載銀氧化殼聚糖的制備與抑菌性能研究

紀蕾 劉天紅 王穎 李曉 李紅艷 孫元芹 姜曉東

摘要：為制備一種高效抑菌劑，以殼聚糖（chitosan，CS）為原料，采用漆酶/2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基（2，2，6，6-tetramethylpiperidine-1-oxyl，TEMPO）體系制備6-羧基殼聚糖（6-carboxyl chitosan，C-COS），然后與硝酸銀反應制備載銀氧化殼聚糖（silver-carried oxidized chitosan，C-COS-Ag），對其抑菌性能進行研究。結果表明，與CS相比，C-COS-Ag的抑菌效果明顯提高，其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別為（22.75±1.50）和（13.75±2.50） mm，最小抑菌質量濃度均為6.10 μg·mL-1。細菌生長曲線試驗證實，C-COS-Ag能明顯降低大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長速率；細胞內容物滲透試驗表明，C-COS-Ag能夠破壞細菌的細胞膜和細胞壁形態，導致核酸、蛋白質等大分子物質滲出，堿性磷酸酶活性上升，β-半乳糖苷酶活性下降，半乳糖合成途徑受阻，細菌正常代謝受到影響。以上研究結果為C-COS-Ag的應用提供了理論依據。

關鍵詞：殼聚糖；硝酸銀；抑菌性；大腸桿菌；金黃色葡萄球菌

doi：10.13304/j.nykjdb.2022.0769

中圖分類號：TS201.3 文獻標志碼：A 文章編號：1008‐0864（2024）03‐0214‐09

殼聚糖（chitosan， CS）是甲殼素脫乙酰基的產物，具有優異的生物和物理化學性質，如凝膠性、生物降解性、抑菌性等[1-4]，在醫療保健、環境保護等領域具有廣泛應用。殼聚糖通過破壞細菌的細胞壁、細胞膜及干擾細胞新陳代謝等途徑達到抑菌作用[5-9]。盡管殼聚糖擁有廣譜抗菌活性，但其抗菌效果仍低于已有的化學合成抗菌劑。由殼聚糖分子結構特點可知，其伯羥基、仲羥基以及氨基等基團具有較強的反應活性，是結構修飾的理想位點，可通過化學改性或與抗菌材料復配提高其抗菌活性[10-12]。吳慧清等[13]合成了殼聚糖鋅，與殼聚糖相比其抑菌性能明顯提高。牛梅等[14]制備了載銀殼聚糖復合抗菌劑，發現其對大腸桿菌（Escherichia coil）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）有明顯的抑制作用。

漆酶/2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基（2，2，6，6-tetramethylpiperidine-1-oxyl，TEMPO）體系可以選擇性將殼聚糖C-6伯羥基氧化成羧基，生成6-羧基殼聚糖（6-carboxyl chitosan，C-COS），且整個過程無副反應發生，無有害物產生，減少了環境污染，是一種殼聚糖綠色改性方法。本研究采用漆酶/TEMPO體系制備C-COS，然后與硝酸銀反應制備了載銀氧化殼聚糖（silver-carried oxidizedchitosan，C-COS-Ag），研究其對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌性能及作用機制，利用細菌生長曲線表征C-COS-Ag的抑菌效果，通過細胞內容物滲透（小分子、核酸、蛋白質）和細菌胞內酶（堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶）活性的變化，分析細菌細胞膜的通透性及完整性，探究其抗菌機制，為C-COS-Ag在抑菌領域的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗材料 殼聚糖，脫乙酰度95%，購自上海源葉生物科技有限公司。

1.1.2 試驗試劑 大腸桿菌（ 編號：ATCC25922）、金黃色葡萄球菌（編號：ATCC 11779），青島高科技工業園海博生物技術有限公司；漆酶，諾維信（中國）生物技術有限公司；2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧自由基（TEMPO），默克Sigma-Aldrich 公司；總蛋白（total protein，TP）測定試劑盒、堿性磷酸酶活性檢測試劑盒， 南京建成生物工程研究所；β-半乳糖苷酶活性檢測試劑盒，北京索萊寶科技有限公司；營養瓊脂、營養肉湯，北京陸橋技術有限責任公司。

1.1.3 試驗儀器 VERTEX70傅里葉變換紅外光譜儀，德國布魯克公司；UV-2450 紫外分光光度計，日本島津儀器有限公司；S-4800N型掃描電子顯微鏡，日本日立公司；Victor-Rivo5s多功能酶標儀，美國珀金埃爾默公司；Orion VERSA STAR多參數測量儀，美國賽默飛世爾科技公司；SX-500高壓滅菌鍋，日本Kagoshima Seisakusyo Inc公司；CR21N高速冷凍離心機，日本日立公司；JTM1812/30-1多功能膜小型試驗機，大連屹東有限公司；FD-1-50真空冷凍干燥機，北京博醫康醫學設備有限公司；ZNCL-DLS磁力加熱鍋，上海科升有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 載銀氧化殼聚糖的制備 取2 g CS 和0.08 g TEMPO溶于200 mL pH 4.6的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，添加200 μL漆酶，40 ℃水浴鍋中通氧反應18 h。反應后離心去除不溶物，過超濾膜濃縮濾液后加入適量無水乙醇析出產物，過濾、真空干燥，制得C-COS。稱取0.24 g 樣品，溶于30mL 乙酸- 乙酸鈉緩沖溶液中，加入25 mL 0.01mol·L-1的硝酸銀溶液，50 ℃下反應1.5 h。經丙酮析出沉淀、濾膜抽濾、乙醇多次洗滌、真空干燥得到C-COS-Ag。

1.2.2 培養基的制備 稱取33 g營養肉湯于1 L蒸餾水中，加熱攪拌至溶解，高壓滅菌、冷卻后備用。

1.2.3 菌懸液的制備 挑取平板活化18～24 h的培養菌落，接種于營養肉湯液體培養基中培養，用無菌生理鹽水校正菌液濁度，使其含量范圍在106 CFU·mL-1左右備用。

1.2.4 紅外光譜檢測 將樣品放于紅外光譜儀上進行KBr壓片法檢測。紅外檢測掃描的波數范圍設定為4 000～500 cm-1，分辨率為4 cm-1，掃描次數為16次。

1.2.5 超微結構的測定 將少量的待測樣品通過導電膠粘貼在固定臺上，噴金后放入樣品腔內，抽真空，打開燈絲，在控制軟件中設定參數，用掃描電子顯微鏡觀察其表觀形貌。

1.2.6 抑菌性能的測定 參照卞能源等[15]的方法，采用牛津杯疊法測定抑菌效果。將200 μL活化的大腸桿菌菌懸液均勻涂布于平板，平板放置4個牛津杯（十字直徑擺放，保證每孔之間的距離不小于2 cm），然后每孔加入200 μL抗菌劑溶液（稱取0.02 g的樣品置于EP管中，分別加入4 mL醋酸-醋酸鈉緩沖溶液），最后正置放入生化培養箱中，37 ℃培養24 h，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，每孔取不同方向測量3次， 取平均值。

參照吳增華[16]的方法，采用二倍稀釋法測定最小抑菌濃度（minimal inhibit concentration，MIC）。取無菌96孔酶標板，每孔加入100 μL滅菌液體培養基；第1孔中加入100 μL C-COS-Ag溶液，充分混勻后取出100 μL混合液加入到第2孔中，如此逐級稀釋，然后加入100 μL菌懸液；陰性對照組分別加入100 μL滅菌液體培養基和C-COS-Ag溶液，不加菌懸液；將最后1行設為陽性對照組，不加C-COS-Ag溶液，分別加入100 μL 培養基和菌懸液，混勻后置于37 ℃培養24 h。培養后觀察并判定是否長菌（其中渾濁表示顯著長菌，澄清表示未長菌），確定MIC。

1.2.7 生長曲線的測定 參考梅佳林等[17]的方法略作修改。將C-COS-Ag加入營養肉湯液體培養基中，使其終水平分別為1×MIC、2×MIC，空白對照組不添加C-COS-Ag。每管中9 mL溶液，再向每個試管加入1 mL 1×106 CFU·mL-1的菌液，在37 ℃下培養，分別在培養0、2、4、6、8、12、24 h時測定吸光度OD600值，并繪制微生物的生長曲線，重復3次。

1.2.8 細菌胞內小分子物質泄漏（電導率）的測定 參考梅佳林等[17]的方法測電導率。取培養至對數生長期的菌液，8 000 r·min-1離心10 min，棄上清收集菌體，用PBS洗滌3次形成重懸液。向重懸液中分別加入1×MIC和2×MIC的C-COS-Ag，于搖床中100 r·min-1 培養6 h，每小時取樣測電導率。

1.2.9 細菌胞內核酸類物質泄漏的測定 按1.2.8中的方法制備重懸液并分別加入1×MIC和2×MIC 的C-COS-Ag，然后在37 ℃、100 r·min-1 搖床中培養6 h，取菌懸液于6 000 r·min-1 離心10 min，濾膜過濾。使用酶標儀測定其OD260值。

1.2.10 細菌胞內蛋白質泄漏的測定 按1.2.8中的方法制備重懸液并分別加入1×MIC 和2×MIC的C-COS-Ag，然后搖床中100 r·min-1培養6 h，每2 h取菌懸液離心，上清液用蛋白測定試劑盒（考馬斯亮藍法[18]）測蛋白質含量。

1.2.11 細菌胞內酶活性的測定 按1.2.8 中的方法制備重懸液并分別加入1×MIC 和2×MIC 的C-COS-Ag，然后在37 ℃、100 r·min-1 搖床中培養4 h，參照測試盒說明書方法，分別測定堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）活性和β-半乳糖苷酶（β-galactosidase， β-GAL）活性。

2 結果與分析

2.1 紅外光譜檢測分析

C-COS的紅外光譜圖特征吸收峰與CS基本一致，但有以下不同：波數為3 600 cm-1到3 200 cm-1處，C-COS比CS的吸收峰譜帶明顯變寬，且向低頻方向遷移，推測C-COS形成了更多的氫鍵，導致吸收峰發生了上述變化；在1 643 cm-1處出現強度明顯高于酰胺Ⅱ譜帶的羧酸根C=O伸縮振動峰，另外在1 410 和1 070 cm-1處吸收峰強度增強，表明存在羧酸根、C-O的伸縮振動效應。以上結果表明，CS在漆酶/TEMPO體系中經氧化反應引入了羧基。

由圖1 可知，C-COS 中N-H 和O-H 伸縮振動偶合形成一寬峰，吸收峰在3 400 cm-1處。與Ag+結合后，在C-COS-Ag 的譜圖中向低頻方向移動到3 300 cm-1 處，且峰形略有變化，說明C-COS 上的-NH2 或-OH 可能參與了配位。C-COS-Ag 在1 643 cm-1處羧酸根C=O的伸縮振動峰面積變小，說明羧基與Ag+發生了反應。

2.2 超微結構的測定分析

通過掃描電子顯微鏡觀察CS、C-COS 和C-COS-Ag的表面形貌（圖2）發現，其表面結構發生了明顯變化。CS表面粗糙，顆粒尺寸不均勻，材料彼此緊密重疊（圖2A、B）。C-COS具有相對松散的分子結構，其表面主要由堆積的球形顆粒組成（圖2C、D）。以上結果表明，CS分子中引入的羧基增強了分子內的相互作用力，有利于其自身雙螺旋結構的大空間卷曲。C-COS-Ag表面粗糙，大量粒狀材料分散在表面上（圖2E、F），因此可以推斷Ag已配位到C-COS上。

2.3 抑菌性能的分析

由CS、C-COS-Ag 的抑菌效果（表1）可知，C-COS-Ag對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別為（22.75±1.50）和（13.75±2.50） mm，與CS相比，C-COS-Ag的抑菌效果明顯增強，這是由于CS經氧化及與硝酸銀的配位，進一步提高了其抑菌性。基于C-COS-Ag的抑菌效果，通過二倍稀釋法測定其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC均為6.10 μg·mL-1，明顯低于CS。

2.4 抑菌機理分析

2.4.1 C-COS-Ag 對細菌生長的影響 由圖3、4可知，隨著時間的延長，對照組大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長繁殖逐漸加快，基本符合細菌的典型生長規律（S型生長）；而加入C-COS-Ag后，1×MIC、2×MIC組中2種細菌的OD600均無明顯變化，表明C-COS-Ag能延遲對數期的到來，降低菌株的生長速率，有效抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的生長繁殖。C-COS-Ag含量越高，抑制效果越好，這種現象與其他抑菌物質對細菌的生長抑制效果一致[19]。

2.4.2 C-COS-Ag對細菌胞內小分子物質泄漏（電導率）的影響 圖5、6反映了C-COS-Ag對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌電導率的影響，當細菌細胞膜受損時，通透性增加，會導致胞內鉀鹽、磷酸鹽等小分子滲出，使菌液電導率升高[20]。可以看出，隨著時間的延長，對照組菌液電導率無明顯變化，表明細菌細胞膜的通透性保持較好；加入1×MIC和2×MIC的C-COS-Ag后菌液電導率逐漸上升，表明C-COSAg破壞了大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的細胞膜，使其通透性增加，導致菌液電導率明顯上升。

2.4.3 C-COS-Ag對細菌胞內核酸類物質泄漏的影響 如圖7、8所示，含C-COS-Ag菌懸液的OD260值隨時間的延長迅速升高，而對照組變化不明顯，說明C-COS-Ag會使細菌細胞膜發生破損，導致核酸類物質泄露出來，表明其對細菌細胞產生不良影響。這與肉桂醛會破壞大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的細胞膜完整性，導致內容物釋放的結論[21-22]類似。

2.4.4 C-COS-Ag對細菌胞內蛋白質泄漏的影響 蛋白質是生命活動的主要載體，具有運送營養物質、維持新陳代謝等重要功能，是機體不可或缺的重要部分， 當細胞結構遭到破壞，細胞膜滲透性增加，蛋白等大分子物質會大量滲出[23]。由大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的胞外蛋白含量變化（圖9、10）可知，由于細菌的正常生長繁殖消耗，導致對照組培養基中蛋白質含量有所降低，而經過C-COS-Ag作用后，細菌胞外蛋白質含量逐漸上升，說明C-COS-Ag使細胞膜的通透性增大，甚至可以損壞細胞膜，導致蛋白質流出。

2.4.5 C-COS-Ag對細菌胞內酶活性的影響 細胞壁完整性主要是通過AKP和β-GAL活性測定。AKP是一種位于細胞壁和細胞膜之間的細胞內酶，在正常情況下，細胞外環境中無法檢測到其活性，但如果細胞壁受損，則會導致其泄漏到細胞外環境中，從而提高環境中的酶活性[24]。β-GAL活性主要是針對細胞壁代謝中降解的多糖、糖蛋白以及半乳糖殘基的水解，通過測定釋放出的半乳糖物質進行分析，β-GAL活性明顯下降說明菌株細胞壁受損，半乳糖合成途徑受阻[25]。從表2可以看出，經過C-COS-Ag處理后，AKP的活性與對照組相比有所增加，β-GAL活性有所下降，表明C-COS-Ag使細胞壁受損，從而抑制細菌生長。

3 討論

目前，纖維素中C-6羥基選擇性氧化的最常見方法是在堿性條件下通過自由基TEMPO 與NaBr/NaOCl 結合，該技術較成熟，且得到一定應用，但反應過程存在一些缺點，例如反應條件較復雜，反應過程中會產生溴代副產物以及氯代副產物等，且反應產生的大量氯氣會污染環境[26‐27]。在工業過程中使用酶技術可以減少其對環境和經濟的負面影響。漆酶/TEMPO 介導的氧化比TEMPO/NaBr/NaClO 處理在更溫和的條件下進行，產生的環境有害殘留物更少[28‐29]，符合國家工業綠色低碳轉型的發展理念。

將殼聚糖及其衍生物與無機抗菌劑復配，其協同作用可有效改善抑菌效果，銀是無機抗菌材料，可通過緩慢釋放作用，改善其抗菌的持久性。王祖華等[30]制備了載銀殼聚糖，發現其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC為80 μg·mL-1，明顯高于本研究制備的載銀氧化殼聚糖，表明載銀氧化殼聚糖的抑菌性能優于載銀殼聚糖。趙儒男等[31]利用新型殼聚糖乳液對丁香酚進行直接包載，研究其抑菌效果，發現其能夠顯著抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長，MIC為312.5 μg·mL-1，也明顯高于本研究制備的載銀氧化殼聚糖，表明載銀氧化殼聚糖的抑菌性能優于丁香酚-殼聚糖乳液。朱麗[32]制備了溶菌酶/TEMPO/漆酶殼聚糖抑菌劑、溶菌酶/殼聚糖酶-TEMPO/漆酶殼聚糖抑菌劑、肉桂醛/TEMPO/漆酶殼聚糖抑菌劑和肉桂醛/殼聚糖酶-TEMPO/漆酶殼聚糖抑菌劑，并對這4種抑菌劑的抑菌效果進行研究，發現溶菌酶-TLCS抑菌劑對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌效果最好，抑菌圈直徑分別為13.89和13.13 mm，抑菌效果均低于本研究制備的載銀氧化殼聚糖。

本研究通過抑菌活性試驗及抗菌機理的探索，進一步驗證了載銀氧化殼聚糖對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有顯著抑菌效果，其原理是通過改變細胞膜的通透性，使菌液電導率升高，核酸、蛋白質等大分子物質滲出，AKP活性上升，細胞壁受損，β-GAL活性下降，半乳糖合成途徑受阻，細菌正常代謝受到影響，從而抑制細菌的生長。研究結果可為殼聚糖資源的利用提供理論依據。未來，關于載銀氧化殼聚糖的穩定性以及對霉菌和真菌的作用有待進一步研究。

參考文獻

［1］ 姚劍松， 左華江， 徐然， 等. 殼聚糖的抗菌改性及應用[J]. 廣

東化工， 2019， 46（21）： 70-71， 77.

YAO J S， ZUO H J， XU R， et al .. Antibacterial modification

and application of chitosan [J]. Guangdong Chem. Ind.， 2019，

46（21）： 70-71， 77.

［2］ SHARIATINIA Z. Carboxymethyl chitosan： properties and

biomedical applications [J]. Int. J. Biol. Macromol.， 2018， 120（7）：

1406 -1419.

［3］ 崔升， 袁美玉， 付俊杰， 等. 抗菌用殼聚糖及其金屬粒子復

合材料研究進展[J]. 精細化工， 2021， 38（9）： 1757-1764.

CUI S， YUAN M Y， FU J J， et al .. Research progress of

chitosan and its metal particle composite materials for

antibacterial application [J]. Fine Chem.， 2021， 38（9）： 1757-

1764.

［4］ RAGHAVENDRA G M， JUNG J， KIM D， et al .. Chitosanmediated

synthesis of flowery-CuO， and its antibacterial and

catalytic properties [J]. Carbohyd. Polym.， 2017， 172： 78-84.

［5］ 李曉芳， 馮小強， 楊聲. 殼聚糖對革蘭氏陰性菌抑菌機理的

初步研究[J]. 食品科學， 2010， 31（13）： 148-153.

LI X F， FENG X Q， YANG S. A mechanism of antibacterial

activity of chitosan against gram-negative bacteria [J]. Food

Sci.， 2010， 31（13）： 148-153.

［6］ 路振香， 路穎， 商常發， 等. 殼聚糖對5種細菌體外的抑制試

驗[J].動物醫學進展， 2006，27（3）： 62-64.

LU Z X， LU Y， SHANG C F， et al .. The experiement of

bacteriostases of chitosan in vitro [J]. Progress Veterin. Med.，

2006， 27（3）： 62-64.

［7］ 韓永萍， 李可意， 楊宏偉， 等. 殼聚糖的抗菌機理及其化學

改性研究[J]. 化學世界， 2012， 53（4）： 248-252.

HAN Y P， LI K Y， YANG H W， et al .. Research on

antibacterial mechanism of chitosan and its chemical

modification [J]. Chem. World， 2012， 53（4）： 248-252.

［8］ TANG H， ZHANG P， KIEFT T L， et al .. Antibacterial action of

a novel functionalized chitosan-arginine against Gram-negative

bacteria [J]. Acta Biomater.， 2010， 6（7）： 2562-2571.

［9］ MELLEGRD H， STRAND S P， CHRISTENSEN B E， et al ..

Antibacterial activity of chemically defined chitosans： influence

of molecular weight， degree of acetylation and test organism [J].

Int. J. Food Microbiol.， 2011， 148（1）： 48-54.

［10］ FAZLI W， WANG H S， LU Y S， et al .. Preparation，

characterization and antibacterial applications of carboxymethyl

chitosan/CuO nanocomposite hydrogels [J]. Int. J. Biol. Macromol.，

2017， 101（4）： 690-695.

［11］ LUO P F， NIE M， WEN H G， et al .. Preparation and

characterization of carboxymethyl chitosan sulfate/oxidized

konjac glucomannan hydrogels [J]. Int. J. Biol. Macromol.，

2018， 54（7）： 1024-1031.

［12］ 開梓翔， 劉春， 劉宇翔， 等. 羧甲基殼聚糖復合納米銀、納

米氧化銅的制備及抑菌性研究[J]. 生物醫學工程研究，

2021， 40（1）： 38-42.

KAI Z X， LIU C， LIU Y X， et al .. Preparation and

bacteriostatic properties of carboxymethyl chitosan composite

Ag nanoparticles or CuO nanoparticles [J]. J. Bio. Eng. Res.，

2021， 40（1）： 38-42.

［13］ 吳慧清， 吳清平， 石立三， 等. 殼聚糖及其金屬鋅配位絡合

物的抑菌性能研究[J]. 食品科學， 2006，11（12）： 75-78.

WU H Q， WU Q P， SHI L S， et al .. Study on antimicrobial

capability of chitosan-Zn complex and chitosan [J]. Food Sci.，

2006， 11（12）：75-78.

［14］ 牛梅， 戴晉明， 侯文生， 等. 載銀殼聚糖復合物的結構及其

抗菌性能研究[J]. 材料導報， 2011， 25（10）： 15-26.

NIU M， DAI J M， HOU W S， et al .. Study on the structure and

antibacterial activity of Ag-loading chitosan composites [J].

Mater. Rev.， 2011， 25（10）： 15-26.

［15］ 卞能源， 潘玙璠， 張新莉， 等. 載銀氧化殼聚糖復合物的制

備及其抑菌性能的研究[J]. 功能材料， 2019， 50（12）： 12118-

12125.

BIAN N Y， PAN Y F， ZHANG X L， et al .. Preparation of silverloaded

oxidized chitosan complex and study on its antibacterial

properties [J]. J. Funct. Mater.， 2019， 50（12）： 12118-12125.

［16］ 吳增華. 幾種中草藥對大腸桿菌抑菌抗病作用及對綿羔羊

的增重免疫實驗研究[D].北京：中國農業科學院，2013.

WU Z H. A study on bacteriostatic effect of several kinds of

chinese herbal medicine against Escherichia coli and lamps

liveweight gain [D]. Beijing： Chinese Academy of Agricultural

Sciences， 2013.

［17］ 梅佳林， 李婷婷， 張星暉， 等. 芳樟醇對三文魚源莓實假單

胞菌的抑菌機理[J]. 食品科學， 2022， 43（9）： 199-206.

MEI J L， LI T T， ZHANG X H， et al .. Antibacterial mechanism

of linalool against Pseudomonas fragi from salmon [J]. Food

Sci.， 2022， 43（9）： 199-206.

［18］ CUI H， ZHANG C， LI C， et al .. Antibacterial mechanism of

oregano essential oil [J]. Ind. Crops Prod.， 2019， 139（8）：

111-125.

［19］ 何柳， 王云鵬， 謝衛紅， 等. 艾葉水提物和酸提物的抗氧化

及抗菌活性比較[J]. 現代食品科技，2021，37（10）： 205-213.

HE L， WANG Y P， XIE W H， et al .. Comparetive of antioxidat

and antibacterial activities of aqueous and acid extracts from

artemisia argyi [J]. Mod. Food Sci. Technol.， 2021， 37（10）：

205-213.

［20］ National Committee for Clinical Laboratory Standards. Methods

for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that

grow aerobically [S]. USA： Clinical and Laboratory Standards

Institute， 2000.

［21］ OU P， SUN M， HE X， et al .. Sclareol protects Staphylococcus

aureus-induced lung cell injuryvia inhibiting alpha-hemolysin

expression [J]. J. Microbiol. Biotechnol.， 2016， 27（1）： 19-25.

［22］ 張赟彬， 劉笑宇， 姜萍萍， 等. 肉桂醛對大腸桿菌和金黃色

葡萄球菌的抑菌作用及抑菌機理研究[J]. 現代食品科技，

2015， 31（5）： 31-35.

ZHANG Y B， LIU X Y， JIANG P P， et al .. Mechanism and

antibacterial activity of cinnamaldehyde against Escherichia

coli and Staphylococcus aureus [J]. Mod. Food Sci. Technol.，

2015， 31（5）： 31-35.

［23］ 衛夢綺. 枯茗醛對黃曲霉生長的抑制作用及機理初探[D].

西安： 陜西科技大學， 2019.

WEI M Q. The inhibitory activity and preliminary mechanism

of cuminaldehyde on the growth of Aspergillus flavus [D]. Xian：

Shaanxi University of Science & Technology， 2019.

［24］ 藍蔚青， 車旭， 謝晶， 等. 復合生物保鮮劑對熒光假單胞菌

的抑菌活性及作用機理[J]. 中國食品學報， 2016， 16（8）：

159-165.

LAN W Q， CHE X， XIE J， et al .. Antibacterial activity and

mechanism of composite biological preservatives against

Pseudomonas fluorescens [J]. J. Chin. Inst. Food Sci. Technol.，

2016， 16（8）： 159-165.

［25］ 趙莉. 痰細胞細菌培養的臨床意義[J]. 黑龍江醫藥科學，

2013， 36（5）：9-10.

ZHAO L. The clinical value of bacterial culture of sputum cells [J].

Heilongjiang Med. Pharm.， 2013， 36（5）：9-10.

［26］ GERT E V， TORGASHOV V I， ZUBETS O V， et al ..

Preparation and properties of enterosorbents based on carboxylated

microcrystalline cellulose [J]. Cellulose， 2005， 12（5）： 517-526.

［27］ SAITO T， ISOGAI A. Introduction of aldehyde groups on

surfaces of native cellulose fibers by TEMPO-mediated

oxidation [J]. Colloids Surf. A， 2006， 289（1-3）： 219-225.

［28］ ARACRI E， VIDAL T. Enhancing the effectiveness of a

laccase-TEMPO treatment has a biorefining effect on sisal

cellulose fibres [J]. Cellulose， 2012， 19（3）： 867-877.

［29］ ARACRI E， VIDAL T， RAGAUSKAS A J. Wet strength development

in sisal cellulose fibers by effect of a laccase-TEMPO

treatment [J]. Carbohydr. Polym.， 2011， 84（4）： 1384-1390.

［30］ 王祖華， 劉萍， 楊瑞先， 等. 綠色合成載銀殼聚糖及其等溫

線、動力學及抑菌性[J].人工晶體學報， 2021， 50（12）： 2307-

2315.

WANG Z H， LIU P， YANG R X， et al .. Synthesis of Agchitosan

by green route and its isotherms， kinetic and

antimicrobial activity [J]. J. Synth. Cryst.， 2021， 50（12）： 2307-

2315.

［31］ 趙儒男， 李艷. 丁香酚-殼聚糖乳液的制備及其抑菌性評

價[C]//中國食品科學技術學會第十六屆年會暨第十屆中美

食品業高層論壇. 武漢，中國食品科學技術學會， 2019：

426-427.

［32］ 朱麗. 殼聚糖基抑菌劑的制備、性能及在草莓和鮮銀耳抑

菌保鮮中的應用研究[D].長春： 吉林大學，2019.

ZHU L. Preparation and properties of chitosan-bacteriostatic

agents and their application in strawberry and fresh tremella

fuciformis bacteriostatic preservation [D]. Changchun： Jilin

University， 2019.

（責任編輯：胡立霞）