不同培養基和貯藏溫度對柳樹花粉萌發率與花粉活力的影響

郭冰娟 高杰

摘要：為研究柳樹花粉萌發率在不同培養基和不同貯藏溫度下的表現，試驗以速生柳、絳柳、金絲垂柳3種柳樹花粉作為研究對象，將蔗糖、瓊脂、硼酸組成不同比例的9個培養基，設4、15、25、35 ℃ 4個貯藏溫度，分析不同培養基和不同貯藏溫度對柳樹花粉萌發率與花粉活力的影響。結果顯示，10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養基對速生柳花粉萌發率具有促進作用。在25 ℃溫度條件下貯藏30 d時，3種柳樹花粉活力仍能保持較高水平，說明25 ℃溫度條件有利于柳樹花粉的萌發與貯藏。試驗結果為：速生柳采用10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養基，絳柳、金絲柳采用15%蔗糖+1%瓊脂+0.15%硼酸的培養基，在25 ℃溫度條件下培養和貯藏，可促進柳樹花粉萌發，保持和提高花粉活力。

關鍵詞：柳樹；培養基；貯藏溫度；花粉萌發

中圖分類號：S792.12

文獻標識碼：A

柳樹為楊柳科柳屬植物，喬木或直立灌木。柳樹枝呈圓柱形，無頂芽，葉多為披針形，狹而長，葉柄短；花序直立，與葉同時開放，或早于葉開放；苞片有毛或無毛，稀早落；種子多為暗褐色，規格較小。柳樹喜光、喜濕、耐寒，可以在惡劣的生態環境下生長，壽命為20～30年。柳樹在我國廣泛種植，品種較多，因此不同柳樹品種對花粉采集、種子貯藏的要求不同。研究不同培養基和不同貯藏溫度對促進柳樹花粉萌發具有一定的參考價值。

1? 材料和方法

1.1? ?試驗地點

試驗在河南省封丘縣林木種植基地進行，試驗地位于河南省東北部，地處黃河沖積扇形平原的北半部，位于北緯34°53′～35°14′、東經114°14′～114°46′之間，屬暖溫帶大陸性季風氣候，夏季高溫多雨，冬季寒冷干燥，年平均氣溫13.9 ℃，年平均降水量615.1 mm，年平均日照時數2 117 h，全年無霜期214 d[1]。

1.2? ?試驗設計

試驗于2020年3月21日上午采集花粉，以速生柳、絳柳、金絲垂柳3種柳樹花粉作為試驗對象，選擇不同柳樹品種比較健壯的花枝，每個品種選擇10株花枝，剪下后插入玻璃瓶中，加入清水進行培養，等待花枝開花。花枝開花后，將花序剪下放置硫酸紙上，在室溫條件下自然晾干，次日通過花粉篩篩取花粉，將其放入瓶中，標注好采集品種與采集時間。將采集的花粉分成4份，分別放在4、15、25、35 ℃溫度條件下避光貯藏，并記錄貯藏1、2、5、10、15、20、25、30 d的花粉情況，再將花粉放到不同比例的培養基中培養24 h，對花粉萌發情況進行觀察后記錄數據，每個處理重復3次。

花粉培養基由不同比例的蔗糖、瓊脂、硼酸組成，共設9個處理（D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8、D9，表1）。按設計配制好花粉培養基，用玻璃棒蘸取培養基溶液，之后滴入凹載玻片中間，用毛筆蘸取花粉，將花粉彈在載玻片上，通過顯微鏡觀察花粉是否分布均勻，再將雙凹載玻片放到鋪設2層濕潤濾紙的培養皿中，后放到25 ℃光照培養箱中進行培養，將光照強度設置為2 000 Lx。

1.3? ?測定項目

1.3.1 花粉萌發率 測定不同培養基下的花粉萌發率。從每個培養基處理中隨機選取3個樣品進行觀察，每個樣品的花粉粒數量應在100粒以上，根據花粉管長度≥花粉粒直徑，可以判斷花粉是否萌發。花粉萌發率計算公式：

花粉萌發率（%）[2]= 萌發的花粉數 ×100花粉總數

1.3.2 花粉活力 測定不同培養基下的花粉活力。

從每個培養基處理中隨機選取3個樣品進行觀察，采用TTC染色法測定花粉活力。先準備好載玻片，用毛筆輕蘸少量花粉，將其均勻彈在載玻片上，滴入不同比例的營養液，再將載玻片放到恒溫箱中，恒溫箱溫度設置為25 ℃，持續15 min，

通過顯微鏡觀察載玻片上花粉的顏色，花粉顯示紅色表示有活力，花粉顯示無色表示無活力。花粉活力計算公式：

花粉活力（%）= 有活力的花粉數量 ×100總花粉數量

1.4? ?數據統計與處理

通過EXCEL 2010軟件整理相關資料和數據，采用SPSS 16.0軟件進行數據處理和分析[3]。

2? 結果與分析

2.1? ?不同培養基對柳樹花粉萌發率的影響

由表2可知，不同柳樹花粉萌發率在不同培養基下存在顯著差異（P＜0.05）。在瓊脂比例一定的條件下，不同柳樹花粉萌發率受蔗糖的影響最大，其次是硼酸。蔗糖比例（15%）相同時，相同柳樹花粉平均萌發率差異不顯著（P＞0.05），

其中速生柳花粉最高萌發率出現在D6處理，絳柳花粉最高萌發率出現在D5處理，金絲垂柳花粉最高萌發率出現在D6處理。培養基中，添加10%～15%蔗糖處理的不同柳樹花粉平均萌發率顯著高于添加20%蔗糖處理。

2.2? ?不同培養溫度對柳樹花粉萌發率的影響

由表3可知，不同柳樹花粉萌發率在不同培養溫度下表現顯著差異（P＜0.05）。速生柳、絳柳、金絲垂柳花粉最高萌發率出現在25 ℃培養溫度下，花粉萌發率分別為（57.3±5.7）%、

（68.7±12.2）%、（75.9±7.4）%，其次是在15 ℃培養溫度下，花粉萌發率分別為（52.5±6.0）%、（58.3±12.9）%、（67.7±3.2）%，均顯著高于35 ℃培養溫度下的花粉平均萌發率（P＜0.05）。不同柳樹花粉最低萌發率出現在4 ℃培養溫度下，其中速生柳花粉平均萌發率為（10.7±1.0）%，絳柳、金絲垂柳花粉基本不萌發，說明低溫條件下，3種柳樹的花粉萌發效果較差。

2.3? ?不同貯藏溫度對柳樹花粉活力的影響

從圖1～圖3可以看出，不同柳樹花粉活力在不同貯藏溫度下表現顯著差異（P＜0.05）。隨著貯藏時間的延長，不同柳樹花粉活力隨之下

降，在25 ℃貯藏溫度條件下，速生柳、絳柳、金絲垂柳隨著貯藏時間的延長花粉活力下降較為平緩；貯藏30 d時，3種柳樹花粉活力仍能保持在較高水平，明顯高于4、15、35 ℃貯藏溫度條件下的花粉活力，說明25 ℃貯藏溫度較適于保持和提高柳樹花粉活力[4]。

3? 結論與討論

試驗表明，不同培養基和貯藏溫度對柳樹花粉萌發率具有不同的影響。在不同培養基和不同貯藏溫度下，柳樹花粉萌發率表現顯著差異（P＜

0.05）。蔗糖不僅是花粉萌發的營養物質來源，同時也是花粉萌發的能量來源[5]。在花粉離體培養過程中，不同柳樹品種對培養基中添加的蔗糖濃度要求也不同。試驗表明，花粉萌發和生長也需要在培養基中添加適量的硼酸，這與一些學者的研究結論一致。

試驗顯示，在培養基中添加10%～15%蔗糖處理的3種柳樹花粉平均萌發率顯著高于添加20%蔗糖處理，由于柳樹品種不同，因此適宜的培養基也不同。在不同培養溫度條件下，25 ℃培養溫度的3種柳樹花粉平均萌發率顯著高于其他培養溫度的處理。在25 ℃貯藏溫度條件下，速生柳、絳柳、金絲垂柳隨著貯藏時間的延長，其花粉活力下降速度較為平緩；貯藏30 d時，3種柳樹花粉活力仍能保持較高水平，明顯高于4、15、35 ℃貯藏溫度條件下的花粉活力。試驗結果表明，在柳樹花粉萌發過程中，速生柳采用10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養基，絳柳、金絲柳采用15%蔗糖+1%瓊脂+0.15%硼酸的培養基，在25 ℃溫度條件下培養和貯藏，均可提高柳樹花粉萌發率，有利于柳樹花粉活力的保持和提高。

柳樹花粉在低溫干燥的條件下，長期貯藏（30 d）后仍能保持較高的活力，這說明低溫干燥條件對花粉貯藏十分有利。此外，溫度、光照、濕度也是影響柳樹花粉萌發率和花粉活力的重要因素。

參考文獻

[1] 李婷，喬琦，李劍峰，等．牡丹花粉生活力測定方法

及其貯藏研究進展[J]．貴州農業科學，2020，48（9）：123-126.

[2] 郭娟，邱帥，劉華紅，等．4種冬青屬植物花粉離體

培養基篩選和貯藏條件的研究[J]．西北林學院學報，2018，33（6）：118-126.

[3] 王偉偉，姚玲，何開躍，等．不同柳樹花粉離體培養

及活力測定方法比較研究[J]．江蘇林業科技，2018，45（4）：1-7.

[4] 王源秀，江聰，徐立安．柳樹花粉生活力分析[J]．林

業科技開發，2007，21（1）：28-30.

[5] 劉巍，茼勝軍．柳樹遺傳改良研究進展[J]．遼寧林業

科技，2012（1）：45-48.