三種豬日本腦炎疫苗免疫效果比較

丁林玲 劉璐 陳云蕾 張澤林 湯冠濤 程國華 袁偉琴 吳昊

基金項目：杭州市農業與社會發展科研引導項目（20220919Y203）

作者簡介：丁林玲（1984－），女，獸醫師，主要從事動物防疫工作

*通信作者：陳云蕾（1991－），男，獸醫師，主要從事獸醫技術服務和獸醫實驗室檢測工作；E-mail：506658911@qq.com

摘? 要：為篩選出免疫效果較好的豬日本腦炎疫苗，本研究從某豬場選出15頭45日齡左右的仔豬，隨機分成3組（A組、B組和C組），分別接種3種不同廠家的豬日本腦炎疫苗。采集疫苗免疫前、首次免疫后21 d和二次免疫后21 d三個時間點豬血液樣本，通過熒光定量PCR和ELISA方法對免疫前病毒感染情況和免疫后抗體水平進行對比和分析。結果顯示，試驗仔豬未出現豬日本腦炎病毒感染；A組所用疫苗較B組、C組所用疫苗，抗體水平最高，首次免疫、二次免疫均表現出極顯著差異（P＜0.01），表明A組所用疫苗的免疫效果最好，可用于易感動物豬的免疫，以減少病毒由蚊蟲向馬匹感染的風險。

關鍵詞：豬日本腦炎；疫苗；免疫；抗體水平

中圖分類號：S851.3 文獻標志碼：A 文章編號：1001-0769（2024）02-0022-04

日本腦炎 （Japanese encephalitis，JE）是由黃病毒科黃病毒屬日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）引起的一種人畜共患病，主要導致人和馬出現腦炎癥狀，但人和馬感染后通常表現為隱性感染。JE同樣可引起母豬繁殖障礙，導致母豬流產、產死胎和木乃伊胎，但懷孕母豬通常沒有臨床癥狀，且不影響后期懷孕[1]。相關研究發現JEV主要存在于蚊子、野鳥和豬中[2]。豬是JEV重要的擴增宿主，鳥類也可增殖和傳播病毒，在豬中存在無病媒傳播的可能[3]。JE嚴重影響我國養豬業和馬匹競技性能的健康發展。

2023年第19屆亞運會馬術項目在杭州桐廬成功舉辦，為保障參賽人員與馬匹健康安全，將JE列為19種馬屬動物疫病中兩種強制免疫的疫病之一。豬作為JEV重要的擴增宿主，增加了蚊蟲向馬匹傳播的風險。因此，為充分保障參賽人員與馬匹的健康安全，保證規定區域內易感動物的JE“零發生”，選擇適合的疫苗對易感動物——豬進行強制免疫顯得尤為重要。本試驗選取桐廬縣某豬場15頭45日齡左右仔豬，隨機分成3組（A組、B組和C組），分別接種3種不同廠家的豬日本腦炎疫苗，通過臨床觀察、熒光定量RT-PCR、ELISA等方法比較試驗豬群的免疫效果，選出免疫效果最好的豬日本腦炎疫苗為豬免疫，以減少病毒由蚊蟲向馬匹感染的風險。

1? 材料與方法

1.1 試驗動物和疫苗

15頭未接種過豬JE疫苗的健康斷奶仔豬；試驗疫苗為國內3家生物制品廠生產的疫苗：A疫苗（生產批號為202302005）、B疫苗（生產批號為202304010）和C疫苗（生產批號為20230208）。

1.2 主要試劑與儀器設備

日本腦炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒（生產批號為2023005）由哈爾濱國生生物科技股份有限公司生產；日本腦炎抗體檢測試劑盒（生產批號為20230704）由武漢科前生物技術有限公司生產；熒光定量PCR儀（ABI 7500）由美國賽默飛世爾科技公司生產；核酸提取儀購買于濟凡生物科技有限公司；酶標儀由美國賽默飛世爾科技公司生產；移液器由上海普蘭德貿易有限公司生產。

1.3 試驗方法

1.3.1 免疫程序

15頭斷奶仔豬隨機分成A組、B組和C組，分別注射3家不同生物制品廠生產的疫苗。按廠家推薦，試驗仔豬在45日齡進行首次免疫，? 90日齡進行二次免疫，劑量為每頭豬1頭份。

1.3.2 采樣及樣本檢測方法

試驗仔豬在疫苗免疫前、首次免疫后21 d和二次免疫后21 d分別進行前腔靜脈采血，每份采樣量不少于3 mL。對免疫前采集的抗凝血提取核酸，進行JEV核酸檢測；對3個時間點（免疫前、首次免疫后21 d和二次免疫后21 d）采集的樣本進行抗體檢測。具體操作步驟參照試劑盒說明書，檢測結果按照核酸CT值和抗體陽性率等進行統計分析。

1.3.3 判斷標準

核酸檢測判斷標準：①FAM通道Ct值≤35且擴增曲線為典型的S型，同時HEX通道或VIC通道Ct值≤35，則判定樣本為JEV陽性；②FAM通道無Ct值顯示或Ct值＞40，同時HEX通道或VIC通道Ct值≤35（低于試劑盒檢測下限），則判定樣本為JEV陰性；③FAM通道無Ct值顯示或Ct值＞40，同時HEX通道或VIC通道內標Ct值＞40或無Ct值顯示，則檢測樣本結果無效。

抗體檢測判斷標準：①對照成立條件為陽性對照平均OD630 nm值≥0.5，陰性對照平均OD630 nm值＜0.3；②計算公式中S/P值＝樣本OD630 nm值/陽性對照平均OD630 nm值，若樣本S/P值≥0.21，則判定JEV抗體為陽性，若樣本S/P值＜0.21，判定JEV抗體為陰性。

1.4 數據分析

應用EXCEL和GraphPad Prism Vol.8.0軟件對檢測結果進行統計和分析。“**”表示存在統計學意義上的極顯著差異（P＜0.01）。

2? 結果與分析

2.1 疫苗免疫前日本腦炎病毒核酸檢測

使用熒光定量RT-PCR方法對采集的抗凝血進行核酸檢測（圖1）。從圖1可知，該豬群樣本檢測中FAM通道陽性對照Ct值為23.56（陽性對照Ct值≤35），其余均無Ct值；樣本VIC通道：陽性對照Ct值為24.38，陰性對照Ct值為25.05，其余樣本Ct值分別為25.51、24.89和24.91，Ct值均≤35，檢測結果判定JEV核酸陰性，表明該豬群在免疫前未感染日本腦炎病毒。

2.2 疫苗免疫后抗體水平檢測

將疫苗免疫前、首次免疫后21 d和二次免疫后21 d采集的試驗仔豬全血離心，收集血清進行抗體水平檢測（圖2）。由圖2可知，免疫前A組、B組、C組試驗仔豬的抗體水平無明顯差異；首次免疫后21 d檢測抗體水平發現，A組試驗仔豬（接種A疫苗）免疫效果明顯高于B組的（接種B疫苗）和C組的（接種C疫苗），且差異極顯著（P＜0.01）；二次免疫后21 d檢測抗體水平發現，免疫A疫苗（A組）的試驗仔豬的抗體水平明顯高于免疫B疫苗（B組）的和C疫苗（C組）的，且差異極顯著（P＜0.01）。

3? 討論與分析

選擇優質的疫苗和合理的免疫程序對于豬場疫病的預防至關重要[4]。一般情況下，廠家推薦仔豬日本腦炎疫苗的免疫程序為45日齡左右進行首次免疫，90日齡左右加強免疫一次。為驗證疫苗免疫效果，在仔豬母源抗體最低或無母源抗體（45日齡左右）時，進行病毒核酸檢測，可避免外源病毒對疫苗免疫效果的影響。

本試驗接種疫苗前核酸檢測結果：FAM通道陽性對照CT值小于35，且擴增曲線為典型的S型，而樣本和陰性對照均無CT值，同時VIC通道CT值均小于35，表明該豬群在接種前均未感染日本腦炎病毒。隨后對不同時間點（免疫前、首次免疫后21 d和二次免疫后21 d）的血清樣本進行抗體水平檢測時發現，在免疫前，三組試驗的抗體水平（A組、B組和C組）未有明顯差異，但在首次免疫后21 d和二次免疫后21 d兩個時間點，三組試驗仔豬的免疫效果出現極顯著差異，A組試驗仔豬與B組和C組試驗仔豬之間差異極顯著（P＜0.01），說明A組所注射疫苗的免疫效果明顯高于其他兩種疫苗的。但A組試驗仔豬在二次免疫后21 d的抗體水平比首次免疫后21 d出現了下降，有可能是首次免疫和二次免疫之間接種過其他疫苗或豬抵抗力下降等原因引起的，具體原因有待進一步深入探究。在三種疫苗免疫效果比較過程中發現，B組和C組所用的疫苗雖在首次免疫后、二次免疫后均出現抗體水平的升高，但與A組所用的疫苗相比，B組和C組所用的疫苗免疫效果明顯不足，表明A組所用的疫苗免疫效果較好。

綜上所述，A組所用的疫苗是三種疫苗中免疫效果最好的疫苗，但在實際生產中，疫苗的選擇和合理的免疫程序并不是一成不變的，而是需要根據自身的實際情況進行合理的調整。要堅持監測常態化，更好地了解豬群的JEV抗體水平，做到及時補免[5]，才能充分做到豬日本腦炎真正的“零發生”，從而降低病毒由蚊蟲向馬匹感染的風險。

參考文獻

[1] ZIMMERMAN J，KARRIKER L A，RAMIREZ A，et al．Diseases of swine（10th Edition）[M]．Wiley-Blackwell Publishing. 2012.

[2] OLIVEIRA ARS，STRATHE E，ETCHEVERRY L，et al．Assessment of data on vector and host competence for Japanese encephalitis virus： a systematic review of the literature[J]．Preventive Veterinary Medicine，2018，154：1-89.

[3] RICKLIN ME，GARC?A-NICOL?S O，BRECHB?HL D，et al. Vector-free transmission and persistence of Japanese encephalitis virus in pigs[J]．Nature Communications，2016，7：10832.

[4] 張寧，佘桐，李旭，等．兩種不同豬瘟疫苗對育肥豬的免疫效果比較[J]．畜牧獸醫雜志，2023，42（5）：16-19.

[5] 吳成林，武瑞．3種不同毒株豬偽狂犬病疫苗免疫效果的對比研究 [J]．畜牧與飼料科學，2017，38（4）：102-104.