適宜河南省栽培的12種羊肚菌菌株比較試驗

作者簡介：李賓（1984—），男，本科，助理研究員，研究方向：食用菌育種及高產栽培技術。

通信作者：金麗（1990—），女，碩士，研究實習員，研究方向：食用菌育種及高產栽培技術。

摘 要：近年來，羊肚菌產業發展迅速，對羊肚菌優良種質資源的需求越來越大。為篩選培育出在河南省適應性更好、產量更高的羊肚菌新品種，分別在鄭州市滎陽市、平頂山市寶豐縣、南陽市西峽縣、洛陽市嵩縣，對使用不同育種方式獲得的12種羊肚菌優良菌株進行栽培試驗，并對其培養性狀和栽培特性進行觀察測定。結果表明：各菌株的培養性狀均較佳，但在栽培特性方面表現出較大差異。其中，內共生化羊肚菌菌株和雜交融合羊肚菌菌株在產量方面表現優秀，野生馴化菌株也表現出較好的高產潛力。

關鍵詞：羊肚菌；優良種質；培養性狀；栽培特性

中圖分類號：S626；S646.7 文獻標志碼：B 文章編號：1674-7909（2024）1-62-3

DOI：10.19345/j.cnki.xckj.1674-7909.2024.01.014

0 引言

羊肚菌［Morchella esculenta （L.）Pers.］隸屬子囊菌門盤菌綱盤菌目羊肚菌科，為珍稀食藥兼用型真菌，具有降血脂、抗氧化、抗菌、提高人體免疫力、抗腫瘤等功效。在20世紀末，羊肚菌栽培技術被認為很難攻克。我國對羊肚菌栽培技術的研究始于1990年，但直到2012年，羊肚菌室外土地栽培模式才在川渝地區大獲成功。此后，我國羊肚菌栽培面積迅速擴大。據不完全統計，2022年我國羊肚菌栽培面積在2.37萬 hm2左右。然而，在羊肚菌產業快速發展的同時，將近70%的種植者不能從中獲利。羊肚菌栽培品種選擇不當、缺少優良種質、菌種質量差、制種技術不統一和不規范、栽培管理技術不規范等均會影響羊肚菌栽培的穩定性［1］，而利用優良種質資源是成功栽培羊肚菌的前提。

目前，羊肚菌育種主要依靠常規的自然選育，但隨著羊肚菌人工栽培面積的不斷擴大，再加上菌株易老化的特點，自然羊肚菌種質資源已無法滿足人工栽培的需求。隨著科技發展，雜交育種、原生質體技術育種［2］、誘變育種、人工內共生有益菌［3］等技術被廣泛應用于羊肚菌育種中。此研究通過在實驗室中對12種優良菌株進行生物培養性狀和生產特性觀測和對比，從而篩選出適合河南省栽培的新菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株

1.1.1 野生馴化菌株

601M1、601M6為六妹羊肚菌（601M）系列，于2018年采自四川省，是經過多年選育形成的栽培菌株。701M-G（高原紅）采自新疆天山，是經人工馴化和分子鑒定篩選出的七妹羊肚菌菌株。

1.1.2 引種菌株

72M11、73M1是從陜西省榆林市引種的人工栽培七妹羊肚菌菌株。

1.1.3 雜交融合菌株

701M6、701M10、701M13是通過原生質體融合技術獲得的六妹羊肚菌和七妹羊肚菌融合菌株。Z-7、Z-18、Z-31是通過原生質體融合技術獲得的六妹羊肚菌和梯棱羊肚菌融合菌株。

1.1.4 人工內共生化羊肚菌菌株

M-11是以601M系列菌株為原始菌株，內共生限制馬拉色菌的六妹羊肚菌菌株。T-3是以601M系列菌株為原始菌株，內共生土地桿菌的六妹羊肚菌菌株。

1.2 培養基與培養料的配方和制作

1.2.1 母種培養基的配方與制作

在進行母種培養及培養性狀觀測時，采用馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂（PDA）培養基。取馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，加水至1 000 mL，pH值自然，于121 ℃條件下高壓滅菌20 min，冷卻后在無菌工作臺上分裝到直徑為9 cm的培養皿中，每皿20 mL。

1.2.2 原種培養料配方與制作

原種培養料配方：木屑35.0%、稻殼35.0%、小麥16.8%、腐殖土10.0%、生石灰1.0%、石膏2.0%、磷酸二氫鉀0.2%。用750 mL玻璃瓶或塑料瓶裝滿培養料，適當壓實，于121 ℃條件下高壓滅菌2.5 h。

1.2.3 栽培種培養料配方與制作

栽培種培養料配方：木屑30.0%、稻殼30.0%，小麥26.8%、腐殖土10.0%、生石灰1.0%、石膏2.0%、磷酸二氫鉀0.2%。用14 cm×28 cm的聚丙烯塑料袋分裝培養料，于121 ℃條件下高壓滅菌2.5 h。

1.2.4 營養袋袋料配方與制作

營養袋袋料配方：稻殼20%、木屑16.8%、小麥60.0%、生石灰1.0%、石膏2.0%、磷酸氫二鉀0.2%。用12 cm×24 cm的聚乙烯塑料袋分裝培養料，于常壓條件下滅菌36 h。

1.3 試驗方法

1.3.1 培養性狀觀察與測定

對各菌株母種分別取直徑為0.5 cm的組織塊，將其置于新的PDA培養基上，在22 ℃條件下黑暗培養10 d，觀察并記錄各菌株生長速度、菌絲長勢（菌絲濃密程度）、菌核量、色素產生情況，每個菌株重復3次。其中，菌株培養性狀評價參照參考文獻［1］。

菌絲生長速度測定方法：在菌絲長滿平板前，以接種組織塊生長邊緣為起點來選取3個不同方向，用刻度尺測量菌落所達刻度，求平均值，即為菌落半徑。用菌落半徑除以時間，得到菌絲生長速度［4］ 。

生長速度（mm/h）= 菌落半徑（mm）/ 時間（h）" " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " " （1）

在培養第10 d時，觀測菌絲長勢、菌絲整齊度、菌核量、氣生菌絲和色素產生情況，并設置4個等級進行評分：長勢強、菌絲整齊度好、菌核多、無氣生菌絲、無色素產生，記作“4分”；長勢較好、菌絲整齊度較好、菌核較多、氣生菌絲較少、產生色素較少，記作“3分”；長勢較弱、菌絲整齊度較差、菌核較少、氣生菌絲較多、產生色素較多，記作“2分”；長勢弱、菌絲整齊度差、菌核少或無、氣生菌絲多、色素產生明顯，記作“1分”。

1.3.2 栽培特性觀察與測定

試驗地點為鄭州市滎陽市、平頂山市寶豐縣、南陽市西峽縣、洛陽市嵩縣，試驗播種時間為2022年12月5日，采用簡易大棚栽培模式（配套設施有棉被、微噴裝置、遮陽網），栽培管理技術參照參考文獻［5］。每個菌株種植面積為5 m2，設3個重復。做栽培畦，畦寬120 cm、高15 cm；畦面開溝，溝寬20 cm；將栽培種進行撒播，播種量為400 g/m2，播后覆土3～5 cm。播種后噴水，使畦面10 cm保持濕潤狀態；播種7 d后擺放營養袋（10 袋/m2），并在營養轉化30 d后移除。對菌霜多少、原基產生時間、第1茬菇采收時間及產量進行觀察與測定。其中，菌霜多記作“++++”，菌霜較多記作“+++”，菌霜較少記作“++”，無菌霜記作“+”；原基分化時間、第1茬菇采收時間以與播種時間的間隔時間來計算；產量以每1 m2羊肚菌產量來計算。試驗結果為4個地區觀察與測定數值的平均值。

1.3.3 數據分析

使用SPSS 28.0 軟件對試驗數據進行統計分析，用LSD法比較其差異性和顯著性。

2 結果與分析

2.1 各參試菌株培養性狀觀察測定結果與分析

各參試羊肚菌菌株培養性狀表現見表1。由表1可知：不同菌株的菌絲生長速度表現出顯著性差異，菌絲生長速度較快的菌株為T-3、M-11、701M-G，內共生化菌株（T-3、M-11）的菌絲生長速度比原始菌株（601M1、601M6）顯著提高；各菌株或多或少分布有菌核，除七妹菌株（72M11、73M1）菌核較少外，其他菌株的菌核均較多；七妹菌株（72M11、73M1）、七妹羊肚菌和六妹羊肚菌融合菌株（701M6、701M10、701M13）的氣生菌絲和色素產生較多。綜合評定各羊肚菌菌株其余培養性狀，并進行比較，表現較好的菌株有M-11、T-3、Z-7、701M-G、701M10、601M6。

2.2 各參試菌株栽培特性觀察測定結果與分析

各參試羊肚菌菌株栽培特性表現見表2。由表2可知：同品種系列不同菌株在菌霜產生情況、原基分化時間和第1茬菇采收時間上的差異較小，而不同系列菌株表現出不同的栽培特性；701M-G、M-11、T-3形成菌霜多（呈地毯式覆蓋），72M11、73M1形成菌霜較少，其他菌株形成菌霜適中；601M1、601M6、M-11、T-3的原基分化、第1茬菇采收時間均較早，屬早熟菌株；Z-7、Z-18、Z-31、701M6、701M10、701M13、72M11、73M1的原基分化、第1茬菇采收時間均較晚，屬中晚熟菌株；701M-G的原基分化和成熟時間最晚，屬晚熟菌株。對各試驗地各參試菌株的產量進行統計分析，結果表明：同品種系列不同菌株之間的產量差異較小，不同系列菌株之間的產量差異顯著；內共生化菌株（T-3、M-11）的產量顯著高于其他菌株，其次為融合菌株（Z-7、Z-18、Z-31、701M6、701M10）、野生馴化菌株（601M1、601M6、701M-G），而72M11、73M的產量顯著低于其他菌株。

3 結論與討論

通過對12種羊肚菌優良菌株的培養性狀和栽培特性進行觀察測定，發現內共生化羊肚菌株在菌絲生長速度、菌絲長勢、出菇時間、生長周期及產量上均優于原始菌株，這說明通過人工內共生化技術可使原始菌株的培養性狀和栽培特性變得更優秀，該結果與何培新等［3］的研究結論一致。由試驗可知，雜交融合菌株表現出與母本不同的培養性狀，產量也有一定提高，這說明與母本相比，雜交融合種在表現出一些差異性狀的同時，也有一定概率保留雙親的優良性狀。601M1、601M6、701M-G是由野生種馴化而來的，經過多年的人工篩選和栽培，在河南省有較強的栽培適應性，可作為栽培種和育種材料進行推廣應用。綜合各參試菌株的培養性狀和栽培特性指標，適合河南省栽培的羊肚菌菌株有T-3、M-11、Z-7、701M-G、601M6、701M10。

在羊肚菌產業快速發展的當下，相關科研機構及工作人員可利用原生質體融合、內共生化等先進育種技術，加快羊肚菌優良種質的創制速度，為羊肚菌產業高速發展保駕護航。

參考文獻：

［1］劉偉，蔡英麗，馬曉龍，等.羊肚菌生產菌株栽培適宜性評價系統［J］.輕工學報，2022（3）：50-57.

［2］HE P X，YU M，WANG K，et al.Interspecific hybridization between cultivated morels Morchella importuna and Morchella sextelata by PEG-induced double inactivated protoplast fusion［J］.World Journal of Microbiology and Biotechnology， 2020（4）：58.

［3］何培新，劉偉，王文升，等.利用人工內共生化技術選育羊肚菌優良品種的方法：CN202210515335.1［P］.2023-09-26.

［4］田芳，金麗，李賓.羊肚菌連續繼代培養對菌絲老化的影響［J］.特種經濟動植物，2023（3）：16-19.

［5］高新樓，田芳，郜惠蘋，等.鄭州地區羊肚菌簡易大棚高產栽培技術［J］.農業科技通訊，2018（12）：294-295.