基于離子對競爭性結合作用檢測牛肉中16 種氨基糖苷類獸藥殘留

摘 要：建立同時測定牛肉中16 種氨基糖苷類獸藥殘留的方法。樣品經磷酸鹽緩沖液提取，三氯乙酸沉淀蛋白，調節pH值后，HLB固相萃取小柱凈化，Hilic Plus色譜柱分離，在電噴霧電離正離子模式下采用超高效液相色譜-串聯質譜檢測。結果表明，16 種氨基糖苷類獸藥在25～750 μg/kg內線性關系良好，相關系數均大于0.990，檢出限為0.006～0.609 μg/kg，定量限為0.02～1.83 μg/kg。在牛肉中加標回收率為69.09%～115.50%，相對標準偏差為1.04%～16.58%（n＝6）。本方法靈敏度、準確度高，適用于牛肉中16 種氨基糖苷類獸藥的同時測定。

關鍵詞：離子對競爭性結合；牛肉；氨基糖苷類獸藥；超高效液相色譜-串聯質譜

Detection of 16 Aminoglycoside Residues in Beef Based on Ion Pair Competitive Binding

LIU Huawen， LIANG Feiyan*， XIN Lina， LI Minglu

（Guangxi-Asean Food Inspection and Testing Center， Nanning 530021， China）

Abstract： A method was established for simultaneous determination of 16 aminoglycoside （AG） residues in beef. Samples were extracted with phosphate buffered solution and the proteins were precipitated using trichloroacetic acid. After adjusting the pH， the target compounds were cleaned up on an HLB solid phase extraction （SPE） column， separated on a Hilic Plus column， and detected by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS） in the positive ion electrospray ionization mode. The results showed that the calibration curves for the 16 AGs exhibited good linearity in the concentration range of 25–750 μg/kg with correlation coefficients greater than 0.990. The limits of detection （LOD） were 0.006–0.609 μg/kg and the limits of quantitation （LOQ） were 0.02–1.83 μg/kg. The average recoveries at three spiked levels were in the range of 69.09%–115.50%， with relative standard deviations （RSDs） of 1.04%–16.58%

（n = 6）. The method is sensitive， accurate， and suitable for simultaneous determination of the 16 AGs in beef.

Keywords： ion pair competitive binding; beef; aminoglycosides; ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20240531-130

中圖分類號：TS207.3" " " " " " " " " " " " " " " " " " " "文獻標志碼：A 文章編號：1001-8123（2024）08-0042-06

引文格式：

劉華文， 梁飛燕， 辛麗娜， 等. 基于離子對競爭性結合作用檢測牛肉中16 種氨基糖苷類獸藥殘留[J]. 肉類研究， 2024， 38（8）： 42-47. DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20240531-130." " http：//www.rlyj.net.cn

LIU Huawen， LIANG Feiyan， XIN Lina， et al. Detection of 16 aminoglycoside residues in beef based on ion pair competitive binding[J]. Meat Research， 2024， 38（8）： 42-47. （in Chinese with English abstract） DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20240531-130.

http：//www.rlyj.net.cn

氨基糖苷類（aminoglycosides，AGs）抗生素是一類細菌蛋白質合成抑制劑，其抗菌譜較廣、抗菌活性強，對需氧革蘭氏陰性桿菌如大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌變形桿菌屬、腸桿菌屬、志賀菌屬等有強大的殺菌作用，常用于防治畜禽呼吸道、腸道、泌尿道感染及敗血癥、禽霍亂等疫病，是防治需氧革蘭氏陰性桿菌感染的首選藥物[1-2]。AGs獸藥具有嚴重的腎毒性、耳毒性及造血系統毒性，可造成神經肌肉阻滯、過敏等不良反應[3]，長期食用AGs獸藥殘留超標的動物源性食品會導致藥物在人體內蓄積，同時引發相應的毒副作用或出現耐藥性，損害人體健康。為此，監控畜禽肉中AGs獸藥殘留對于保障畜禽肉質量安全，以及消費者飲食安全和身體健康具有重要意義。

AGs獸藥是由氨基糖苷與氨基環醇形成的苷，結構中含有氨基等堿性基團和多個羥基，故此類藥物呈堿性，水溶性較強，且紫外吸收弱，進行食品中殘留檢測分析時存在提取難、保留弱、靈敏度低等難點問題。國內外在解決其保留弱、靈敏度低等難題方面的報道較多。例如，為解決AGs獸藥在反相色譜柱上保留弱甚至無保留問題，可在樣品進樣溶液或流動相中加入離子對試劑[4-7]，或采用親水性色譜柱[8-12]；若檢測靈敏度低，可采用適宜的樣品前處理凈化技術，如液-液萃取法[13-15]、固相萃取法[16-21]、基質固相分散法[22]等，盡可能去除干擾雜質，降低基質效應，提高靈敏度。針對解決提取難問題的報道甚少，相關報道多采用磷酸鹽緩沖液[23-24]，或加入蛋白沉淀劑如三氯乙酸[25-26]、高氯酸[27]、乙腈[28-29]等溶液，提取的同時沉淀蛋白，達到凈化目的。

通過查閱文獻[30-31]和實驗研究發現，AGs獸藥可與動物源性食品中的蛋白質結合形成穩定結構，緩沖液提取或沉淀蛋白不能很好地將待測組分提取出來。基于此，本研究擬通過離子對競爭性地與AGs獸藥結合，將AGs獸藥從牛肉樣品的蛋白質中釋放出來，同時對前處理方法和儀器條件進行優化，采用超高效液相色譜-串聯質譜進行檢測，以期解決食品中AGs獸藥殘留檢測提取難、保留弱、靈敏度低的難點問題。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

牛肉樣品購自廣西省內各地農貿市場，獨立封裝后在－20 ℃下冷凍貯藏，待測時提前取出并于室溫下解凍，使用絞肉機處理為均勻肉泥以供前處理。

潮霉素B（純度90.2%）、雙氫鏈霉素（純度97.7%）、硫酸巴龍霉素（純度98.0%）、西索米星（純度95.0%）、硫酸異帕米星（純度98.6%） 天津阿爾塔有限公司；硫酸鏈霉素（純度97.7%）、硫酸卡那霉素（純度96.4%）、硫酸安普霉素（純度86.3%）、硫酸慶大霉素（純度89.2%）、妥布霉素（純度94.3%）、硫酸新霉素（純度80.1%）、鹽酸壯觀霉素（純度99.9%）、硫酸奈替米星（純度96.5%）、硫酸依替米星（純度59.9%）、辛烷磺酸鈉（分析純） 上海安譜璀世標準技術服務有限公司；丁胺卡那霉素（純度86.2%）、硫酸小諾霉素（純度80.0%） 廣州佳途科技股份有限公司；戊烷磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉（均為分析純） 上海麥克林生化科技股份有限公司；己烷磺酸鈉（分析純）"美國Sigma-Aldrich公司；庚烷磺酸鈉、癸烷磺酸鈉（均為色譜純） 美國Fisher Chemical公司；十二烷基磺酸鈉（分析純） 天津市大茂化學試劑廠；乙二胺四乙酸二鈉（disodium ethylenediamine tetraacetic acid，Na2EDTA）（優級純） 天津光復科技發展有限公司；三氯乙酸、磷酸二氫鉀、鹽酸（均為分析純） 國藥集團化學試劑有限公司；氫氧化鈉（分析純） 廣東光華科技股份有限公司；甲酸（色譜純） 天津市科密歐化學試劑有限公司；甲醇、乙腈（均為色譜純） 默克股份兩合公司；實驗用水為GB/T 6682—2008《分析實驗室用水規格和試驗方法》規定的一級水。

1.2 儀器與設備

Triple Quad 5500三重四極桿液相色譜-質譜聯用儀"美國AB SCIEX公司；1290超高效液相色譜儀、Hilic Plus色譜柱（2.1 mm×100 mm，3.5 μm） 美國Agilent公司；MS303TS電子天平 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；Milli-Q Advantage A10超純水機 德國Millipore公司；MILTIFUGE X3R高速冷凍離心機 美國Thermo Fisher Scientific公司；Multi Reax多管式渦旋振蕩器"德國Heidolph公司；Genius NM32LA氮氣發生器 畢克氣體儀器貿易（上海）有限公司；TurboVap LV樣品自動濃縮儀 瑞典Biotage公司；Oasis HLB固相萃取小柱（6 mL，200 mg） 美國Waters公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理

取樣品2.0 g，加入10.0 mL提取劑（稱取磷酸二氫鉀1.36 g，加水980 mL使之溶解，采用1 mol/L鹽酸溶液調節pH值至4.0，分別加入戊烷磺酸鈉8.70 g、己烷磺酸鈉9.41 g、Na2EDTA 0.15 g、三氯乙酸20 g使之溶解，以水定容至1 000 mL），渦旋5 min，超聲5 min，10 000 r/min、－10 ℃離心10 min，取上清液，采用10 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至4～5，置于已活化HLB固相萃取小柱（6 mL，200 mg，活化：甲醇（5 mL）→水（5 mL）→提取液（5 mL）），用5 mL水淋洗，抽干，用10 mL 0.5%甲酸甲醇溶液洗脫，于40 ℃水浴氮氣吹至近干，用1%甲酸水溶液-乙腈（15∶85，V/V）溶解并定容至1.0 mL，渦旋振蕩5 min，過0.22 μm濾膜，上機測定。

1.3.2 標準溶液配制

標準儲備溶液：精密稱取16 種AGs標準物質各10.0 mg，分別置于10 mL容量瓶中，加水溶解并定容，搖勻，得到質量濃度為1 mg/mL的單標儲備溶液，0～5 ℃保存。

混合標準中間液：分別精密移取各單標儲備溶液0.1 mL，置于同一10 mL容量瓶中，用水稀釋、定容，搖勻，各標準物質質量濃度為10 μg/mL。

混合標準工作液：精密移取混合標準中間液1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，用水稀釋、定容，各標準物質質量濃度為1.0 μg/mL，用于繪制標準曲線。

稱取牛肉空白基質樣品，按1.3.1節處理后，得到空白基質溶液。分別精密吸取混合標準工作液0.05、0.10、0.20、0.50、0.75 mL，混合標準中間液0.10、0.12、0.15 mL，用空白基質溶液配制成質量濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.50、0.75、1.00、1.20、1.50 μg/mL的系列基質混合標準工作曲線所需溶液。

1.3.3 分析條件

1.3.3.1 色譜條件

色譜柱：Hilic Plus（2.1 mm×100 mm，3.5 μm）；柱溫35 ℃；進樣量10 μL；流動相A為1%甲酸溶液，B為乙腈；流動相梯度洗脫程序見表1。

1.3.3.2 質譜條件

電噴霧電離；多反應監測模式；正離子掃描；電噴霧電壓5 500 V；碰撞室入口電壓10 V；碰撞室出口電壓12 V；霧化氣（氮氣）壓力55 psi；輔助加熱氣壓力60 psi；氣簾氣（氮氣）壓力35 psi；碰撞氣壓力9 psi；離子源溫度550 ℃；掃描時間60 ms。

1.3.4 基質效應計算

按下式計算：

1.4 數據處理

分別利用Analyst軟件和MutiQuant 3.0.2軟件進行數據采集及處理，采用Excel 2010軟件和Origin 2021軟件進行數據匯總和分析。

2 結果與分析

2.1 色譜柱選擇

由于AGs獸藥含有多個氨基，電離作用強，在反相色譜分離柱中保留極弱甚至無保留。通過在流動相中添加離子對試劑，如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、七氟丁酸等，使之與待測物離子結合，形成可在反相色譜柱中保留的分子，但離子對試劑會殘留在質譜系統中，損壞質譜系統，造成質譜檢測器對負離子分析性能下降。通過在高純度、具有良好機械穩定性的硅膠基質表面鍵合高純度親水性基團，可得到親水性反相分離柱，如HILIC柱、R柱、Gold柱等，可大大增強極性化合物在反相色譜柱上的保留能力和選擇性[32-35]。

本研究對比不同廠家、不同規格、不同型號的親水作用色譜柱（Sielc obelisk R（2.1 mm×100 mm，5 μm）、HSS T3（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）、Hypersil Gold（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）、Hypersil Gold AQ（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）、Agilent Proshell 120 Hilic（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）、Agilent Hilic Plus（2.1 mm×100 mm，3.5 μm）、Agilent RRHD Hilic Plus（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）、Waters CORTECS UPLC Hilic（2.1 mm×100 mm，1.6 μm）、Waters ACQUITY UPL BEH Hilic（2.1 mm×100 mm，1.6 μm））。結果表明，使用Agilent Hilic Plus色譜柱時，16 種AGs獸藥的保留效果較好，色譜峰峰形尖銳、對稱性良好（圖1）。故最終選擇Agilent Hilic Plus色譜柱（2.1 mm×100 mm，3.5 μm）。

2.2 質譜條件優化

AGs獸藥分子結構中含有氨基環醇、羥基和伯胺或仲胺基團等堿性基團，可與流動相中甲酸的H＋結合，形成帶正電荷的[M＋H]＋，適宜采用正離子掃描模式，通過優化錐孔電壓和碰撞能量，選取響應豐度較高、易得到、出峰穩定的母離子和子離子，進而獲得定量和定性離子對。具體質譜參數見表2。

2.3 提取劑優化

AGs獸藥具有弱堿性、帶正電，可與細胞中的金屬離子螯合，同時牛肉中含有大量蛋白質，蛋白質的肽鍵結構含有羰基（C＝O），可與AGs獸藥分子結構中的N—H鍵形成穩定結構，給樣品提取和凈化帶來巨大困難。現階段去除蛋白質的方法有酸性沉淀劑鹽析、有機溶劑脫水、生物酶酶解、加熱等。本研究采用三氯乙酸沉淀蛋白、Na2EDTA螯合金屬離子、Tris溶液-磷酸鹽緩沖液提取、蛋白酶水解蛋白質等方式，通過調節提取劑的酸堿度、水解蛋白質等方式，提取液出現不同程度的渾濁，且存在提取不完全、目標物丟失等現象，均不能取得滿意效果。由此可知，單純地沉淀蛋白質并不能破壞蛋白質與AGs獸藥之間的結合力，在沉淀蛋白質的同時，AGs獸藥也同時沉淀而被去除。

離子對試劑具有強親水性和結合力，可與電離能力較強的化合物結合[4-5]。而AGs獸藥為陽離子化合物，電離能力強，易與陰離子離子對試劑配對[7]。為此，本研究考察陰離子離子對試劑烷基磺酸鹽類（0.1 mol/L戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、癸烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉溶液）對AGs獸藥的提取效果。結果表明，在提取過程中，離子對試劑碳鏈越長（癸烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉），產生的泡沫越多，難以消除，導致無法渦旋振蕩提取，固相萃取凈化時過柱慢，且在濃縮時有白色殘渣析出，提取回收率較低（＜35%）；采用戊烷磺酸鈉溶液提取時，所有組分均能出峰，除潮霉素B回收率（＜45%）偏低外，其余組分回收率（60%～120%）良好；采用己烷磺酸鈉溶液提取時，所有組分亦均能出峰，除鏈霉素、雙氫鏈霉素、壯觀霉素、奈替霉素和小諾霉素回收率（10%～60%）偏低外，其余組分回收率（60%～120%）良好。因此，為保證所有組分能達到更好的提取效果，本研究采用戊烷磺酸鈉和己烷磺酸鈉組合溶劑作為提取劑。

比較不同濃度的組合溶劑（0.02 mol/L戊烷磺酸鈉-0.02 mol/L己烷磺酸鈉溶液、0.05 mol/L戊烷磺酸鈉-0.05 mol/L己烷磺酸鈉溶液、0.1 mol/L戊烷磺酸鈉-0.1 mol/L己烷磺酸鈉溶液、0.2 mol/L戊烷磺酸鈉-0.2 mol/L己烷磺酸鈉溶液）對AGs獸藥的提取效果。結果表明，隨著提取劑濃度的升高，各組分的回收率也升高，提取劑濃度大于0.05 mol/L時，各組分回收率良好，提取效果較理想。因此，本研究采用組合溶劑0.05 mol/L戊烷磺酸鈉-0.05 mol/L己烷磺酸鈉溶液，通過離子對與蛋白質競爭性結合待測組分，將AGs獸藥從蛋白質中釋放出來。此外，為更好地降低基質效應，減小蛋白質對待測組分的干擾，本研究加入三氯乙酸沉淀蛋白，提供酸性環境，更有利于AGs獸藥提取。

2.4 凈化條件優化

目前，最常用的獸藥殘留檢測前處理凈化方法為固相萃取法和QuEChERS方法。AGs獸藥極易溶于水，宜采用水溶液進行提取，若采用QuEChERS方法凈化，水溶液難以濃縮，而獸藥殘留檢測為痕量分析，未經濃縮的樣品溶液可導致方法檢出限偏低，達不到檢測靈敏度要求。因此，本研究擬采用固相萃取法。AGs獸藥為弱堿性有機物，宜采用反相固相萃取法或陽離子交換固相萃取法。本研究以16 種AGs獸藥的混合標準溶液（1 μg/mL）考察不同品牌、不同填料、不同規格固相萃取柱的凈化效果。如表3所示，Oasis MCX柱（150 mg，6 mL）、Bond Elut-Pba柱（100 mg，3 mL）對所有組分均無保留，Oasis WCX柱（500 mg，6 mL）對其中9 種組分（潮霉素B、雙氫鏈霉素、丁胺卡那霉素、卡那霉素、安普霉素、妥布霉素、壯觀霉素、巴龍霉素、異帕霉素）有保留；Bond Elut-C18柱對其中11 種組分（雙氫鏈霉素、卡那霉素、安普霉素、慶大霉素、妥布霉素、新霉素、巴龍霉素、小諾霉素、西索米星、奈替米星、依替米星）有保留；HLB填料對16 種AGs獸藥均有保留，當填料規格200 mg、柱容量6 mL時，各組分回收率良好。故本研究采用Waters Oasis HLB固相萃取柱（200 mg，6 mL）作為AGs獸藥凈化的固相萃取柱。

2.5 基質效應分析

本研究通過空白基質加標法對牛肉中的基質效應進行評價。如圖2所示，牛肉基質中，只有丁胺卡那霉素表現為基質增強效應，基質效應為8.5%，其他AGs獸藥均表現為基質抑制效應，基質效應為－77.2%～－23.7%，其中潮霉素B、卡那霉素、慶大霉素、新霉素、壯觀霉素、奈替米星和依替米星基質效應絕對值均小于50%，而鏈霉素、雙氫鏈霉素、安普霉素、妥布霉素、巴龍霉素、小諾霉素、西索米星和異帕米星基質效應絕對值大于50%。因此，本研究采用空白基質溶液配制標準曲線溶液，以消除基質效應影響，提高定量分析結果的準確性。

2.6 方法學驗證

2.6.1 線性關系、檢出限和定量限

采用陰性牛肉樣品制備空白基質標準曲線溶液，按優化條件進行測試，以目標物定量離子的質譜圖峰面積（y）為縱坐標、相應的空白基質標準工作溶液質量濃度（x，ng/mL）為橫坐標，繪制標準曲線，得到16 種AGs獸藥的線性回歸方程和相關系數，分別以信噪比（RSN）＝3和RSN＝10計算檢出限和定量限，如表4所示。結果表明，16 種AGs獸藥在25～750 μg/kg范圍內線性關系良好，相關系數r均大于0.990，檢出限為0.006～0.609 μg/kg，定量限為0.02～1.83 μg/kg，滿足AGs獸藥的檢測要求。

2.6.2 準確度和精密度

在空白牛肉基質樣品中，進行3 個水平（100、250、375 μg/kg）的加標回收實驗，每個加標水平平行測定6 次。如表5所示，16 種AGs獸藥的平均加標回收率為69.09%～115.50%，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為1.04%～16.58%（n＝6），方法具有良好的準確度與精密度。

2.7 實際樣品檢測

在廣西省內隨機選取牛肉樣品100 批次，采用本方法對樣品中16 種AGs獸藥進行檢測，100 批次樣品中均未檢出AGs。

3 結 論

本研究基于超高效液相色譜-串聯質譜建立了牛肉中16 種AGs獸藥殘留的測定方法。通過選擇合適的色譜柱，采用三氯乙酸沉淀蛋白，以組合溶劑0.05 mol/L戊烷磺酸鈉-0.05 mol/L己烷磺酸鈉溶液作為提取劑，HLB固相萃取柱富集凈化，實現了16 種AGs獸藥的有效提取、保留和準確定量分析。本方法提取效率高、凈化效果好、靈敏度高、準確度和精密度良好，適用于牛肉中16 種AGs獸藥的同時測定。

參考文獻：

[1] 余祖功， 董發明， 劉永旺. 獸藥合理應用與聯用手冊[M]. 北京： 化學工業出版社， 2021： 50-58.

[2] 崔海嵐. 氨基糖苷類抗生素臨床應用的體會[J]. 當代畜牧， 2022（2）： 48-49.

[3] 許恒， 唐春雷， 范為正. 氨基糖苷類抗生素的研究進展[J]. 中國新藥雜志， 2019， 15（28）： 1828-1835.

[4] ALMEIDA M P， REZENDE C P， SOUZA L F， et al. Validation of a quantitative and confirmatory method for residue analysis of aminoglycoside antibiotics in poultry， bovine， equine and swine kidney through liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Food Additives amp; Contaminants： Part A： Chemistry， Analysis， Control， Exposure amp; Risk Assessment， 2012， 29（4）： 517-525. DOI：10.1080/19440049.2011.623681.

[5] ZHU Z， LIU G H， WANG F， et al. Development of a liquid chromatography tandem mass spectrometric method for simultaneous determination of 15 aminoglycoside residues in porcine tissues[J]. Food Analytical Methods， 2016， 9： 2587-2599. DOI：10.1007/s12161-016-0446-1.

[6] 湛嘉， 朱海強， 王園， 等. 豬肉中強極性-極性化學污染物快速通用篩查法的建立[J]. 中國口岸科學技術， 2020（3）： 47-54. DOI：10.3969/j.issn.1002-4689.2020.03.007.

[7] TURNIPSEED S B， CLARK S B， KARBIWNYK C M， et al. Analysis of aminoglycoside residues in bovine milk by liquid chromatography electrospray ion trap mass spectrometry after derivatization with phenyl isocyanate[J]. Journal of Chromatography B， 2009， 877（14/15）： 1487-1493. DOI：10.1016/j.jchromb.2009.03.025.

[8] 蘇晶， 湯立忠， 陳長毅， 等. 高效液相色譜串聯質譜法同時測定9 種龍蝦中氨基糖苷類和四環素類抗生素殘留[J]. 食品工業科技， 2016， 37（2）： 60-63; 67. DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2016.02.003.

[9] 黃原飛， 婁曉祎， 周哲， 等. 分子印跡聚合物固相萃取-超高效液-串聯質譜法檢測水產品中11 種氨基糖苷類藥物殘留[J]. 分析化學， 2018， 46（3）： 454-461. DOI：10.11895/j.issn.0253-3820.171175.

[10] PERKONS I， PUGAJEVA I， BARTEVICS V. Simultaneous screening and quantification of aminoglycoside antibiotics in honey using mixed-mode liquid chromatography with quadrupole time-of-flight mass spectroscopy with heated electrospray ionization[J]. Journal of Separation Science， 2018， 41（16）： 3186-3194. DOI：10.1002/jssc.201800230.

[11] SALUTI G， DIAMANTI I， GIUSEPPONI D， et al. Simultaneous determination of aminoglycosides and colistins in food[J]. Food Chemistry， 2018， 266： 9-16. DOI：10.1016/j.foodchem.2018.05.113.

[12] 吳云輝， 嚴麗娟， 沈鷺英， 等. 混合型離子交換液相色譜-串聯質譜法測定蜂蜜中5 種氨基糖苷類抗生素殘留[J]. 色譜， 2019， 37（5）： 499-504. DOI：10.3724/SP.J.1123.2018.11043.

[13] CHIAOCHAN C， KOESUKWIWAT U， YUDTHAVORASIT S， et al.

Efficient hydrophilic interaction liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the multiclass analysis of veterinary drugs in chicken muscle[J]. Analytica Chimica Acta， 2010， 682（1/2）： 117-129. DOI：10.1016/j.aca.2010.09.048.

[14] 王志兵， 高楊， 劉洋， 等. 微波輔助衍生-離子液體分散液液微萃取-高效液相色譜法檢測牛奶中氨基糖苷類抗生素殘留[J]. 現代食品科技， 2014， 30（4）： 260-267.

[15] XU X， LIU Z， ZHAO X， et al. Ionic liquid-based microwave-assisted surfactant-improved dispersive liquid-liquid microextraction and derivatization of aminoglycosides in milk samples[J]. Journal of Separation Science， 2013， 36（3）： 585-592. DOI：10.1002/jssc.201200801.

[16] BOHM D A， STACHEL C S， GOWIK P. Validation of a method for the determination of aminoglycosides in different matrices and species based on an in-house concept[J]. Food Additives amp; Contaminants： Part A： Chemistry， Analysis， Control， Exposure amp; Risk Assessment， 2013， 30（6）： 1037-1043. DOI：10.1080/19440049.2013.775709.

[17] ZHU W X， YANG J Z， WEI W， et al. Simultaneous determination of 13 aminoglycoside residues in foods of animal origin by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry with two consecutive solid-phase extraction steps[J]. Journal of Chromatography A， 2008， 1207（1/2）： 29-37. DOI：10.1016/j.chroma.2008.08.033.

[18] 劉雪紅， 張秀芹， 侯穎， 等. 超高效液相色譜-串聯質譜法檢測牛奶中7 種氨基糖苷類藥物殘留[J]. 中國獸藥雜志， 2015， 49（3）： 48-52.

[19] 龔強， 丁利， 朱紹華， 等. 高效液相色譜-串聯質譜法檢測乳制品中10 種氨基糖苷類抗生素殘留[J]. 色譜， 2012， 30（11）： 1143-1147. DOI：10.3724/SP.J.1123.2012.06024.

[20] 孫雷， 張儷， 黃耀凌， 等. 超高效液相色譜-串聯質譜法檢測動物源食品中8 種氨基糖苷類藥物殘留[J]. 質譜學報， 2009， 30（1）： 60-64.

[21] 錢疆， 余孔捷， 陳健， 等. 液相熒光法檢測乳制品中9 種氨基糖苷類藥物殘留[J]. 福建分析測試， 2011， 20（3）： 13-17. DOI：10.3969/j.issn.1009-8143.2011.03.004.

[22] 王煉， 劉少瓊. 楊碧霞， 等. 基質固相分散-親水交互作用色譜-串聯質譜法測定牛奶中5 種氨基糖苷類抗生素殘留量[J]. 中國食品衛生雜志， 2019， 31（3）： 222-226. DOI：10.13590/j.cjfh.2019.03.006.

[23] TAO Y F， CHEN D M， YU H， et al. Simultaneous determination of 15 aminoglycoside（s） residues in animal derived foods by automated solid-phase extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Food Chemistry， 2012， 135（2）： 676-683. DOI：10.1016/j.foodchem.2012.04.086.

[24] 李敏青， 徐娟， 王嵐， 等. 固相萃取/高效液相色譜-串聯質譜法測定植物性食品中鏈霉素與雙氫鏈霉素[J]. 分析測試學報， 2019， 38（7）： 859-864. DOI：10.3969/j.issn.1004-4957.2019.07.016.

[25] 方秋華， 劉佩怡， 肖田安， 等. 牛奶中氨基糖苷類藥物殘留量的測定高效液相色譜串聯質譜法[C]//2016年動物藥品學分會學術年會優秀論文集. 成都： 中國畜牧獸醫學會動物藥品學分會， 2016： 231-237.

[26] 全德甫， 王甫， 許少堅， 等. 液相色譜串聯質譜法測定豬肉中奈替米星、西索米星和小諾霉素的殘留量[J]. 中國衛生檢驗雜志， 2014， 24（10）： 1404-1406; 1421.

[27] 安冬. 水產品中氨基糖苷類藥物殘留檢測的液-質聯用分析法研究[D].

重慶： 西南大學， 2009： 18-37. DOI：10.7666/d.y1460392.

[28] KAUFMANN A， BUTCHER P， MADEN K. Determination of aminoglycoside residues by liquid chromatography and tandem mass spectrometry in a variety of matrices[J]. Analytica Chimica Acta， 2012， 711： 46-53. DOI：10.1016/j.aca.2011.10.042.

[29] 王小喬， 邱國玉， 楊志敏， 等. 液質聯用高通量檢測技術基質效應評價與消除[J]. 現代食品， 2020（12）： 44-46. DOI：10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2020.12.017.

[30] LI Z Z， LIU Y Y， CHEN X J， et al. Affinity-based analysis methods for the detection of aminoglycoside antibiotic residues in animal-derived foods： a review[J]. Foods， 2023， 12（8）： 1587. DOI：10.3390/foods12081587.

[31] 王帥兵， 曲斌， 耿士偉， 等. 親水作用色譜-高分辨質譜測定生鮮牛乳中7 種氨基糖苷類藥物殘留[J]. 動物醫學進展， 2017， 38（9）： 67-72. DOI：10.3969/j.issn.1007-5038.2017.09.014.

[32] 戴輝， 孟晶， 祖立青， 等. 基于HPLC-MS檢測食品中新霉素和潮霉素B

的殘留量[J]. 山西農經， 2016（18）： 97-98; 101. DOI：10.16675/j.cnki.cn14-1065/f.2016.18.075.

[33] 宓捷波， 張敏， 柴銘駿， 等. 親水作用色譜-串聯質譜法測定動物源食品中10 種氨基糖苷類藥物的殘留量[J]. 食品研究與開發， 2019， 40（19）： 197-204. DOI：10.12161/j.issn.1005-6521.2019.19.036.

[34] DíEZ C， GUILLARME D， SP?RRI A S， et al. Aminoglycoside analysis in food of animal origin with a zwitterionic stationary phase and liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Analytica Chimica Acta， 2015， 882： 127-139. DOI：10.1016/j.aca.2015.03.050.

[35] ARSAND J B， JANK L， MARTINS M T， et al. Determination of aminoglycoside residues in milk and muscle based on a simple and fast extraction procedure followed by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry and time of flight mass spectrometry[J]. Talanta， 2016， 154： 38-45. DOI：10.1016/j.talanta.2016.03.045.