注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中兩組分成鹽率的分析

王松 于明艷 趙海云 于升平 陳德俊

摘要：目的 建立離子色譜法同時測定注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中鈉離子與鉀離子的含量，通過計算其成鹽率，對不同企業樣品的成鹽工藝進行評價。方法 采用IonPac CS12A陽離子交換色譜柱（4 mm×250 mm）和IonPac CG12A保護柱（4 mm×50 mm），檢測器為電導檢測器，抑制器電流為20 mA，以6.7 mmol/L甲烷磺酸溶液為淋洗液，流速為1.0 mL/min。結果? 鈉離子濃度在6.01～18.04 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.9999，n=5）；平均回收率為100.4%（RSD=0.4%，n=9）；鉀離子濃度在3.33～9.98 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.9998，n=5）；平均回收率為100.2%（RSD=0.5%，n=9）。測定了37批注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中鈉和鉀的含量，其成鹽率分別為1.00～1.13和0.94～1.05。結論 本方法可用于注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中鈉離子與鉀離子的含量測定，各企業樣品成鹽情況較好，但需關注成鹽劑的殘留。

關鍵詞：注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀；成鹽率；離子色譜法；鈉離子；鉀離子

中圖分類號：R978.1 文獻標志碼：A

Analysis of the salt-forming rate of two components in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection

Wang Song， Yu Mingyan， Zhao Haiyun， Yu Shengping， and Chen Dejun

（Shandong Institute for Food and Drug Control， NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Generic Drugs， Shandong Research Center of Engineering ang Technology for Consistency Evalution of Generic Drugs， Ji'nan 250101）

Abstract? ? Objective? ? This research established an ion chromatographic method for simultaneous determination of sodium and potassium ions in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection. According to the salt-forming rate， the salt-forming processes of different enterprises were evaluated. Methods? ? A cation exchange chromatography column of IonPac CS-12A （4 mm×250 mm） and a protection column of IonPac CG-12A （4 mm×50 mm） were used. The detector was a suppressed conductivity detector， and the suppressor current was 20 mA. An isocratic eluent of 6.7 mmol/L of methane sulfonic acid （MSA） solution was chosen as the mobile phase， with a flow rate of 1.0 mL/min. Results? ? The linear correlation of sodium ions was good within the range of 6.01～18.04 μg/mL （r=0.9999， n=5）. The average recovery was 100.4% （RSD=0.4%， n=9）. The linear correlation of potassium ions was good within the range of 3.33～9.98 μg/mL （r=0.9998， n=5）. The average recovery was 100.2% （RSD=0.5%， n=9）. The content of sodium and potassium ions in 37 batches of amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection were determined， with salt-forming rates ranging from 1.00 to 1.13 and 0.94 to 1.05， respectively. Conclusions? ? This method could be used for the determination of sodium and potassium ions in amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection. The salt-forming rate of samples from various enterprises was promising， but attention should be paid to the residue of salt-forming agents.

Key words? ? Amoxicillin sodium and clavulanate potassium for injection; Salt-forming rate; Ion chromatography;Sodium ions; Potassium ions

注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀（5：1）由葛蘭素史克（GSK）公司研發，于1985年在英國首次上市。本品為阿莫西林鈉與克拉維酸鉀按標示比例混合制成的復方制劑，未添加輔料，適用于產β-內酰胺酶的敏感菌所致的感染。兩者合用，可保護阿莫西林免遭β-內酰胺酶水解[1]，同時本品的抗菌譜較阿莫西林有所擴大。

注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中兩組分均以成鹽的形式存在，成鹽是改善藥物分子理化性質、提高成藥性的有效手段之一[2]。通過成鹽提高了本品的水溶性，適用于制備靜脈注射劑。藥物成鹽不完全，將影響藥物在體內的吸收與分布[3]；結晶工藝不完善，致使成鹽劑過量殘留，都會影響藥物的安全性和有效性。

中國藥典2020年版二部中阿莫西林有關物質控制的雜質總量為不得過3.0%，而阿莫西林鈉的雜質總量為不得過9.0%。另有文獻報道[4]注射用頭孢曲松鈉由于成鹽工藝的差異，不同企業產品中，產生于成鹽工序的雜質12的含量可相差8倍。可見成鹽工藝是影響雜質種類和含量的關鍵因素。離子色譜法廣泛應用于藥物分析中無機離子的檢測[5-7]，且可同時測定多種離子。本研究建立了離子色譜法同時測定注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀中鈉離子與鉀離子的含量，通過摩爾數比計算成鹽率，考察不同企業產品的成鹽情況，對評價其藥品質量具有重要價值。

1 儀器與試藥

ICS-5000型離子色譜儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）；XPR205型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

純凈水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；甲烷磺酸（批號A0419723）（美國Thermo Fisher Scientific公司）99%；氯化鈉基準試劑（批號2018710）、硫酸鉀基準試劑（批號2019110）（天津市科密歐化學試劑有限公司）100%。

注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀：14家企業共36批樣品；1批參比制劑（GSK，批號SR2M）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

用陽離子交換色譜柱（IonPac CS12A柱，

4 mm×250 mm，或效能相當的色譜柱；保護柱：IonPac CG12A，4 mm×50 mm）；檢測器為電導檢測器；檢測方式為抑制電導檢測，抑制器電流為

20 mA；柱溫35 ℃；檢測池溫度35 ℃；以6.7 mmol/L

甲烷磺酸溶液為淋洗液；流速：1.0 mL/min；進樣體積25 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 供試品溶液的配制

取本品約24 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的配制

取氯化鈉基準試劑與硫酸鉀基準試劑適量，置105 ℃干燥至恒重，再分別取氯化鈉約305 mg和硫酸鉀約148 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗

取對照品溶液、溶劑（屈臣氏水）分別注入離子色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，對照品溶液中鈉離子和鉀離子色譜峰之間的分離度符合要求（圖1），空白溶劑中未檢出與鈉離子和鉀離子保留時間一致的色譜峰，對樣品測定無干擾。

2.3.2 線性關系

分別取氯化鈉基準試劑約305 mg和硫酸鉀基準試劑約148 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含鈉離子1.2 mg和鉀離子0.66 mg的溶液，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液適量，分別加水稀釋制成每1 mL中約含鈉離子6.0、9.6、12.0、14.4和18.0 μg，含鉀離子3.3、5.3、6.6、7.9和9.9 μg的系列對照品溶液，依次注入離子色譜儀，記錄色譜圖。以離子濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得出鈉離子的線性方程為Y=0.2479X-0.2953（r=0.9999），鉀離子的線性方程為Y=0.1339X-0.1367（r=0.9998），結果表明鈉離子與鉀離子在配制的濃度范圍內與峰面積線性關系良好。

2.3.3 定量限與檢測限

取“2.3.2”項下的系列對照品溶液繼續逐級稀釋，注入離子色譜儀，記錄色譜圖。以離子峰的信噪比為10時所對應的離子濃度作為定量限，鈉離子的定量限為0.03 μg/mL，鉀離子的定量限為0.33 μg/mL；以離子峰的信噪比為3時所對應的離子濃度作為檢測限，鈉離子的檢測限為0.01 μg/mL，鉀離子的檢測限為0.10 μg/mL。

2.3.4 精密度試驗

取對照品溶液，連續進樣6次，記錄色譜圖，鈉離子與鉀離子峰面積的RSD分別為0.13%與0.15%，儀器的精密度良好。

2.3.5 重復性試驗

取注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀樣品（批號K1201203），平行制備6份供試品溶液，分別注入離子色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，鈉離子的平均含量為5.23%，RSD為1.1%；鉀離子的平均含量為2.98%，RSD為1.8%，結果表明方法的重復性良好。

2.3.6 回收率

取注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀樣品（批號K1201203）約1.2 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為供試品貯備液；精密量取該溶液1.0 mL，置100 mL量瓶中，再分別精密加入“2.3.2”項下對照品貯備液0.3、0.5和0.7 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，制成相當于80%、100%和120%濃度水平的溶液，每種濃度分別制備3份，注入離子色譜儀，記錄色譜圖。計算結果見表1，結果表明回收率良好。

2.3.7 溶液穩定性試驗

取同一供試品溶液，在室溫狀態下分別于0、2、4、6、8和12 h注入色譜儀，記錄色譜圖。鈉離子峰面積的RSD為0.13%，鉀離子峰面積的RSD為0.22%。結果表明，供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.4 樣品測定與成鹽率結果

照“2.1”與“2.2”項下的方法，測定37批樣品中鈉離子和鉀離子的含量，同時照中國藥典2020年版二部注射用阿莫西林鈉/克拉維酸鉀含量測定的方法[8]，測定樣品中阿莫西林和克拉維酸的含量。鈉離子成鹽率%=（鈉含量%/22.99）/（阿莫西林含量%/365.4），鉀離子成鹽率%=（鉀含量%/39.10）/（克拉維酸含量%/199.16）。

國產樣品中阿莫西林的成鹽率在1.00～1.13之間，平均成鹽率1.07，克拉維酸的成鹽率在0.94～1.05之間，平均成鹽率1.00；原研樣品中阿莫西林的成鹽率為1.09，克拉維酸成鹽率為1.00，結果見圖2。

3 討論

經調研，該品種各企業的生產工藝均為購進混粉原料直接無菌分裝制得，目前國內混粉原料的生產企業僅有3家（分別以企業A、B、C命名）。由測定結果可知，一是國產樣品的成鹽率與原研樣品無顯著差異；二是阿莫西林的成鹽率普遍過高，其中以B企業為原料來源的樣品成鹽率最好，接近理論值；克拉維酸方面，成鹽率在理論值上下浮動，但部分企業樣品離散程度較大，可能與該企業產品存在多家原料來源有關。

本文結果顯示，樣品中兩個組分的成鹽率良好，基本可以保證成鹽完全，此時需要關注工藝過程中過量成鹽劑的去除。生產工藝顯示，3家原料生產企業使用的成鹽劑均為2-乙基己酸鈉與2-乙基己酸鉀，兩種物質提供鈉離子或鉀離子后生成的2-乙基己酸對皮膚、黏膜有強烈刺激作用[9]。從另一個角度繼續考察本品種的成鹽工藝，參照中國藥典2020年版四部通則2-乙基己酸測定方法[10]，對樣品中2-乙基己酸的殘留量進行測定。結果顯示，各企業樣品均有不同程度的殘留，以C企業為原料來源的樣品2-乙基己酸的含量為0.39%～0.51%，殘留量相對較高，提示其成鹽工藝需進一步優化。

目前，測定藥物中鈉含量和鉀含量的常用方法有原子吸收分光光度法、ICP-MS法與離子色譜法等。其中，原子吸收分光光度法誤差較大，測定不同元素需要更換光源，無法同時測定；ICP-MS法樣品預處理復雜、干擾多、成本高；而離子色譜法具有高選擇性和靈敏度、經濟環保、結果準確可靠，可同時測定樣品中鈉、鉀兩種離子的含量。本文建立的離子色譜法，通過同時測定鈉離子與鉀離子含量，考察了不同企業產品的成鹽情況。這對成鹽工藝的逐步優化，制劑質量的持續提高具有積極意義。

參 考 文 獻

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作者簡介：王松，男，生于1987年，碩士，副主任藥師，主要從事抗感染類藥物、抗腫瘤藥物及藥用輔料的檢驗及質量研究，E-mail： 277486921@qq.com

*通信作者：E-mail： chendejunweiwei@sina.com

第一作者：王松，副主任藥師，2013年畢業于山東大學，主要從事抗感染類藥物、抗腫瘤藥物及藥用輔料的檢驗及質量研究工作。

通信作者，陳德俊，主任藥師，山東省食品藥品檢驗研究院抗生素室主任。長期從事抗感染類藥物、抗腫瘤藥物及藥用輔料的檢驗及質量研究工作，多次主持完成藥品標準的制修訂及復核工作、國家藥品評價抽驗工作，獲省級科技獎二等獎1項，獲國家級學會科技獎三等獎1項。獲省級學會科學技術二等獎、三等獎多項。