貓兒山小鯢分布新紀錄

摘 要 貓兒山小鯢（Hynobius maoershanensis）已知僅分布于廣西貓兒山國家級自然保護區。2022 年3 月，在廣西壯族自治區桂林市全州天湖國家濕地公園（26°6'21″ N，110°54'14″ E；1 680 m）采集到小鯢標本，經鑒定為貓兒山小鯢，這是繼2006年于貓兒山保護區首次發現后的第2處分布新紀錄。基于線粒體16S rRNA基因和COI基因片段進行系統發育分析，表明新紀錄所采小鯢標本與貓兒山原產地標本相聚構成單系，遺傳距離0. 5%，進一步更新了貓兒山小鯢的分布海拔范圍，較之前記錄的分布海拔1 966 m以上降至1 680 m，提示該種有更廣闊的生態位，這一發現對今后該物種的科學管理及保護具有重要意義。

關鍵詞：貓兒山小鯢；DNA條形碼技術；新紀錄

中圖分類號：Q958. 1 文獻標識碼：A 文章編號：2310 - 1490（2024）- 02 - 0441 - 07

DOI：10.12375/ysdwxb.20240226

小鯢屬（Hynobius）是亞洲特有的有尾兩棲動物，現已知31種，占全科物種數（65種）的47. 7％［1?3］，我國現有小鯢屬物種12種，包括東北小鯢（H. leechii）、中國小鯢（H. chinensis）、楚南小鯢（H. sonani）、臺灣小鯢（H. formosanus）、觀霧小鯢（H. fucus）、阿里山小鯢（H. arisanensis）、義烏小鯢（H. yiwuensis）、安吉小鯢（H. amjiensis）、掛榜山小鯢（H. guabangshanensis）、貓兒山小鯢（H. maoershanensis）、南湖小鯢（H. gla?cialis）和虛竹小鯢（H. bambusicolus）［3］，其中，貓兒山小鯢為廣西壯族自治區的特有種［4］，分布十分狹窄，僅分布于廣西貓兒山國家級自然保護區海拔2 000 m的森林沼澤地及周邊地區，附近的植被多為鐵杉（Tsuga chinensis）和南方山頂矮林，棲息地植被繁茂。該物種對繁殖棲息地要求嚴格，僅在水質清澈的靜水潭中繁殖產卵［5］。該物種頭較大，略扁；頭長大于寬；吻端圓，無唇褶；犁骨齒為“V”形；頭體光滑，頸褶明顯；背部中央從頭至尾基部有縱行嵴溝；掌和指、踱和趾均無掌突和踱突；前足4 指，后足5趾；體背面顏色一般為黑色或淺紫棕色，無斑紋；體腹、側呈灰色，散布許多白色小斑點；雄性肛部隆起，前緣有小乳突，肛孔縱裂，雌性肛孔呈圓形［5?7］。

2022年3月，在廣西桂林市全州天湖國家濕地公園湖泊淺水區采集到小鯢標本（圖1）（標本號TH22001，雌性）。由于小鯢屬物種均有其獨特的形態學特征，且變態發育過程中幼體與成體的形態特征差異較大，常因形態特征不穩定等主觀因素影響鑒別［8?9］。鑒于DNA條形碼技術在物種鑒定方面的準確有效性［10］，通過擴增和測序COI和16S rRNA兩種DNA條形碼序列，對全州天湖新紀錄物種進行鑒定，同時結合形態學特征進行鑒定，確定新紀錄種為貓兒山小鯢，這是繼2006年于廣西貓兒山國家級自然保護區首次發現貓兒山小鯢后的第2 處分布新紀錄。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

標本采自廣西全州天湖國家濕地公園湖泊淺水區（26°6'21″ N，110°54'14″ E）。標本采用斷尾法取樣，保存在100%乙醇中用于DNA提取，剩余標本固定在10% 福爾馬林中，隨后轉移至75% 乙醇溶液中，現保存于廣西師范大學廣西珍稀瀕危動物生態學重點實驗室。

1. 2 DNA 提取、擴增及測序

采用Sanger測序法，利用Ezup柱式動物組織基因組DNA抽提試劑盒對樣品進行DNA提取，通過對樣品的16S rRNA 基因序列（5'-CGCCTGTTTATCAAAAACAT-3'）、COI 基因序列（5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTG-3'）進行PCR 擴增［11］，1% 瓊脂糖電泳檢測、膠回收等步驟，對擴增的PCR產物進行檢測及純化，使用3730XL測序儀對PCR產物測序，將獲得的COI基因序列在GenBank中進行BLAST［12］比對，所得序列已上傳到GenBank（16S rRNA序列：OQ586670；COI基因：OQ587615）。

1. 3 系統發育分析

從GenBank中下載小鯢屬部分物種的16S rRNA及COI基因序列，所有分析物種的序列相關信息如表1所示，以商城肥鯢（Pachyhynobius shangchengen?sis）、極北鯢（Salamandrella keyserlingii）為外群進行系統發育分析。序列在BioEdit［13］中采用ClustalW比對。在PhyloSuite［14］中選擇ModelFinder模型進行優化。使用MrBayes 3. 2. 6［15］在GTR+1+F模型（2個馬爾可夫鏈并行運行，2×105代）下構建貝葉斯系統發育樹，每100代對系統發育樹進行抽樣，其中初始25% 的采樣數據被丟棄。使用MEGA X［16］中的Kimura雙參數模型計算小倪屬物種間的遺傳距離。

2 結果

2. 1 形態特征

標本TH22001體型中等偏小；頭體略長于尾；頭大略扁，頭寬略小于頭長；吻端鈍圓，無唇褶，眼徑略大于鼻間距，鼻孔近吻端；舌橢圓形；犁骨齒呈“V”

形；體表光滑，頸褶明顯，背部有縱行嵴溝，體側溝肋；軀干及尾根部呈圓柱形，向后逐漸由側面變扁，尾末端鈍圓，背面體色呈黑色；腹部扁平，腹面及體側面呈灰色，散布密集白灰色小斑點；掌和指、踱和趾均無掌突和踱突，前足4指，指長順序：Ⅰlt;Ⅳlt;Ⅲlt;Ⅱ，后足5趾，趾長順序：Ⅰlt;Ⅴlt;Ⅱlt;Ⅳlt;Ⅲ；肛孔呈圓形（圖1）。

2. 2 系統發育分析

使用的16S rRNA基因片段長度為609 bp，比對修剪后長度為436 bp，COI基因片段長度為709 bp，比對修剪后長度為567 bp。16S rRNA和COI基因序列在NCBI中進行BLAST比對，均與貓兒山小鯢序列相似性最高，其中16S rRNA 序列比對相似度為99. 49%，COI序列比對相似度為99. 41%，結合形態學特征初步確定該物種為貓兒山小鯢。

分別利用表1 中相關物種的16S rRNA 序列和COI基因序列構建系統進化樹（圖2），兩種系統進化樹都表明本研究所采小鯢標本與貓兒山原產地標本相聚構成單系。分子系統發育分析支持采集于全州天湖的小鯢標本為貓兒山小鯢。

2. 3 遺傳距離

基于Kimura 雙參數模型，分別用16S rRNA 和COI基因序列計算部分小鯢屬物種的遺傳距離，利用16S rRNA序列計算的結果表明，本研究所采用的小鯢屬物種間遺傳距離為0. 9%～7. 6%（表2），全州天湖的貓兒山小鯢標本與貓兒山小鯢原產地標本的遺傳距離為0. 5%，小于小鯢屬物種間的遺傳距離。表3顯示COI基因的部分小鯢屬物種間遺傳距離為3. 5%～15. 1%，全州天湖的貓兒山小鯢標本與貓兒山小鯢原產地標本的遺傳距離為0. 5%，同樣小于小鯢屬物種間的遺傳距離。

研究結果表明，16S rRNA和COI基因序列計算的遺傳距離結果與上述構建的系統進化樹結果一致，同樣支持采集于全州天湖的小鯢標本為貓兒山小鯢。

3 討論

貓兒山小鯢現有記錄僅發現于廣西貓兒山國家級自然保護區海拔1 966 m以上的森林沼澤地及周邊地區，棲息范圍十分狹小，野外種群數量極低［5，21?22］，為貓兒山國家級自然保護區特有種。本研究新增記錄點為全州天湖國家濕地公園（26°6'21″ N，110°54'14″ E；1 680 m），該記錄分布海拔范圍較之前記錄的1 966 m有所擴大，提示該種有更廣闊的生態位，隨著生物多樣性調查和研究不斷深入，新的分布區有望被發現。貓兒山和全州天湖國家濕地公園同屬于越城嶺山脈（圖3），越城嶺山脈是云貴高原的東南端、南嶺山系的西北支，高山地區，土壤肥沃，植被繁茂，水資源豐富，常年大霧，相對濕度大［23］，兩處記錄分布點的生境特點尤為相似，因而兩地可能有著相似的物種組成，其獨特的山地環境和適宜氣候也為貓兒山小鯢提供了良好的棲息庇護場所。同時也提示該區域兩棲動物多樣性此前可能被低估，該區域也許有著較高的兩棲動物多樣性［24?25］。

我國有尾兩棲類物種的遺傳多樣性水平普遍比較低，主要原因為該種類物種進化緩慢，適應性差，因而許多物種數量驟減，甚至瀕臨滅絕［26］，與此同時，人類活動的日益頻繁，導致自然棲息地大面積縮小，環境污染、自然資源過度開發等也是造成小鯢科（Hynobiidae）動物衰退和滅絕的重要原因［27］。貓兒山小鯢遷移距離短，對環境依賴性強，適應力弱，近年來，由于人類活動的影響和全球氣候的變化，導致其種群數量也在不斷減少［22］，而貓兒山與全州天湖國家濕地公園均屬于旅游景區，人為活動頻繁，旅游設施的建設等因素對棲息地環境的破壞力度不容小覷，隨著人類活動等因素影響的持續惡化，貓兒山小鯢的生存狀況堪憂。此次在全州天湖國家濕地公園發現該物種，填補了貓兒山小鯢現有紀錄單一分布的空缺，對今后研究貓兒山小鯢的地理分布和演化具有重要意義。

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