/L；白細胞計數（6.45±1.55）×109/L；生化指標：ALT（25.20±10.50）U/L，肌酐（0.95±0.25）mg/dl。（1）納入標準：只納入診斷為高血壓的個體；參與者能夠理解研究內容并簽署知情同意書。（2）排除標準：嚴重心臟病、肝病或腎病等；嚴重的精神疾病或認知功能障礙。

本研究通過榆林市星元醫院醫學倫理委員會審批通過（倫理審批號：2019-05）。

2.方法

于入院次日清晨空腹狀態下采集患者靜脈血5 ml作為檢測樣本，使用含2%乙二胺四乙酸（EDTA）（生產廠家：北京華威銳科化工有限公司；規格：100 g，純度：100%）的真空采血管進行抗凝處理，將樣本進行編號并登記，隨后存放于-20 ℃的低溫冰箱中以備后續分析。將樣本自-20 ℃的冰箱中取出，在室溫下自然解凍。應用全血基因組DNA 提取試劑盒（生產廠家：上海源葉生物科技有限公司），按照說明書進行DNA 的提取操作。提取得到的DNA 樣品應保存于-80 ℃的超低溫冰箱中以防降解。通過文獻復習及數據庫檢索，選定Lp-PLA2 基因的特定SNP 位點（R92H）進行研究 。 R92H 引 物 序 列 包 括 正 向 引 物 5’-CAATCACCACAGGCAGCCTAA-3’，反 向 引 物 5’-TCCCATCCAACTCAGAATGG-3’。 在聚合酶鏈反應（PCR）儀器中，使用設計的引物對所選位點進行擴增，以獲得足夠數量的DNA 片段。將PCR 擴增產物進行3%瓊脂糖凝膠電泳（生產廠家：北京賽百奧科技有限公司），以確認擴增效果。將PCR 產物進行限制性內切酶消化后，使用含溴化乙啶（生產廠家：湖南匯百侍生物科技有限公司，純度：95.00%）的3%瓊脂糖凝膠電泳以鑒定酶切產物。根據電泳帶型分析R92H位點的多態性，確定不同基因型分布。

3.統計學方法

本次研究數據皆采用SPSS 26.0 軟件進行統計與分析。男性、糖尿病、高脂血癥、冠心病、吸煙、飲酒等計數資料以例（%）表示，Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢測采用χ2檢驗；BMI、體質量、年齡等符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。通過logistic 回歸分析Lp-PLA2 基因多態性與高血壓LAAS 的風險關聯性，以P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

1.一般資料比較（表1）

表1 兩組高血壓患者一般資料比較

兩組的年齡、男性、BMI、體質量比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）；兩組的糖尿病、高脂血癥、冠心病、吸煙、飲酒患者例數比較，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

2.R92H位點基因型和基因頻率比較（表2）

表2 兩組高血壓患者Lp-PLA2基因R92H位點基因型和基因頻率比較[例（%）]

病例組和對照組的Lp-PLA2 基因R92H 位點基因型分布均符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律（均P＞0.05）。病例組和對照組R92H位點基因型和基因頻率比較，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

3.高血壓LAAS危險因素logistic回歸分析（表3）

表3 高血壓患者發生大動脈粥樣硬化性腦梗死的危險因素logistic回歸分析（266例）

經logistic 回歸分析顯示，R92H 位點基因型RR 和基因頻率是高血壓LAAS 的獨立危險因素（均P＜0.05）；糖尿病、高脂血癥、冠心病、吸煙、飲酒均是高血壓LAAS的危險因素（均P＜0.05）。

討論

腦梗死為常見的腦血管疾病，發病時腦部血流受阻，導致腦組織缺血缺氧，最終引起腦細胞損傷或死亡［5-8］。近年來，研究集中在揭示腦梗死的多種病理生理機制，特別是動脈粥樣硬化的發展及其與遺傳因素的關聯［9-11］。在這個領域，Lp-PLA2 基因的多態性已成為研究的焦點［12-14］。Lp-PLA2 是一種與血漿脂蛋白結合的酶，其在動脈粥樣硬化和心血管疾病中的作用已得到廣泛研究［15-18］。相關研究顯示，Lp-PLA2 基因多態性與多種心血管疾病的風險增加有關，包括心肌梗死和腦梗死［19-21］。特別是R92H 位點的多態性，已被認為是影響Lp-PLA2 活性和表達的關鍵遺傳因素。然而，關于Lp-PLA2 基因多態性與LAAS 風險之間的關聯，目前的研究還存在局限性，包括樣本量不足、人群遺傳背景的差異，以及對相關生物標志物作用機制的理解不充分等［22-23］。鑒于動脈粥樣硬化是腦梗死的主要病理基礎，深入探索與之相關的遺傳因素，尤其是Lp-PLA2基因多態性，對于理解腦梗死的病理生理機制至關重要。本研究通過對R92H 位點多態性與LAAS 風險的關聯進行詳細分析，旨在提供更深入的見解，從而促進對這一復雜疾病的理解和治療。

在探討Lp-PLA2 基因R92H 位點多態性與高血壓LAAS風險關聯的研究中，著重考慮了Lp-PLA2在病理生理機制中的作用及其與LAAS 發展的關聯。Lp-PLA2 是磷脂酶A2超家族的一員，因能水解血小板激活因子而被稱為血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。Lp-PLA2 通過調節血脂代謝，可導致血管炎癥［24］。因此，其在血管炎癥性疾病中的作用已得到廣泛研究。Lp-PLA2主要由成熟淋巴細胞和巨噬細胞產生，約2/3 與低密度脂蛋白（LDL）結合，作用于氧化磷脂，水解氧化LDL 中的磷脂。這一過程產生的磷脂酰膽堿和氧化的非酯化脂肪酸，均是強烈的致炎和促動脈粥樣硬化因子，可引發炎癥反應，導致斑塊形成和改變動脈壁性質，最終引起動脈壁的粥樣硬化和變化。活化斑塊中的巨噬細胞、T 淋巴細胞和肥大細胞會產生更多的Lp-PLA2，炎性介質也相應增多［25-26］。此外，作為生物炎癥標志物，Lp-PLA2 與其他炎癥指標相比，具有早期識別、高度特異性和檢測方便的特點［27］。因此，近年來Lp-PLA2 已被作為一種可動態觀測的炎癥指標，應用于心血管疾病的診斷和治療中［28］。在本研究中，R92H 位點的RR 基因型與LAAS風險顯著相關，暗示該基因能通過影響Lp-PLA2的活性或表達水平而改變動脈粥樣硬化的過程［29］。R92H 位點的變異導致Lp-PLA2 的活性增加或表達模式改變，進而加劇了動脈內皮功能障礙，促使斑塊形成及其不穩定性增加，導致腦梗死風險增加。除了遺傳因素，本研究還強調了糖尿病、高脂血癥、冠心病、吸煙和飲酒等傳統危險因素在LAAS 中的作用，這些因素會加劇動脈粥樣硬化和炎癥反應，與Lp-PLA2 基因的多態性相互作用，從而增加LAAS 的風險。周輝和趙琳琳［30］在探討超重和肥胖男性吸煙與血清Lp-PLA2 水平之間的相關性中得出，每日吸煙量在10～30 支的組別與血清Lp-PLA2 水平呈正相關，而每日吸煙量小于10 支或超過30 支的組別則無相關性；吸煙年限在5 年以上的組別與血清Lp-PLA2 水平呈正相關，而吸煙不足5 年的組別無相關性；肥胖男性吸煙與血清Lp-PLA2 水平存在相關性。糖尿病和高脂血癥通過影響血管內皮細胞功能和脂質代謝，可增強Lp-PLA2活性，加劇動脈粥樣硬化的進程。

綜上所述，Lp-PLA2 基因R92H 位點多態性與高血壓LAAS風險關聯的研究已取得顯著進展，但受限于樣本量和人群遺傳背景的異質性，其普適性和可靠性有待提高。研究需擴大樣本量，深入探究Lp-PLA2的分子機制，并綜合考慮遺傳與環境因素，以便更全面地評估和理解LAAS的風險因素。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明豆峰：醞釀和設計試驗，實施研究，采集數據，分析/解釋數據，起草文章，對文章的知識性內容作批評性審閱，統計分析，獲取研究經費，行政、技術或材料支持，指導，支持性貢獻；李丹丹：醞釀和設計試驗，實施研究，采集數據，分析/解釋數據，起草文章，對文章的知識性內容作批評性審閱，統計分析，支持性貢獻；張秋艷：醞釀和設計試驗，實施研究，采集數據，分析/解釋數據，起草文章，對文章的知識性內容作批評性審閱，統計分析，獲取研究經費，支持性貢獻