新版GMP 無菌藥品生產環境監測分析

吳宏舒

（廣西梧州制藥（集團）股份有限公司，廣西 梧州 530011）

新版GMP 也叫藥品生產質量管理規范，這份文件是2011 年3 月1 日修訂的，相較于傳統的GMP，新版GMP 的調整幅度較大，它關系到無菌制劑生產環境的相關要求，清潔度劃分等級也變成了四個層次。在環境監測方面，我國無菌藥品的生產大環境需要和國際接軌，其側重點上更加注重動態監測和在線管控，無菌藥品生產環境是保證藥品生產質量的前提和基礎，如果藥品生產車間或廠房存在大量致病菌將會導致質量受損，影響人民群眾的用藥健康。環境監測工作至關重要，它的主要目的是評估生產環境的控制效果。環境監測標準是有效的控制工具，對無菌藥品生產環境的監測應該做好全面監督，監督的項目和具體事項要包括空氣浮游菌、懸浮粒子、沉降菌以及表面微生物等諸多情況。

1 新版GMP 無菌藥品生產環境的相關要求

通過環境監測可以達到對藥品生產加工環境進行控制的效果，因此環境監測既是手段，也是目的，更是進行評價的重要工具。

在現代醫療行業不斷發展的過程中，無菌生產的環境幾乎是必要的門檻，生產無菌藥品需要保持廠房出入區域的清潔，不受其他外界因素的干擾和影響，每一個環節都應當接受檢測和管理，使環境達標，防止出現外界微生物超標或其他因素的影響，導致藥品質量下降。在醫藥行業中進行無菌藥品的環境監測要注意警戒限度和糾偏限度兩個概念，其中警戒限度指的是如果在環境監測時，有關工作人員發現環境質量的相關參數已經超過了臨界點和正常范圍，但是又沒有達到糾偏的臨界線，那么在警戒限度中的環境也需要加強整改，至少要引起生產管理者在思想上的重視，著重解決環境問題；而糾偏限度指的是環境監測之后發現相關參數直接超過了可允許的范圍，需要立刻整改并調查污染源頭，只有確保環境質量達標才可以繼續開展生產，滿足生產要求[1]。無菌藥品的生產監測環境內容是多方面的，例如設備表面是否存在微生物操作人員、個人的衛生狀況如何、在操作過程中是否存在不衛生表現，還要檢查空氣懸浮粒子含量是否超標、沉降菌數量如何，以上這些數據都需要經過測量后記錄在表格中加以分析和評估。有關工作者需要建設有效的評價機制，并依托評價機制對生產環境的各方面要素展開有效規范與全面監督。GMP 無菌藥品生產標準更新之后，新版的GMP 則要求無菌藥品生產廠房必須要達到更高的標準，生產無菌藥品意味著生產環境一定要高度無菌才能保障質量的安全，因此對生產環境的檢測情況也成為藥品質量檢測的一部分，無菌藥品的參數要求已經和國際要求相互接軌，也就意味著無菌環境的打造也要跟上時代發展的步伐，做出全面調整。

2 新版GMP 無菌藥品生產環境監測

2.1 監測懸浮粒子

懸浮粒子指的是可以懸浮在空氣中存在的介于固體、液體之間的物質，當然有些懸浮粒子也以固體或液體的形式存在，比如微生物粒子或者非微生物性粒子，空氣懸浮粒子的尺寸范圍差不多在0.1um～1000um左右，這是液體懸浮粒子和固體懸浮粒子的劃分范圍。測定懸浮粒子的時候經常采用濃度計數法，檢測干凈環境之內單位體積空氣中大于某一標準的懸浮粒子數，以此方式來界定該空氣是否清潔，根據潔凈度的不同級別做好空氣凈化的風險評估，要考慮到藥品生產車間或實際生產區域的大小和環境布局，還要考慮到生產車間的使用用途，在實際的加工與生產過程中也要考慮到其他的因素，例如車間加工的工人活動頻繁的位置點需要展開重點監測，堆放物品的通道也需要重點考量，要根據距離等要素做好位置取樣并展開日常監督[2]。A 級潔凈區由于其要求較高，對懸浮粒子的檢測需要采用在線連續系統，在線連續系統可以對生產全過程展開全程監督，防止離線監測或者監測中斷可能會對環境清潔造成的忽視或影響。監測的時間、空間在選擇過程中應當相對固定，不要調換得過于頻繁，在監測空氣懸浮粒子時有一些事項需要注意，例如，在單向流系統中可以采用等動力學取樣頭，保持采樣管干凈整潔，防止出現滲漏現象，選擇合適長度的采樣管，長度數據應當根據儀器的允許范圍來確定，一般情況下長度需要小于1.5m。粒子計數器需要和其他儀器保持同一氣壓和工作溫度，防止出現測量過程中的數值偏差，如果測量的對象是單向流潔凈式采樣口，和氣流方向要保持同頻，如果不是單向流潔凈式采樣口，需要對上而不能對下。在采樣點的布置過程中應當盡可能避開回風口，具體采樣時，測試人員要減少人為因素的活動影響，采樣結束后粒子計數器需要展開全面清潔。樣本的選取非常關鍵，樣本的保存也需要防止其他污染物對其造成不良影響，在檢測懸浮粒子時所選擇的儀器應當穩穩地放在水平的臺面上，接下來再開始采樣不同級別的潔凈區，在日常監測過程中要保持動態化。在選取樣本時，采樣點的數量要大于兩個，采樣次數要大于五次，當然根據不同級別的要求也可以稍有調整。

2.2 對浮游菌展開監測

對浮游菌的監測可以按照GB 相關標準來收集懸浮空氣的活性微生物分子，利用培養基檢測在適宜的環境條件下浮游菌的生長和繁殖速度如何，以此來確定菌落群的數量。浮游菌測定可以利用技術濃度方法，也就是收集懸浮空氣的生物粒子放置在專門的培養基之中，等待一段時間，讓其生長在合適的環境條件下，計算繁殖的菌落總數，以此種方法來判定生產環境是否清潔，微生物濃度如何。要根據潔凈程度和空氣凈化程度來判定無菌藥品生產環境是否存在風險，并對風險展開評估，還要考慮到懸浮粒子之外的影響因素，在實際藥品生產與加工過程中是否有其他因素同樣可以引起污染，做好變量的控制。微生物容易滋生的位置需要做好定期的殺菌消毒，在定期清潔過程中進行樣本的取樣并展開日常監測。尤其是對于A 級潔凈區來說，一定要通過動態在線的方式展開浮游菌檢測，防止浮游菌過于繁殖造成微生物大量污染[3]。但是浮游菌在采集樣本的過程中會受到氣流的影響，可以在生產快要結束的時候采集樣本。浮游菌檢測和采集也有一些事項需要注意：

第一個方面，有關工作者在具體采集樣本之前需要檢測培養皿的質量是否達標，如果發現培養皿本身具有破損變質的情況，則確定該培養皿有污染物，應當做好變量控制與排除。不同批次的培養皿需要做好對照實驗，來檢測其是否存在污染情況。一般來說，每一組要設置對照組和實驗組，在配置培養皿的時候做好分次取樣，采樣之后的樣本要和培養皿一起放在培養箱中觀察微生物的繁殖情況。

第二個方面，需要做好記錄，記錄的內容包括培養基、實驗條件以及其他類型的不同參數。在具體數據計算時，需要觀察培養皿的正面和背面的微生物菌落生長情況，要分別微生物菌落和培養基沉淀物，防止造成混淆。如果肉眼觀察存在困難，可以采用顯微鏡輔助。

第三個方面，工作人員在檢測浮游菌時需要做好自身的消毒和使用工具的消毒，進入待測房間之前需要消毒采樣器的轉盤頂蓋，還要清潔消毒罩的內外正反面，等待消毒劑中的酒精含量揮發之后再進行樣本的采集，防止監測效果受到其他因素的干擾和影響，采樣結束之后要再次消毒以上設備。

2.3 檢測沉降菌

沉降菌的檢測可以用GBT-16294-2010 標準，收集空氣中存在的活性微生物顆粒，再將其放置在專門的培養菌之中，檢測繁殖的速度及數量。從某種意義上來說，沉降菌的檢測和浮游菌的檢測原理相通，測定沉降菌的時候可以采用沉降法，利用自然沉降的物理原理在空氣中將生物粒子收集在一起，放置在基底培養皿之中，在適當的條件和適當的時間之后觀察沉降菌的繁殖數量，判定在清潔環境之內沉降菌的菌落數是多少，以此來測試該區域的潔凈程度是否達標。工作人員依然要采用動態方式做好沉降菌的監測，常用的培養器皿是沉降碟，但是沉降碟監測只能用作定性實驗的步驟，所獲數據的準確性也不高，但是沉降碟的優勢也是顯著的，尤其是在層流區域，它不會污染空氣環境，使用較為輕便，價值較低，經濟性價比較好，也不會干擾氣流的流向，不會產生過多的不可控變量，因此沉降碟監測的方法能夠被廣泛地推廣[4]。具體使用時，沉降碟的放置時間至少要大于半個小時，小于四個小時，工作人員要確定沉降碟的暴露時間，暴露之后的培養基不能由于失水或其他因素影響到微生物的正常成長。在實驗檢測步驟中，要做好空氣凈化數值的風險評估，可以將浮游菌作為對照組，沉降菌作為取樣實驗組，放置在合適的位置，做好日常監測。沉降菌的數量需要大于最少采樣點數，還應當大于最小培養器皿數，A 級清潔點采樣點數要大于14 個。在檢測方法上，對于A 級潔凈區，沉降菌的監測需要展開連續不間斷的實時監控，對無菌生產空間微生物的整體狀況進行評估，在注意事項方面，沉降菌的監測和浮游菌的監測大體相同，不再贅述。

2.4 檢測表面微生物

空氣微生物取樣的方式可以檢測無菌藥品生產環境中微生物的總數以及繁殖情況，從而判定污染水平。除此之外，還要做好表面監測和人員微生物的監測，這主要指的是接觸到藥品生產流程的相關器皿，還包括工作人員。監測方法的選擇需要具有典型代表性，所獲取的數據也要盡可能精準，基本的檢測方式包括擦拭法、沖洗法和接觸碟法，以上這幾種方式適合檢測操作者的衣服、手套、生產車間的工具設備、地面、墻等表面[5]。對微生物的檢測依然要全過程不間斷地進行，為了減少人為操作造成的負面影響，表面微生物和人員微生物的采樣需要等到生產工作結束時、人員離場后再進行取樣。

具體而言，接觸碟法的采樣操作起來相對較為容易，并且可以進行定量控制，因此被廣泛推薦和采納。接觸碟法可以檢測趨向于光滑的表面，例如地面瓷磚、設備表面以及工作人員的衣服、手套，棉簽擦拭的方法可以檢測表面不太整齊的管道和衛生死角，表面沖洗的方式比較適合大面積的檢測區域，比如蓄水罐和清潔池。

3 可選擇的糾偏措施

對無菌藥品生產環境展開質量監測時，有關工作者需要設定環境的警戒線，同時設置好糾偏限度。在這一過程中常用的數學工具是正態分布，正態分布的方式可以科學地劃分警戒限度和糾偏限度的范圍，統計歷史數據并展開新的平均數計算，以平均數為基礎，加上2 倍的標準差，這是警戒限度數值的計算方式。同樣，對于統計的歷史數據要做好平均分析，用平均數加上3 倍標準差便得到了糾偏限度，在監測無菌藥品生產環境的時候，如果監測結果多次超過警戒范圍之外需要展開糾偏，常見的糾偏方法如下：

第一，需要檢測操作人員的技術是否合格，是否能夠符合新版GMP 的要求，同時還要查看監控錄像，了解工作人員更衣、洗手等相關操作是否符合殺菌消毒的要求，還要查看殺菌消毒的方式并做好檢查記錄。

第二，需要對設備表面的微生物進行監測和擦拭，這一過程需要多次連續進行。

第三，監測過程中如果多次超過警戒限度范圍外，需要考慮監測的樣本是否具有代表性，樣本檢測準確性如何，監測結果超出可接受的范疇需要加強對環境問題的重視和檢測，發現問題需要及時整改，并找到長期存在的環境原因。

4 結語

按照新版GMP 的要求，對無菌藥品生產環境展開監測需要選擇合適的方式和手段，常見的監測對象包括懸浮粒子、浮游菌、沉降菌，還包括表面微生物的檢測，要選擇合適的糾偏措施，保持環境的清潔衛生，只有在監測過程中確保環境的整潔并達到相關衛生標準，才能防止污染物的污染和威脅，提高無菌藥品的生產質量。