枝條蜜環(huán)菌栽培種液體培養(yǎng)技術(shù)

胡萬(wàn)金 祝 勇 肖 力 王江虹

蜜環(huán)菌，又稱(chēng)蜜環(huán)蕈、蜜蘑、榛蘑，是擔(dān)子菌門(mén)、傘菌綱、傘菌目、白蘑科、蜜環(huán)菌屬真菌，多生長(zhǎng)在針葉林或闊葉林中，在我國(guó)的東北、華北、西北、四川、云南等地均有分布。

蜜環(huán)菌是天麻、豬苓的共生真菌，是天麻、豬苓生長(zhǎng)發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。此外，蜜環(huán)菌還具有一定的食用價(jià)值和藥用價(jià)值，其菌蓋和菌柄味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，可以食用；同時(shí)，蜜環(huán)菌具有祛風(fēng)通絡(luò)、強(qiáng)筋骨、益腸胃、清熱解毒等功效。

液體培養(yǎng)是枝條蜜環(huán)菌栽培種傳統(tǒng)生產(chǎn)方式，具有生產(chǎn)技術(shù)簡(jiǎn)單、原材料易于收集、商品菌種易于保存且保存期長(zhǎng)，栽培天麻、豬苓產(chǎn)量高等特點(diǎn)。 陜西、甘肅、湖北、貴州等地農(nóng)戶廣泛使用枝條蜜環(huán)菌液體培養(yǎng)的菌種生產(chǎn)天麻、豬苓。 目前，陜西漢中枝條蜜環(huán)菌液體栽培種產(chǎn)量已占全國(guó)60%以上。 以下總結(jié)枝條蜜環(huán)菌液體栽培種生產(chǎn)技術(shù)，供參考。

1 蜜環(huán)菌的形態(tài)特征

蜜環(huán)菌的子實(shí)體為淺土黃色或淺黃褐色肉質(zhì)，菌蓋半球形，菌柄上有菌環(huán)，菌肉白色。 子實(shí)體成熟后產(chǎn)生孢子，形成白色的孢子?。ㄦ咦臃劬奂纬傻囊环N現(xiàn)象）。 孢子無(wú)色或微黃，光滑，呈圓形。 孢子在適宜條件下萌發(fā)形成菌絲， 菌絲聚集后形成繩索狀長(zhǎng)束，稱(chēng)為菌索，菌索棕褐色，老化后呈黑褐色，菌索從腐朽的樹(shù)木或活的樹(shù)根上吸取營(yíng)養(yǎng)， 在樹(shù)皮或土壤中蔓延。菌絲和菌索在黑暗條件下都能發(fā)出螢光，發(fā)光的強(qiáng)弱與溫度、 菌絲的成熟度和接觸空氣量有關(guān)，溫度越高、菌絲成熟度越高、接觸空氣的面越大，螢光越強(qiáng)。

自然界中還有一種假蜜環(huán)菌， 其與蜜環(huán)菌的主要區(qū)別是前者的子實(shí)體沒(méi)有菌環(huán)，不能為天麻、豬苓提供營(yíng)養(yǎng)。

2 蜜環(huán)菌的生長(zhǎng)條件

蜜環(huán)菌常在夏秋季節(jié)生長(zhǎng)于闊葉林中， 對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求比較嚴(yán)格，喜歡溫暖、濕潤(rùn)、通風(fēng)良好的環(huán)境，同時(shí)還需要一定的光照條件，疏松、肥沃、排水良好、酸堿適度的土壤條件，以及充足的水分和氧氣。

1）溫度。蜜環(huán)菌的菌絲體在5~30 ℃環(huán)境下均可生長(zhǎng)， 但在18~24 ℃下生長(zhǎng)最快， 生產(chǎn)中一般采用15~18 ℃低溫培養(yǎng)發(fā)菌， 這個(gè)溫度條件下培養(yǎng)出的蜜環(huán)菌菌絲體生長(zhǎng)健壯。 菌絲和菌索在20~25 ℃下發(fā)出的熒光最強(qiáng)。低于5 ℃菌絲體進(jìn)入休眠狀態(tài)，高于30 ℃菌絲體停止生長(zhǎng)， 超過(guò)34 ℃會(huì)導(dǎo)致菌絲體死亡。

2）濕度。 蜜環(huán)菌喜歡在潮濕、透氣的條件下生長(zhǎng)發(fā)育。 在自然界中空氣濕度達(dá)到60%以上時(shí)，蜜環(huán)菌生長(zhǎng)發(fā)育很好，空氣濕度低于30%時(shí)，菌絲生長(zhǎng)緩慢甚至停止生長(zhǎng)。 人工培養(yǎng)蜜環(huán)菌的菌材（木質(zhì)）含水量應(yīng)保持在45%~60%，空氣濕度保持在70%~85%。

3）氧氣。 蜜環(huán)菌是好氣性真菌，其菌絲、菌索和子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育都需要氧氣， 同時(shí)菌索具有運(yùn)送氧氣的功能。因此，蜜環(huán)菌的菌索可以在固體或半固體培養(yǎng)基中穿透一定的距離， 這也是蜜環(huán)菌可以在濕透的段木中生存的原因。

4）光線。 蜜環(huán)菌的菌絲和菌索需要在暗光中培養(yǎng)，而子實(shí)體的形成則需要光線的刺激，子實(shí)體的生長(zhǎng)發(fā)育需要散射光，否則生長(zhǎng)不良，畸形或不孕。

5）酸堿度。蜜環(huán)菌的菌絲體在pH 值4.5~7 之間可以正常生長(zhǎng)， 最適宜的pH 值為4.5~6.5，pH 值超過(guò)7 生長(zhǎng)不良。因此微酸性環(huán)境最適合蜜環(huán)菌生長(zhǎng)。

6）營(yíng)養(yǎng)條件。蜜環(huán)菌可以木材中的纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等作為營(yíng)養(yǎng)來(lái)源， 同時(shí)還需要一定的氮、磷、鉀等元素，可選擇櫟樹(shù)、樺樹(shù)、蘋(píng)果樹(shù)等作為蜜環(huán)菌培養(yǎng)基質(zhì)。

3 蜜環(huán)菌栽培種液體培育

3.1 培育時(shí)間 氣溫8～25 ℃均可， 最適氣溫15～26 ℃，從接種至菌絲長(zhǎng)滿需25～35 d。 陜西漢中地區(qū)枝條蜜環(huán)菌液體栽培種一般從10 月初開(kāi)始生產(chǎn)，一直到次年4 月底結(jié)束。

3.2 原材料準(zhǔn)備與處理

3.2.1 準(zhǔn)備塑料瓶 枝條蜜環(huán)菌液體栽培種生產(chǎn)一般采用帶海綿、透氣瓶蓋的塑料瓶，常用750 mL 塑料瓶，少量的用1 500 mL 塑料瓶，根據(jù)生產(chǎn)季節(jié)提前預(yù)備。

3.2.2 準(zhǔn)備菌枝 培養(yǎng)蜜環(huán)菌的樹(shù)種可選擇樺類(lèi)、櫟類(lèi)等闊葉樹(shù)種。 秋后樹(shù)體落葉后至第2 年發(fā)芽前收集直徑1.5~2.5 cm 的枝條，用機(jī)器截成長(zhǎng)3~4 cm的小段，截口呈45°。 裝瓶前1~2 d 將菌枝在水中浸泡24~48 h，瀝干水分備用。

3.3 生產(chǎn)技術(shù)

3.3.1 裝瓶 采用人工或機(jī)器搖瓶的方式裝瓶。 將浸泡后的菌枝裝入塑料瓶中， 裝入量一般為瓶子容積的4/5，750 mL 塑料瓶約需0.3 kg 枝條。 裝好枝條后加入3~5 粒玉米粒，然后加滿清水，蓋上蓋子。 當(dāng)天加水當(dāng)天滅菌，不能放置太長(zhǎng)時(shí)間。

3.3.2 滅菌 將裝好瓶的原料放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌， 開(kāi)大火迅速將滅菌容器壓力升至0.05 MPa，排氣，排完氣后將壓力升至0.125 MPa，保持2.5~3 h。待壓力下降至0.05 MPa 后再緩慢排氣。 切不可在高壓狀態(tài)下快速排氣， 以免瓶?jī)?nèi)水分溢出， 造成瓶?jī)?nèi)缺水。

3.3.3 冷卻 滅菌完成后， 將菌瓶放入冷卻車(chē)間自然降溫。菌瓶移動(dòng)過(guò)程中要保持直立，瓶?jī)?nèi)的水不能溢出。

3.3.4 接種 當(dāng)菌瓶?jī)?nèi)溫度降至25 ℃以下時(shí)便可以接種。 按照常規(guī)無(wú)菌操作在接種箱或接種室內(nèi)進(jìn)行。需要注意的是，枝條蜜環(huán)菌液體栽培種生產(chǎn)用的蜜環(huán)菌原種通常是固體或液體。 在接種時(shí)需要嚴(yán)格控制菌瓶?jī)?nèi)的水位：使用固體蜜環(huán)菌原種接種時(shí)，瓶?jī)?nèi)水位以剛剛和枝條平齊為宜， 接種后要求蜜環(huán)菌原種的菌塊一半在水中一半露出水面； 使用液體蜜環(huán)菌原種接種時(shí)，瓶?jī)?nèi)水位以枝條露出水面1~2 cm為宜，接種后要求菌球（液體菌種中的菌絲結(jié)團(tuán)）露出水面。這樣操作有利于促進(jìn)菌種快速萌發(fā)，提高成活率。

3.3.5 保溫培養(yǎng) 接種后搬運(yùn)菌瓶時(shí)務(wù)必要保持直立，輕拿輕放。 將菌瓶放入培養(yǎng)室內(nèi)發(fā)菌培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度控制在18~24 ℃， 一般25~35 d 可以長(zhǎng)滿菌瓶。蜜環(huán)菌長(zhǎng)滿瓶后，繼續(xù)培養(yǎng)45~60 d，待菌絲由棕紅色逐漸變成亮白色， 瓶?jī)?nèi)結(jié)塊呈果凍狀后方可打包銷(xiāo)售。枝條蜜環(huán)菌栽培種菌種菌齡不足，播種后易被污染或菌絲不萌發(fā)。

3.3.6 留樣保存 每個(gè)蜜環(huán)菌品種、 每個(gè)批次留樣5~7 瓶， 于0~6 ℃下保存至正常生產(chǎn)條件下該批菌種生產(chǎn)出天麻或豬苓為止。

4 小結(jié)

科學(xué)應(yīng)用枝條蜜環(huán)菌液體栽培種生產(chǎn)技術(shù)，可以提高蜜環(huán)菌的產(chǎn)量和質(zhì)量，降低生產(chǎn)成本，減少環(huán)境污染。 生產(chǎn)過(guò)程中要嚴(yán)格控制培養(yǎng)條件，如溫度、濕度、光照等，同時(shí)還要注意防止雜菌污染，保證蜜環(huán)菌的品質(zhì)和產(chǎn)量。