CD28、CD117、CXCL12在多發(fā)性骨髓瘤患者髓外浸潤及其預后中的應用價值

蔡永梅

河南省濟源市人民醫(yī)院檢驗科,河南濟源 459000

多發(fā)性骨髓瘤是一種發(fā)生于B細胞分化終末階段漿細胞異常增生的惡性腫瘤,隨著惡性增生的漿細胞的分化,可導致骨質受損并引起免疫功能異常[1-2]。有報道顯示,多發(fā)性骨髓瘤隨病情進展可發(fā)生髓外浸潤,促使組織、器官發(fā)生病變,誘發(fā)溶骨性損傷、高鈣血癥、腎損傷等嚴重病癥,對患者預后恢復造成嚴重影響[3-4]。因此,積極探討多發(fā)性骨髓瘤早期評估診斷方案具有重大意義。CD28為骨髓瘤細胞及細胞外基質相互作用的信號分子,其表達與漿細胞增殖、擴散密切相關,而CD117為一種酪氨酸激酶受體,多表達于髓系干祖細胞,在正常漿細胞中無表達[5-6]。趨化因子配體12(CXCL12)為基質細胞衍生因子,可通過與特異性配體CX-CR4相互作用,調控造血干細胞遷移、歸巢等,與腫瘤復發(fā)、轉移均存在緊密聯(lián)系[7]。但目前臨床鮮有通過上述因子早期評估多發(fā)性骨髓瘤的相關研究,基于此,本研究擬分析CD28、CD117、CXCL12在多發(fā)性骨髓瘤患者髓外浸潤及其預后危險分層中的應用價值。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究經本院醫(yī)學倫理委員會審核批準(批號：202002013)。選取2020年5月至2022年5月于本院就診的96例多發(fā)性骨髓瘤患者作為研究對象。患者及其家屬均知曉本研究,并簽訂知情同意書。納入標準：符合《中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南(2015年修訂)》[8]中多發(fā)性骨髓瘤的相關診斷標準;經影像學檢查、病理活檢等證實發(fā)生髓外浸潤者;初次入院確診治療;可接受本研究檢查方案。排除標準：合并其他血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤者;合并肝、腎等重大臟器功能障礙者;合并凝血功能障礙、彌散性血管內凝血無法配合骨髓活檢者;合并全身性感染疾病、循環(huán)系統(tǒng)疾病者;合并精神異常或檢查依從性較差者。

1.2方法

1.2.1標本采集與檢測 入院后患者均于空腹狀態(tài)下采集5 mL靜脈血加入抗凝管中,采用等量磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋,加入3～5 mL淋巴細胞分離液,室溫下采用深圳瑞沃德生物科技公司M1416R型離心機(離心半徑為10 cm)以3 000 r/min的速度離心處理吸出白膜層,加入10倍體積PBS洗滌2次,調整細胞濃度為1×106個/mL,平均分為兩管,一管進行檢測,一管作為對照,分別加入CD28、CD117抗體及對照抗體各20 μL,避光孵育30 min,加入3 000 μL溶血素,室溫靜置10 min后進行離心處理,經PBS洗滌3次后采用BD FACSCanto型流式細胞儀及CellQuest軟件分析數(shù)據(jù),以抗原表達>20%為陽性。另采集患者5 mL骨髓于抗凝管中,加入等量Ficoll液,經離心處理后取中間白色霧層,經PBS稀釋后在室溫下離心處理,棄去上清液,收集細胞沉淀,采用免疫組織化學法測定CXCL12表達,隨機選取5個視野觀察著色細胞數(shù),若染色強度及陽性細胞百分比計分≥2分為陽性。

1.2.2資料收集 根據(jù)是否發(fā)生髓外浸潤將患者分為發(fā)生組和未發(fā)生組,采用醫(yī)院自制調查問卷收集兩組患者的臨床資料,包括年齡、性別、骨髓活檢情況(成熟漿細胞、原幼漿細胞)、有無溶骨性損傷、血紅蛋白水平、確診至入院接受化療時間、血清鈣水平、多發(fā)性骨髓瘤亞型、免疫球蛋白類型[免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白D(IgD)]及CD28、CD117、CXCL12表達情況。

1.2.3調查質量保障 調查前對醫(yī)護人員進行嚴格培訓,經調查質量核查及數(shù)據(jù)質量核查制訂相應調查問卷,采用相同調查問卷收集臨床資料,以保障調查問卷準確性,錄入數(shù)據(jù)時再次確認數(shù)據(jù)準確性,核實后由專業(yè)人員進行錄入。

2 結 果

2.1兩組臨床資料比較 臨床檢查結果顯示,96例多發(fā)性骨髓瘤患者中發(fā)生髓外浸潤38例(發(fā)生組),未發(fā)生58例(未發(fā)生組)。兩組年齡、性別、骨髓活檢情況、血清鈣水平、確診至接受化療時間,以及有無溶骨性損傷、多發(fā)性骨髓瘤亞型和免疫球蛋白類型患者比例比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。發(fā)生組CD28、CD117、CXCL12陽性患者比例高于未發(fā)生組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組臨床資料比較[n(%)或

2.2CD28、CD117、CXCL12表達與多發(fā)性骨髓瘤患者髓外浸潤的多因素Logistic回歸分析 以多發(fā)性骨髓瘤患者發(fā)生髓外浸潤為因變量(賦值：未發(fā)生髓外浸潤=0,發(fā)生髓外浸潤=1),以CD28表達、CD117表達和CXCL12表達為自變量進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示,CD28、CD117、CXCL12表達陽性均為多發(fā)性骨髓瘤患者髓外浸潤的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 CD28、CD117、CXCL12表達與多發(fā)性骨髓瘤患者髓外浸潤的多因素Logistic回歸分析

2.3不同預后患者CD28、CD117、CXCL12陽性表達率比較 隨訪6個月后,96例多發(fā)性骨髓瘤患者中死亡21例(死亡組),生存75例(生存組)。與生存患者相比,死亡患者入院時CD28、CD117、CXCL12陽性表達率較高,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同預后患者CD28、CD117、CXCL12陽性表達率比較[n(%)]

2.4CD28、CD117、CXCL12對多發(fā)性骨髓瘤患者的預后評估價值 多發(fā)性骨髓瘤CD28、CD117、CXCL12陽性患者的死亡風險分別為陰性患者的7.091、29.231、20.143倍(P<0.05)。見表4。

表4 CD28、CD117、CXCL12對多發(fā)性骨髓瘤患者的預后評估價值[n(%)]

3 討 論

多發(fā)性骨髓瘤為一種由單克隆漿細胞異常增生導致的惡性腫瘤,臨床特征主要表現(xiàn)為骨髓內異常分泌單克隆免疫球蛋白、正常免疫球蛋白受抑制,且多發(fā)性骨髓瘤治療較為困難,隨病情進展可出現(xiàn)髓外浸潤,對預后恢復造成嚴重影響[3,9-10]。因此,盡早發(fā)現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤髓外浸潤癥狀、及時調整治療方案,對于延長患者生存期、改善預后具有重大意義。

有報道顯示,多發(fā)性骨髓瘤細胞表面抗原表達高度不均一,正常漿細胞與瘤細胞抗原表達存在顯著差異[11]。本研究結果顯示,發(fā)生組CD28、CD117、CXCL12陽性患者比例高于未發(fā)生組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示臨床可通過CD28、CD117、CXCL12表達情況初步評估是否發(fā)生多發(fā)性骨髓瘤髓外浸潤。CD28是一種糖蛋白受體,為T淋巴細胞活化的重要抗原及協(xié)同刺激分子受體,其正常漿細胞不表達,惡性漿細胞中呈高表達[12]。葛芳芳等[13]研究發(fā)現(xiàn),多發(fā)性骨髓瘤細胞CD28高表達與高增殖活性及疾病進展密切相關,臨床分期較高的多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓液中CD28呈高表達。王騰等[14]研究表明,多發(fā)性骨髓瘤患者中約51%骨髓漿細胞CD28表達陽性,約92%髓外復發(fā)、轉移患者骨髓漿細胞CD28表達陽性,進一步說明CD28與多發(fā)性骨髓瘤髓外浸潤的關系。CD117為一種跨膜酪氨酸蛋白激酶受體,干細胞因子受體-配體結合后可導致酪氨酸磷酸化,其異常表達可改變傳導通路,參與腫瘤形成、進展過程[15]。有研究發(fā)現(xiàn),骨髓瘤細胞出現(xiàn)CD117高表達,可提示瘤細胞具有較高增殖活性,與腫瘤負荷、高增殖活性密切相關,且與骨髓瘤臨床分期、轉移均具有顯著相關性[16],本研究與其結果基本一致。CXCL12對于骨髓基質細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞等均具有趨化作用,且上述細胞均可表達CXCR4,CXCL12/CXCR4生物軸在調節(jié)腫瘤發(fā)生、發(fā)展、浸潤、復發(fā)中均發(fā)揮重要作用,多發(fā)性骨髓瘤細胞通過表達CXCR4,與CXCL12相互作用,趨化骨髓瘤細胞侵襲、遷移[17-18]。相關研究表明,CXCL12/CXCR4生物軸可促進血管內皮生長因子分泌,誘導腫瘤新生血管生長,而腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤等均與新生血管相關[19-20],因此,CXCL12/CXCR4生物軸與多發(fā)性骨髓瘤髓外浸潤密切相關。此外,本研究進一步行多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),CD28、CD117、CXCL12表達陽性為多發(fā)性骨髓瘤髓外浸潤的獨立危險因素(P<0.05),提示臨床可通過其表達情況早期評估診斷多發(fā)性骨髓瘤髓外浸潤。

多發(fā)性骨髓瘤由于治療難度較大,且多數(shù)患者就診時已處于中晚期,故及時預測患者預后至關重要,本研究隨訪6個月后發(fā)現(xiàn),死亡患者入院時CD28、CD117、CXCL12陽性表達率明顯高于生存患者(P<0.05),進一步分析發(fā)現(xiàn),多發(fā)性骨髓瘤CD28、CD117、CXCL12陽性患者死亡風險分別為陰性的7.091、29.231、20.143倍(P<0.05),提示臨床可通過其早期預測患者預后,以給予相應干預措施。

綜上所述,CD28、CD117、CXCL12表達與多發(fā)性骨髓瘤患者髓外浸潤密切相關,臨床可通過其表達情況預測預后,針對性制訂治療方案,降低病死率。