大黃素甲醚配施氨基寡糖素對煙草病毒病抑制效果研究

摘要：新型植物源殺菌劑大黃素甲醚（Physcion）是一種從中藥植物大黃中提取的天然蒽醌類化合物，對多種植物病原真菌具有活性。為進一步提升其應用效果，本文將大黃素甲醚與氨基寡糖素配合施用，評估其對煙草馬鈴薯Y病毒（PVY）的抑制率及室內防治效果。結果表明，在大黃素甲醚濃度為0.08 mg/mL和0.1 mg/mL，與氨基寡糖素配施后，對PVY的抑制作用均優于單劑，表現出顯著的增效效果；其中0.1 mg/mL大黃素甲醚與0.5 mg/mL氨基寡糖素配合施用時，PVY的抑制率最高，達到84.78%；此外，盆栽防治試驗也表明，0.1 mg/mL大黃素甲醚與0.5 mg/mL氨基寡糖素的配施效果最佳，防治效果為77.81%。綜合來看，大黃素甲醚配施氨基寡糖素對煙草病毒病的抑制具有顯著的增效效果，為大黃素甲醚的廣泛應用提供了條件。

關鍵詞：大黃素甲醚；氨基寡糖素；煙草病毒病；防效

中圖分類號：S435.72 文獻識別碼：A 文獻編號：1005-6114（2024）06-033-03

植物病毒病是僅次于植物真菌病害的第二大類病害，具有種類多、寄主廣、危害大、防治難等特點［1］。農作物感染病毒病后會導致產量和品質的嚴重下降，對人類糧食安全構成極大的威脅［2］。這些年，由于氣候變暖、種植結構的調整使得病毒病的在我國呈現大發和重發的態勢，而病毒病一旦發生，具有突發性、暴發性和重發性，對糧食生產和農產品供應安全產生嚴重影響［3］。

抗病品種和農業措施是目前生產中防控植物病毒病的重要和有效手段，但由于目前能抵抗病毒病的抗性品種匱乏，抗病品種應用不夠廣泛。因此，抗病毒藥劑在植物病毒病防控中發揮著重要作用［4，5］。當前市場上植物病毒病防控藥劑有：鹽酸嗎啉胍、氨基寡糖素、毒氟磷、辛菌胺等少量抗病毒劑產品，登記的抗病毒劑產品在所有農藥登記產品中占比低于0.5％［6］，單一施用某一種藥劑防治效果低，防治譜比較窄，因此，開發高效、廣譜、綠色的植物抗病毒病藥劑在現代農業發展中具有重要意義。

新型植物源殺菌劑大黃素甲醚是從中藥植物大黃中提取的天然蒽醌類化合物，對小麥白粉病、黃瓜白粉病、黃瓜霜霉病和番茄病毒病等多種真菌和病毒病具有高效活性［7］。氨基寡糖素（殼寡糖）是指D-氨基葡萄糖以β-1.4糖苷鍵連接的低聚糖，由幾丁質降解得殼聚糖后再降解制得，對多種真菌、細菌和病毒具有預防、抑制和滅殺作用［8］。為了提升大黃素甲醚產品的應用范圍和防治效果，本研究旨在利用氨基寡糖素增強煙草的抵抗力，同時以大黃素甲醚的殺菌作用，兩者的協同作用為煙草病毒病的防控提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試藥劑98％大黃素甲醚原藥購買自西格瑪奧德里奇（上海）貿易有限公司，90％氨基寡糖素原藥購買自鐘祥一品紅植物免疫科技有限公司。兩種藥劑均采用二甲基亞砜溶解，配制母液濃度為1 000 mg/L，將母液稀釋成試驗所需濃度，大黃素甲醚濃度為0.06、0.08和0.1 mg/L，氨基寡糖素濃度為0.125和0.5 mg/L。

供試植物為本氏煙Nicotiana benthamiana。挑選大小、長勢一致、無病無蟲的４～８葉齡幼苗用于試驗。帶有綠色熒光蛋白標記基因的馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）由湖北省農業科學院植保土肥研究所提供。其他試劑和儀器主要有：石英粉（過600目篩）、碳酸鹽緩沖溶液（CBS，pH值9.6）、馬鈴薯Y病毒酶聯免疫分析試劑盒（上海源桔生物科技有限公司）、酶標分析儀（美國伯騰儀器有限公司）、365 nm長波紫外燈（美國SPECTROLINE）、研磨器等。

1.2 試驗設計

1.2.1 藥劑處理

試驗在溫度25℃，相對濕度50％～60％，光照6 000～7 000 Lx的人工氣候室中進行。藥劑用水稀釋后均勻噴施于長勢均勻的煙草植株葉片正面，設噴施清水為對照（CK），每7 d噴施1次，共噴霧2次。試驗設14個處理（具體見表１），每處理噴施6株，即6個重復。

1.2.2 摩擦接種

病毒接種試驗在第2次噴施藥劑后2 h進行，首先在煙草未完全展開幼葉下方的3片展開葉正面均勻撒少許石英粉，采用摩擦接種的方式每葉接種50μL含PVY的病毒汁液，每處理接種6株，即６個重復，接種后將植株放于人工氣候室內繼續培養，5 d后在長波紫外光下觀察接種煙草發病情況，取每株發病的幼葉，用錫箔紙包裹并寫好編號，于液氮速凍后保存于-80℃冰箱中待用。

1.2.3 ELISA檢測病毒含量，計算病毒抑制率

樣品采集，在接種病毒后5 d取樣，選擇已經發病的葉片取樣，按每0.1 g（葉片重量）∶加入1 mL（碳酸鹽緩沖溶液）的比例進行研磨，研磨液吸進離心管中，5 000 rpm離心2 min，取上清液于干凈的離心管內，按照馬鈴薯Y病毒酶聯免疫分析試劑盒的操作步驟測定樣品中馬鈴薯Y病毒含量，以450 nm波長處的OD值表示。參照馬志強等的方法［9］，按照病毒抑制率公式各處理對病毒的抑制率。

病毒抑制率（%）＝（對照組OD450-處理組OD450）／對照組OD450×100

1.2.4 植株癥狀記錄和防效計算

病毒接種10 d后觀察植株癥狀，并記錄每株上部5或6張葉片的發病程度，統計病情指數，計算防效。具體方法參照行業標準《農藥田間藥效試驗準則第73部分：殺菌劑防治煙草病毒病》（NYT 1464.73—2018）進行級標準如下：

0級：無花葉病斑；

1級：病斑面積占整片葉面積的5％以下；

3級：病斑面積占整片葉面積的5～15％；

5級：病斑面積占整片葉面積的15～25％；

7級：病斑面積占整片葉面積的25～50％；

9級：病斑面積占整片葉面積的50％以上。

病情指數和病指防效計算公式：

1.3 數據分析

試驗數據利用Excel 2019軟件統計，采用DPS9.01數據分析軟件中Duncans新復極差法對病毒抑制率進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 病毒濃度及病毒抑制率

藥劑處理組煙草葉片中病毒的濃度均顯著低于對照，其中病毒濃度最低的為大黃素甲醚0.1 mg/L配施氨基寡糖素0.5 mg/L組合，其次為大黃素甲醚0.08 mg/L配施氨基寡糖素組合處理。單獨施用兩種藥劑均對PVY具有一定的抑制效果，大黃素甲醚處理優于氨基寡糖素處理。大黃素甲醚與氨基寡糖素配施均能較好地抑制PVY，其中大黃素甲醚0.1 mg/L配施氨基寡糖素0.5 mg/L處理對病毒抑制率最高，為84.78％。大黃素甲醚配施氨基寡糖素具有較明顯的增效作用，對病毒的抑制作用比大黃素甲醚單用增加53.85％（表2）。

2.2 對PVY病毒盆栽防效

根據表3不同組煙草植株的病情指數調查結果，施藥處理組病情指數均有所下降，說明所有藥劑處理均能抑制煙草馬鈴薯Y病毒病情指數。對照處理的煙草葉片發病最嚴重，病情指數89.26。大黃素甲醚0.1 mg/L和0.06 mg/L處理組病指防效分別為36.15%和49.39%，氨基寡糖素0.5mg/L和0.125mg/L處理組病指防效為27.34%和35.97%；而不同濃度的大黃素甲醚和氨基寡糖素配施時，植株的病毒病癥狀顯著減輕，對PVY的病指防效顯著提升：大黃素甲醚0.1 mg/L 配施氨基寡糖素不同處理組合防效較好，各處理均在70％以上，表現出協同增效作用，其中大黃素甲醚0.1 mg/L配施氨基寡糖素0.5 mg/L處理防效最高，為77.81％，協同增效作用最顯著。

3 結論與討論

本試驗結果表明，大黃素甲醚和氨基寡糖素對煙草馬鈴薯Y病毒都具有一定的抑制效果，兩種藥劑單獨施用對病毒的防效在27.34%～49.39%之間，這與兩種藥劑在番茄和煙草病毒病上田間研究結果相似［10，11］；當大黃素甲醚和氨基寡糖素配合施用時，對煙草PVY病毒具有協同增效作用；0.1 mg/L大黃素甲醚配施0.5 mg/L氨基寡糖素抗馬鈴薯Y病毒效果最好，防治效果達到77.81%，遠遠高于兩個單劑的防治效果。這可能與大黃素甲醚自身具有一定的殺菌活性，抑制了病毒在煙草內的復制［8］，而氨基寡糖素可能是通過誘導煙草表皮產生一些抗病信號分子，提高植物自身的免疫力，進而增強了對病毒的抵抗能力［12］，因此兩者配合施用具有增效作用，具體原因還有待進一步研究。此外，本試驗僅進行了室內盆栽試驗，還需要大田試驗進一步驗證。

參考文獻

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