7種殺菌劑對3種林木腐爛病菌的毒力測定及活性評價(jià)

摘要

林木腐爛病是蘋果樹、梨樹和楊樹等林木枝干的重要真菌性病害。為了篩選出對蘋果樹腐爛病菌Valsa"mali"var."mali、梨樹腐爛病菌V.mali"var."pyri和楊樹腐爛病菌V.sordida等3種不同寄主腐爛病菌都能有效防控的殺菌劑，本研究開展室內(nèi)毒力試驗(yàn)比較了7種殺菌劑對3種腐爛病病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的抑制效果，并進(jìn)一步通過田間活性測定試驗(yàn)比較7種殺菌劑對梨樹腐爛病病斑擴(kuò)展和分生孢子發(fā)生的防治效果，同時(shí)測定了增效劑8.6%聚乙二醇（PEG）對7種殺菌劑的增效作用。毒力測定結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇、吡唑醚菌酯和丙唑·多菌靈對3種腐爛病病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的抑制作用較強(qiáng)，其中EC50平均值最低的是苯醚甲環(huán)唑，而戊唑醇的MIC平均值最低，在0.33"mg/L濃度下對3種腐爛病病原菌的菌絲生長和分生孢子萌發(fā)抑制率均達(dá)到100%。田間試驗(yàn)結(jié)果表明，45%苯醚甲環(huán)唑SC、43%戊唑醇SC和35%丙唑·多菌靈SE對梨樹腐爛病病斑擴(kuò)展和分生孢子萌發(fā)的防治效果突出，其中45%苯醚甲環(huán)唑SC"30.00"mg/L對病斑擴(kuò)展防治效果達(dá)到82.23%，孢子萌發(fā)抑制效果達(dá)到85.96%，田間防治效果最好。10%丙硫唑SC+8.6%"PEG處理組對病斑擴(kuò)展防治效果提高了15.39百分點(diǎn)，達(dá)到73.46%，分生孢子萌發(fā)抑制率提高了23.75百分點(diǎn)，達(dá)到83.06%，增效作用顯著。本研究為蘋果樹、梨樹和楊樹等3種寄主腐爛病的化學(xué)防控提供了科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞

林木腐爛病;"梨樹腐爛病菌;"毒力測定與活性評價(jià);"增效劑

中圖分類號：

S"436.611.11

文獻(xiàn)標(biāo)識碼："B

DOI："10.16688/j.zwbh.2023072

Toxicity"and"field"control"efficacy"of"seven"fungicides"on"three"pathogens"of"Valsa"canker"disease

PAN"Zihao1，"ZHANG"Yizhi2，"LIU"Pengfei1，"QI"He3，"LI"Huiling4，"LOU"Binggan1*

（1."Institute"of"Biotechnology，"Zhejiang"University，"Key"Laboratory"of"Molecular"Biology"of"Crop"Pathogens"and"Insects，

Ministry"of"Agriculture"and"Rural"Affairs，"Hangzhou"310058，"China;"2."Forestry"and"Grassland"Bureau，"Xinjiang"Uygur

Autonomous"Region，"Korla"841000，"China;"3."Bayingol"Mongolian"Autonomous"Prefecture"Forestry"and"Grassland

Administration，"Xinjiang"Uygur"Autonomous"Region，"Korla"841000，"China;"4."Institute"of"Agricultural"Sciences"of

Bayingol"Mongolian"Autonomous"Prefecture，"Xinjiang"Uygur"Autonomous"Region，"Korla"841000，"China）

Abstract

Valsa"canker"is"an"important"fungal"disease"of"tree"branches"such"as"apple，"pear"and"poplar."In"order"to"screen"the"fungicides"which"can"effectively"control"the"pathogens"of"three"different"hosts，"Valsa"mali"var."mali，"V.mali"var."pyri"and"V."sordida，"laboratory"toxicity"test"was"conducted"to"compare"the"inhibitory"effects"of"seven"fungicides"on"mycelium"growth"and"conidial"germination"of"the"Valsa"canker"pathogens"of"three"different"hosts，"and"the"field"trial"was"conducted"to"compare"the"control"effects"of"seven"fungicides"on"lesion"expansion"and"conidial"germination"of"V.pyri."We"also"tested"the"synergistic"effect"of"8.6%"PEG，"a"fungicidal"synergist."Toxicity"test"indicated"that"difenoconazole，"tebuconazole，"pyraclostrobin"and"propiconazole·carbendazim"showed"higher"inhibition"effect"on"mycelium"growth"and"conidial"germination"of"three"tested"Valsa"canker"pathogens，"difenoconazole"showed"the"minimum"average"EC50"value"among"them，"and"the"inhibition"rates"of"tebuconazole"against"mycelial"growth"and"conidial"germination"of"three"Valsa"canker"pathogens"both"reached"100%"at"the"concentration"of"0.33"mg/L，"which"showed"the"minimum"average"MIC"value."Field"trial"demonstrated"that"difenoconazole"45%"SC，"tebuconazole"43%"SC"and"propiconazole·carbendazim"35%"SE"showed"better"control"effects"on"lesion"expansion"and"conidial"germination"of"pear"Valsa"canker."Among"them，"the"control"efficacy"on"lesion"expansion"of"difenoconazole"45%"SC"（30.00"mg/L）"reached"82.23%，"and"the"inhibition"rate"of"conidial"germination"in"the"field"reached"85.96%，"which"showed"the"best"control"effect"among"the"seven"fungicides."Albendazole"10%"SC"combined"with"synergist"8.6%"PEG"had"obvious"synergistic"effect，"with"the"control"efficacy"of"lesion"expansion"increased"by"15.39"percentage"points"and"the"inhibition"rate"of"conidial"germination"increased"by"23.75"percentage"points，"which"were"73.46%"and"83.06%，"respectively."The"above"results"provide"a"scientific"basis"for"the"chemical"control"of"three"host"canker"diseases，"such"as"apple，"pear"and"poplar.

Key"words

Valsa"canker"disease;"Valsa"mali"var."pyri;"toxicity"and"activity"evaluation;"synergist

林木腐爛病是由黑腐皮殼屬真菌（Valsa"spp.，"無性型為Cytospora"spp.）引起的世界性林木枝干病害，輕則造成樹皮潰瘍腐爛，導(dǎo)致樹勢衰弱、果品產(chǎn)量降低，重則整株干枯壞死。楊樹腐爛病主要由楊樹腐爛病菌V.sordida引起，V.mali則是引起我國蘋果樹腐爛病和梨樹腐爛病的主要病原菌，V.mali"又分為2個致病變種，其中梨樹腐爛病菌V.mali"var."pyri既能引起梨樹腐爛病也可以引起蘋果樹腐爛病，而蘋果樹腐爛病菌V.mali"var."mali則主要引起蘋果樹腐爛?。?3］。近年來，新疆地區(qū)林木腐爛病發(fā)生嚴(yán)重，在2017年以前，阿拉爾墾區(qū)90%以上的香梨樹死亡都是由梨樹腐爛病菌引起，巴州全區(qū)香梨樹腐爛病的平均發(fā)病率達(dá)到50%［4］，阿克蘇地區(qū)8～10年樹齡蘋果園的蘋果樹腐爛病平均株發(fā)病率為33.5%，嚴(yán)重的果園株發(fā)病率達(dá)80%［5］，大量的梨樹、蘋果樹和楊樹等林木枯死，甚至直接毀園，損失不計(jì)其數(shù)。腐爛病除了病原菌菌絲隨病斑擴(kuò)展，分生孢子同樣也是腐爛病的田間重要侵染源，一小塊能夠長出分生孢子角的病斑能在短期內(nèi)繁衍出大量分生孢子，使得病原菌在果園內(nèi)快速積累并侵染更多寄主［6］。由于新疆地區(qū)梨園、蘋果園常用楊樹作為防風(fēng)林，不同寄主之間的腐爛病菌存在交互侵染關(guān)系［23］，防控難度較大。同時(shí)，隨著重要檢疫性細(xì)菌病害梨火疫病在新疆地區(qū)的大面積發(fā)生，大量梨樹受到侵染導(dǎo)致樹勢下降，間接加劇了梨樹腐爛病發(fā)生的嚴(yán)重度，使得防控難度進(jìn)一步加大，嚴(yán)重制約了新疆地區(qū)林果產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

目前，腐爛病的防治仍以化學(xué)防治為主，隨著高毒殺菌劑福美胂的禁用和新型殺菌劑的推出，學(xué)者們針對腐爛病的有效化學(xué)藥劑篩選開展了廣泛的研究。相關(guān)研究表明，三唑類殺菌劑戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑?qū)τ谔O果樹腐爛病表現(xiàn)出較好的室內(nèi)抑菌效果和田間防治效果，可作為高毒禁藥福美胂的替代殺菌劑用于防控蘋果樹腐爛病［710］。甲基硫菌靈、吡唑醚菌酯、丙唑·多菌靈、噻霉酮等作為當(dāng)前國內(nèi)腐爛病的登記使用殺菌劑，對蘋果樹腐爛病同樣有很好的防治效果［912］。但上述殺菌劑對梨樹、蘋果樹和楊樹3種不同寄主腐爛病菌是否都有效，是否可以用一種藥劑同時(shí)防控3種腐爛病，目前未見有相關(guān)報(bào)道。因此，篩選出對于蘋果樹、梨樹和楊樹腐爛病病原菌菌絲和分生孢子均有抑制作用的殺菌劑，對防控新疆地區(qū)存在交叉侵染關(guān)系的蘋果樹、梨樹和楊樹3種腐爛病有著重要意義。

增效劑（助劑）是一類本身沒有生物活性的化合物，但與農(nóng)藥桶混后，能夠促進(jìn)農(nóng)藥的吸收與傳導(dǎo)、提高藥劑在作物表面吸附性，從而提高藥效，降低藥劑用量，減緩抗藥性產(chǎn)生，目前市面上常用的增效劑主要包括有機(jī)硅類、表面活性劑和植物油等［13］。已有研究表明，醚菌酯與農(nóng)用有機(jī)硅助劑混配后對馬鈴薯晚疫病的防效顯著提高，降低20%用藥量后防效仍高于常規(guī)無助劑處理［14］;甲硫·萘乙酸與乙基化和甲基化植物油混配后對蘋果樹腐爛病的田間防治效果顯著提升［15］。聚乙二醇（PEG）是由多個乙氧基重復(fù)單元構(gòu)成的線性聚醚，憑借其獨(dú)特的物理化學(xué)性能，近些年來在納米農(nóng)藥領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用［16］。R91是一種有效成分為8.6%"PEG的新型殺菌增效劑，不僅能夠提高殺菌劑的有效成分活力使其快速到達(dá)病株各部位殺死靶標(biāo)病菌，而且持效期長、安全無殘留，應(yīng)用前景廣闊。

本研究選用包括戊唑醇、甲基硫菌靈、吡唑醚菌酯、丙唑·多菌靈和噻霉酮5種蘋果樹腐爛病登記用藥在內(nèi)的共7種殺菌劑開展室內(nèi)毒力試驗(yàn)，測定7種殺菌劑對于蘋果樹、梨樹和楊樹腐爛病菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的抑制作用，并在此基礎(chǔ)上采用噴霧法進(jìn)行田間活性測定試驗(yàn)，比較7種殺菌劑對于梨樹腐爛病的防治效果差異，并通過添加增效劑8.6%聚乙二醇以期提高藥劑防效，旨在為蘋果樹、梨樹和楊樹3種不同寄主腐爛病的綠色防控新技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)，為新疆地區(qū)林果產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展提供保障。

1"材料與方法

1.1"供試材料

1.1.1"供試病原菌

蘋果樹腐爛病菌V.mali"var."mali、梨樹腐爛病菌V.pyri"var."pyri和楊樹腐爛病菌V.sordida均由浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所樓兵干教授于新疆維吾爾自治區(qū)庫爾勒市的病樹上分離純化獲得，經(jīng)過柯赫氏法則驗(yàn)證和系統(tǒng)鑒定后在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)、低溫保存。分別選取其中致病力較強(qiáng)的蘋果樹、梨樹和楊樹腐爛病菌株P(guān)GAKS1、L1AWT3和YSYD1作為本次研究的供試菌株。

1.1.2"殺菌劑及增效劑

本研究根據(jù)前人的相關(guān)研究報(bào)道［712］和本團(tuán)隊(duì)前期的試驗(yàn)結(jié)果，共選用7種殺菌劑和1種增效劑開展試驗(yàn)，分別為10%丙硫唑懸浮劑（貴州道元生物技術(shù)有限公司）、43%戊唑醇懸浮劑（拜耳作物科學(xué)有限公司北京分公司）、25%吡唑醚菌酯懸浮劑（安徽豐樂農(nóng)化有限責(zé)任公司）、35%丙唑·多菌靈懸乳劑（青島中達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司）、45%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑（華北制藥集團(tuán)愛諾有限公司）、50%甲基硫菌靈懸浮劑（山西德威本草生物科技有限公司）、3%噻霉酮可濕性粉劑（陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司），增效劑8.6%聚乙二醇（PEG）（云南奔牛生物科技有限公司）。

1.2"試驗(yàn)方法

1.2.1"殺菌劑對3種腐爛病菌的室內(nèi)毒力測定

1.2.1.1"殺菌劑對菌絲生長的抑制作用

采用菌絲生長速率法［17］分別測定殺菌劑對3種病原菌菌絲生長的抑制作用。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，分別取4"mL各待測殺菌劑10倍母液加入36"mL已滅菌冷卻至50℃的PDA培養(yǎng)基中充分混勻，倒入4個直徑為9"cm的培養(yǎng)皿中（每皿10"mL），待冷卻凝固后，分別取在PDA培養(yǎng)基上25℃黑暗培養(yǎng)48"h的供試病原菌菌株P(guān)GAKS1、L1AWT3和YSYD1的菌餅，菌絲面朝下接于含藥平板中央，"25℃恒溫黑暗培養(yǎng)。以3種病原菌菌餅分別接于不含藥PDA平板作為空白對照，每個處理和對照4次重復(fù)。72"h后，按照十字交叉法測量各處理與對照的菌落直徑，按照公式計(jì)算菌絲生長抑制率。以各殺菌劑處理濃度的對數(shù)值為自變量x，菌絲生長抑制率幾率值為因變量y，使用SPSS"23軟件進(jìn)行回歸分析，求出有效中濃度EC50值，并計(jì)算各殺菌劑對3種病原菌菌絲生長的EC50平均值來比較各殺菌劑對3種腐爛病菌菌絲生長的抑制作用。

菌落生長直徑=菌落直徑-菌餅直徑;

菌絲生長抑制率=（空白對照組菌落生長直徑-處理組菌落生長直徑）/空白對照組菌落生長直徑×100%。

1.2.1.2"殺菌劑對分生孢子萌發(fā)的抑制作用

采用離體枝條接種法［18］分別培養(yǎng)3種腐爛病菌的分生孢子。分別取長勢一致的2年生蘋果樹、梨樹、楊樹枝條，經(jīng)流動清水沖洗、75%乙醇和1%次氯酸鈉浸泡消毒后，在超凈工作臺上，用解剖刀在枝條中間切去直徑為5"mm的小塊樹皮，將培養(yǎng)48"h的病原菌菌株P(guān)GAKS1、L1AWT3和YSYD1的菌餅分別貼在蘋果樹、梨樹和楊樹枝條的傷口處，密封保濕培養(yǎng)，25℃恒溫光照培養(yǎng)15"d。待3種枝條上長出分生孢子角，用10%"PDB制備成濃度約為1×106個/mL的3種分生孢子懸浮液備用。

采用凹玻片法［19］測定殺菌劑對3種腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，分別吸取0.5"mL孢子懸浮液與0.5"mL配制好的待測殺菌劑2倍母液等量混合，然后取2滴混合液滴加于凹玻片上，以不加殺菌劑的孢子懸浮液作為空白對照，架放于含有淺層無菌水的培養(yǎng)皿中，25℃黑暗保濕培養(yǎng)，每個處理和對照3次重復(fù)。待對照組分生孢子萌發(fā)率超過90%時(shí)，觀察統(tǒng)計(jì)各處理分生孢子萌發(fā)情況，以孢子芽管長度大于孢子短半徑視為萌發(fā)。每個玻片至少觀察5個視野，每個視野至少統(tǒng)計(jì)50個孢子，記錄萌發(fā)孢子數(shù)，按照公式計(jì)算孢子萌發(fā)率和抑制率。以殺菌劑處理濃度對數(shù)值為自變量x，孢子萌發(fā)抑制率幾率值為因變量y，使用SPSS"23軟件進(jìn)行回歸分析，求出有效抑制中濃度EC50值，并計(jì)算各殺菌劑對3種病原菌分生孢子萌發(fā)的EC50平均值來比較各殺菌劑對3種腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用。

分生孢子萌發(fā)率=萌發(fā)的分生孢子數(shù)/分生孢子總數(shù)×100%;

分生孢子萌發(fā)抑制率=（空白對照組分生孢子萌發(fā)率-處理組分生孢子萌發(fā)率）/空白對照組分生孢子萌發(fā)率×100%。

1.2.2"殺菌劑對3種腐爛病菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的最低抑制濃度測定

依據(jù)1.2.1.1和1.2.1.2中毒力測定的結(jié)果，按照1.2.1.1和1.2.1.2中相同的方法分別測定7種殺菌劑對3種腐爛病菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的最低抑制濃度（MIC）。以梯度濃度的含藥PDA培養(yǎng)基（或含藥10%"PDB培養(yǎng)液）中無菌絲生長（或無分生孢子萌發(fā)）為完全抑制生長，對應(yīng)的最低濃度用“C-”表示，含藥PDA培養(yǎng)基（或含藥10%"PDB培養(yǎng)液）中有菌絲生長（或有分生孢子萌發(fā)）的最高濃度用“C+”表示，最后根據(jù)公式求出兩者的平均值即為最低抑制濃度（MIC），每個處理組和對照組設(shè)4個重復(fù)。用SPSS"23軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分析方法采用鄧肯氏新復(fù)極差法，顯著水平α=0.05。

MIC=（C++C-）/2。

1.2.3"殺菌劑對梨樹腐爛病菌的田間活性測定

1.2.3.1"試驗(yàn)地點(diǎn)

藥劑田間活性測定試驗(yàn)地位于新疆維吾爾自治區(qū)巴音郭楞蒙古自治州庫爾勒市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局育苗中心3號大棚，試驗(yàn)材料為3年生香梨幼樹，樹體健康無病蟲害，試驗(yàn)地栽培條件適宜。

1.2.3.2"藥劑活性測定試驗(yàn)設(shè)計(jì)

藥劑田間活性測定試驗(yàn)共設(shè)14個處理組和2個對照組。處理組分別為10%丙硫唑SC"166.67"mg/L、43%戊唑醇SC"107.50"mg/L、25%吡唑醚菌酯SC"166.67"mg/L、35%丙唑·多菌靈SE"583.33"mg/L、45%苯醚甲環(huán)唑SC"30.00"mg/L、50%甲基硫菌靈SC"500.00"mg/L、3%噻霉酮WP"37.50"mg/L、10%丙硫唑SC"166.67"mg/L+8.6%"PEG"143.33"mg/L、43%戊唑醇SC"107.50"mg/L+8.6%"PEG"143.33"mg/L、25%吡唑醚菌酯SC"166.67"mg/L+8.6%"PEG"143.33"mg/L、35%丙唑·多菌靈SE"583.33"mg/L+8.6%"PEG"143.33"mg/L、45%苯醚甲環(huán)唑SC"30.00"mg/L+8.6%"PEG"143.33"mg/L、50%甲基硫菌靈SC"500.00"mg/L+8.6%"PEG"143.33"mg/L、3%"噻霉酮WP"37.50"mg/L+8.6%"PEG"143.33"mg/L，對照組分別為陽性對照、陰性對照。試驗(yàn)以5株香梨樹為1個重復(fù)，處理組和對照組均設(shè)3個重復(fù)。

1.2.3.3"病原菌接種和施藥

在健康的香梨樹上挑選長勢基本一致的2年生枝干（長度大于1"m），在中間部位用滅菌解剖刀切去直徑為5"mm的小塊樹皮后，貼上培養(yǎng)48"h的梨樹腐爛病菌L1AWT3菌餅（直徑5"mm），并用透明保鮮膜纏繞固定、保濕。接種48"h后，取下菌餅和保鮮膜，噴施殺菌劑（或添加助劑的混劑），直至所接種枝干上均勻掛滿水珠形成細(xì)密的水膜。每個處理每隔10"d施藥1次，共計(jì)施藥3次。以接種菌餅并噴施清水為陽性對照，以貼空白PDA并噴施清水為陰性對照。

1.2.3.4"試驗(yàn)地發(fā)病情況調(diào)查與統(tǒng)計(jì)

1）病斑擴(kuò)展情況調(diào)查

調(diào)查記錄每次施藥后10"d各處理與對照組的病斑擴(kuò)展情況。測量各處理與對照組的病斑長度，根據(jù)公式計(jì)算防治效果。用SPSS"23軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分析方法采用鄧肯氏新復(fù)極差法，顯著水平α=0.05。

防治效果=（陽性對照組病斑長度-處理組病斑長度）/陽性對照組病斑長度×100%。

2）分生孢子活性調(diào)查

第1次施藥后10"d，對各處理與對照組病斑上的分生孢子活性進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)，并在第2次施藥后10"d再次調(diào)查。分別從各處理與對照的病斑上不同發(fā)病區(qū)域采集至少5小塊分生孢子角保存，帶回實(shí)驗(yàn)室后分別加入10%"PDB培養(yǎng)液中，制備成濃度約為1×106個/mL的分生孢子懸浮液，分別吸取2滴孢子懸浮液于凹玻片上，架放在含有淺層無菌水的培養(yǎng)皿中，25℃黑暗保濕培養(yǎng)，根據(jù)1.2.1.2節(jié)中相同的方法，待陽性對照組分生孢子萌發(fā)率超過90%時(shí)，觀察統(tǒng)計(jì)各處理組分生孢子萌發(fā)情況，計(jì)算分生孢子萌發(fā)率和萌發(fā)抑制率，用SPSS"23軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分析方法采用鄧肯氏新復(fù)極差法，顯著水平α=0.05。

2"結(jié)果與分析

2.1"殺菌劑對3種腐爛病病原菌的室內(nèi)毒力

7種殺菌劑對3種腐爛病病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，7種殺菌劑對3種腐爛病病原菌菌株P(guān)GAKS1、L1AWT3和YSYD1的菌絲生長和孢子萌發(fā)均有生物活性，不同殺菌劑對同種病原菌的抑制作用存在差異，同種殺菌劑對于3種病原菌的毒力同樣存在差異（表1、表2）?？傮w而言，在相同濃度下，供試殺菌劑對不同病原菌分生孢子的抑制效果基本都高于對菌絲的抑制效果，并且7種殺菌劑對楊樹腐爛病菌YSYD1的毒力基本都高于對蘋果樹腐爛病菌PGAKS1和梨樹腐爛病菌L1AWT3的毒力。在7種殺菌劑中，苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇、吡唑醚菌酯和丙唑·多菌靈抑制3種病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的EC50平均值均低于1.0"mg/L，表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制作用。其中苯醚甲環(huán)唑抑制3種病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的EC50平均值都最低，分別為0.028"mg/L和0.010"mg/L，毒力最強(qiáng)。丙硫唑和噻霉酮抑制菌絲生長的EC50平均值大于1.0"mg/L小于5.0"mg/L，抑制分生孢子萌發(fā)的EC50平均值大于0.1"mg/L小于1.0"mg/L，抑菌效果較好。甲基硫菌靈抑制菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的EC50平均值分別達(dá)到28.760"mg/L和9.514"mg/L，在5%水平上顯著高于其他殺菌劑，毒力最弱。

毒力方程的斜率反映了殺菌劑對于病原菌的急性毒作用帶，斜率值越大急性毒作用帶越小，藥效越好［20］。毒力測定結(jié)果表明（表1、表2），丙硫唑、戊唑醇和丙唑·多菌靈對3種病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的斜率值相對較大，3種病原菌對這3種殺菌劑更加敏感，其中丙硫唑的斜率值最大，敏感性最高。

2.2"殺菌劑對3種腐爛病病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的最低抑制濃度（MIC）

7種殺菌劑對3種腐爛病病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的最低抑制濃度（MIC）測定結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇、吡唑醚菌酯和丙唑·多菌靈抑制3種病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的MIC平均值均低于5.0"mg/L，表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制作用（表3、表4）。其中戊唑醇MIC平均值最低，在0.33"mg/L濃度下對3種病原菌的菌絲生長和分生孢子萌發(fā)抑制率均達(dá)到100%，毒力最強(qiáng)。苯醚甲環(huán)唑次之，在0.45"mg/L濃度下同樣能夠達(dá)到100%抑制效果。丙硫唑的MIC平均值分別為5.45、2.75"mg/L，抑菌效果較好。噻霉酮的MIC平均值分別為40.33、3.77mg/L，抑菌效果一般。甲基硫菌靈對菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的MIC平均值分別為241.00、111.67"mg/L，在5%水平上顯著高于其他殺菌劑，抑菌活性最低。

2.3"殺菌劑對梨樹腐爛病的田間活性

2.3.1"病斑擴(kuò)展防治效果

7種殺菌劑對梨樹腐爛病病斑擴(kuò)展的抑制作用結(jié)果表明，7種殺菌劑對該病害病斑擴(kuò)展均有不同程度的防治效果，不同殺菌劑之間防效有差異或有顯著差異，施藥次數(shù)越多，有效殺菌劑對梨樹腐爛病的防治效果越高（表5）。在7種殺菌劑的無助劑處理組中，45%苯醚甲環(huán)唑SC在3次田間調(diào)查中防效均最高，且在第1次施藥后防效超過50%，第2次超過70%，在第3次施藥后平均病斑長度只有8.27"cm，顯著低于除35%丙唑·多菌靈SE以外的其他5種殺菌劑處理組，防效達(dá)到了82.23%。其次是35%丙唑·多菌靈SE和43%戊唑醇SC，兩者在第2次施藥后防效均超過60%，第3次均超過70%，且兩者之間無顯著性差異。3%噻霉酮WP在3次調(diào)查中防效均低于50%，3次施藥后病斑長度達(dá)到25.6"cm，顯著高于其他6種殺菌劑處理組，防效只有44.44%。

在7種殺菌劑加助劑處理組中，10%丙硫唑SC和50%甲基硫菌靈SC與8.6%"PEG混配后防治效果顯著提升，并且隨著施藥次數(shù)的增加，增效作用逐漸提高。其中10%丙硫唑SC+8.6%"PEG處理組在第3次施藥后病斑長度為12.20"cm，顯著低于無助劑處理組的19.37"cm，防治效果達(dá)到73.46%，較無助劑處理組防效提高了15.39百分點(diǎn);50%甲基硫菌靈SC+8.6%"PEG第3次施藥后病斑長度為14.50"cm，顯著低于無助劑處理組的18.37"cm，防效達(dá)到68.76%，防效提高了8.30百分點(diǎn)。助劑對于3%噻霉酮WP的增效作用呈負(fù)增長趨勢，第3次施藥后病斑長度高達(dá)30.63"cm，顯著高于無助劑處理組的25.60"cm，防效降低了10.34百分點(diǎn)，僅為34.10%。助劑對其余4種殺菌劑的病斑擴(kuò)展防效影響不大，混配后防效與無助劑處理防效無顯著性差異。

2.3.2"分生孢子萌發(fā)抑制效果

7種殺菌劑對梨樹腐爛病的分生孢子萌發(fā)抑制作用結(jié)果表明，7種殺菌劑對梨樹腐爛病分生孢子萌發(fā)都有一定抑制作用，不同殺菌劑之間抑制效果有差異或有顯著差異（表6）。第1次施藥后10"d（第2次施藥前），各處理組的分生孢子萌發(fā)抑制率均低于50%，35%丙唑·多菌靈SE和43%戊唑醇SC的抑制率較高，均超過40%。除25%吡唑醚菌酯SC和3%噻霉酮WP以外的5種殺菌劑與增效劑混配后抑制率均有不同程度的提升，其中10%丙硫唑SC和50%甲基硫菌靈SC與增效劑混配后對分生孢子抑制率分別提高了12.29、9.33百分點(diǎn)。

第2次施藥后，在無助劑處理組中，43%戊唑醇SC和45%苯醚甲環(huán)唑SC對分生孢子抑制率分別達(dá)到了88.61%和85.96%，顯著高于其他5種殺菌劑處理組，抑制作用較強(qiáng)。50%甲基硫菌靈SC對分生孢子萌發(fā)抑制率只有33.06%，顯著低于其余6種殺菌劑處理組。加入助劑后，10%丙硫唑SC、50%甲基硫菌靈SC和35%丙唑·多菌靈SE對分生孢子萌發(fā)抑制率有較大提升，其中10%丙硫唑SC提高到83.06%，較無助劑處理組提升了23.75百分點(diǎn)，與抑制率最高的45%苯醚甲環(huán)唑SC和43%戊唑醇SC助劑處理組之間無顯著差異性;35%丙唑·多菌靈SE"和50%甲基硫菌靈SC的抑制率分別較無助劑處理組顯著提升了7.54、12.34百分點(diǎn)，分別為82.44%、45.40%。加入助劑后，25%吡唑醚菌酯SC和3%噻霉酮WP的分生孢子萌發(fā)抑制率有所降低，其中25%吡唑醚菌酯SC降低了9.42百分點(diǎn)，顯著低于無助劑處理組。43%戊唑醇SC和45%苯醚甲環(huán)唑SC與助劑混配后分生孢子萌發(fā)抑制率無顯著性變化。

3"結(jié)論與討論

本研究室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，7種藥劑中對蘋果樹、梨樹和楊樹腐爛病病原菌菌絲生長和分生孢子萌發(fā)抑制有效中濃度EC50平均值低于1.0"mg/L的殺菌劑有戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙唑·多菌靈和吡唑醚菌酯，最低抑制濃度MIC平均值低于5.0"mg/L的殺菌劑有戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙唑·多菌靈和吡唑醚菌酯。兩種毒力測定結(jié)果一致表明，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙唑·多菌靈和吡唑醚菌酯對3種腐爛病菌均有較強(qiáng)的抑制作用。田間活性測定結(jié)果表明，第3次施藥后對梨樹腐爛病病斑擴(kuò)展和分生孢子萌發(fā)的田間防治效果均大于70%的殺菌劑有43%戊唑醇SC、45%苯醚甲環(huán)唑SC和35%丙唑·多菌靈SE，與增效助劑混配后增效顯著且防效均大于70%的殺菌劑有10%丙硫唑SC。以上4種藥劑處理對梨樹腐爛病有較好的防治效果。

苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇同屬于脫甲基抑制劑中的三唑類化合物，作用靶標(biāo)是病原真菌體內(nèi)的C14α脫甲基酶，使得菌體內(nèi)麥角甾醇含量降低，菌體細(xì)胞膜功能受到破壞，從而抑制菌絲體和孢子的形成［2122］。前人研究表明，戊唑醇和苯醚甲環(huán)唑?qū)μO果樹腐爛病菌具有較高抑菌活性和田間防效［710］，本研究發(fā)現(xiàn)上述兩種藥劑除對蘋果樹腐爛病菌具有較高毒力，對梨樹和楊樹腐爛病菌也具有顯著抑制作用，甚至毒力更高，此研究結(jié)果為防控新疆地區(qū)3種不同寄主腐爛病菌的交叉侵染提供了科學(xué)依據(jù)。丙硫唑最早應(yīng)用于治療蠕蟲感染引起的臨床疾?。?3］，目前作為一種新型廣譜殺菌劑，安全低毒，對于一些真菌病害和細(xì)菌病害均有較好的防治效果。本研究結(jié)果表明，10%丙硫唑SC本身對梨樹腐爛病防治效果一般，連續(xù)施藥3次的防效僅有58.41%，但其與增效劑8.6%"PEG混配后的防效可達(dá)73.80%，超過了43%戊唑醇SC的防效（71.25%）。新疆地區(qū)梨園中近年來暴發(fā)的梨火疫病常與梨樹腐爛病混合發(fā)生，研究表明，10%丙硫唑SC對于梨火疫病同樣具有較好的防治效果［20］，在兩種病害的混發(fā)區(qū)，使用增效助劑8.6%"PEG混配10%丙硫唑SC能夠同時(shí)防控兩種病害，很大程度上降低了生產(chǎn)成本。35%丙唑·多菌靈SE是由有效成分濃度分別為7%和28%的丙環(huán)唑和多菌靈復(fù)配而成，具有多個殺菌活性位點(diǎn)，不易產(chǎn)生耐藥菌，主要用于蘋果樹腐爛病和輪紋病的防治，本研究結(jié)果表明35%丙唑·多菌靈SE對3種病原菌均有較高的抑菌活性，并且對梨樹腐爛病的田間防治效果僅次于45%苯醚甲環(huán)唑SC，推薦與戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑在田間交替使用，避免病原菌抗藥性產(chǎn)生，延長殺菌劑使用壽命［24］。

本研究還測定了7種殺菌劑與增效劑8.6%"PEG混配后的田間活性，結(jié)果表明不同藥劑與之混配后田間防效差異顯著。殺菌劑與助劑桶混后并非都具有增效作用，有時(shí)也會表現(xiàn)出拮抗作用或無影響［25］。本研究中10%丙硫唑SC與助劑混配后病斑的治療效果和孢子萌發(fā)抑制率均顯著提高，增效作用顯著;45%苯醚甲環(huán)唑SC、43%戊唑醇SC混配后防控效果無顯著變化;3%噻霉酮WP與25%吡唑醚菌酯SC混配后則防控效果顯著降低，表現(xiàn)出明顯的拮抗作用，推測可能是由于混合物組分之間的化學(xué)互作導(dǎo)致的。因此，在田間用藥時(shí)不可盲目選用增效劑桶混，需要根據(jù)藥劑的殺菌機(jī)理進(jìn)行合理搭配，并通過田間試驗(yàn)驗(yàn)證，避免藥效降低。此外，本研究團(tuán)隊(duì)在田間試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，增效劑8.6%"PEG在高濃度（286.66"mg/L）下會對香梨花序、葉片和果實(shí)造成不同程度的藥害，而在推薦濃度（143.33"mg/L）下噴施則安全無藥害，故在田間施用時(shí)務(wù)必嚴(yán)格控制使用濃度，避免香梨花期用藥。

長期以來，果農(nóng)們在田間防控腐爛病采用的一直是冬季刮除病斑涂抹藥劑的傳統(tǒng)方法，此方法需要耗費(fèi)大量的人力物力，不僅造成了樹體本身千瘡百孔、樹勢下降，而且只能對發(fā)病后期出現(xiàn)的明顯潰瘍斑進(jìn)行被動治療。腐爛病菌具有潛伏侵染、無癥帶菌率高、顯癥時(shí)間長的特點(diǎn)［26］，發(fā)病高峰期為每年初春和夏季。已有研究表明，在腐爛病預(yù)防關(guān)鍵期提前用藥淋刷樹體主干大枝，能夠顯著降低蘋果樹腐爛病的發(fā)病率［27］。本研究在溫室條件下模擬了病害侵染關(guān)鍵期采用噴霧法施藥防治梨樹腐爛病的田間活性測定，結(jié)果表明使用該方法在關(guān)鍵期每隔10"d施藥1次，連續(xù)3次施藥對于梨樹腐爛病病斑擴(kuò)展防治效果最高可達(dá)82.23%，分生孢子萌發(fā)抑制率最高可達(dá)89.56%。相比傳統(tǒng)刮治法，噴霧法具有作業(yè)效率高、生產(chǎn)成本低、兼具預(yù)防和治療作用的顯著優(yōu)勢，符合當(dāng)下農(nóng)業(yè)機(jī)械化噴霧用藥的規(guī)?；?jīng)營模式，順應(yīng)了黨的二十大提出的“農(nóng)業(yè)規(guī)?；?jīng)營”發(fā)展趨勢［28］，應(yīng)用潛力巨大。我們將在后續(xù)大田試驗(yàn)中針對噴霧法的有效藥劑選擇最佳用藥時(shí)機(jī)以及助劑的混配開展進(jìn)一步研究。

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