油菜菌核病的室內(nèi)藥劑篩選

摘要：本文對17種市場上常見的防治真菌型病害農(nóng)藥對油菜核盤菌的抑制作用進(jìn)行了室內(nèi)測定。結(jié)果表明，供試17種藥劑中有16種對油菜核盤菌菌落生長具有抑制作用；12種藥劑在200倍液下對菌絲生長抑制率達(dá)99%以上，8種藥劑在1 000倍液下對菌絲生長抑制率達(dá)90%以上，其中以含有效成分400 g/L異菌脲·氟啶胺和45%咪鮮胺的效果最好，EC50值分別為0.01 mg/L和0.03 mg/L。400 g/L異菌脲·氟啶胺和45%咪鮮胺可作為防治油菜菌核病的潛在備用藥劑。

關(guān)鍵詞：油菜菌核病；防治藥劑；室內(nèi)篩選

中圖分類號：S435.654 文獻(xiàn)識別碼：A 文獻(xiàn)編號：1005-6114（2024）06-039-04

油菜菌核病是我國油菜的主要病害，是由核盤菌［Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary］引起的組織壞死，油菜感染病害后一般減產(chǎn)10%～50%，嚴(yán)重者達(dá)80%以上［1-3］。由于沒有抗核盤菌的種質(zhì)資源，目前生產(chǎn)上對于油菜菌核病的防治主要是依賴于化學(xué)農(nóng)藥［4-6］。然而，化學(xué)農(nóng)藥連續(xù)多年的使用導(dǎo)致使核盤菌產(chǎn)生了抗藥性，因此，需要不斷篩選和開發(fā)新型菌核病防治藥劑。為此，本研究在明確該病的主要病原菌基礎(chǔ)上，對市場上常用的防治真菌病害的藥劑進(jìn)行了室內(nèi)抑菌測定試驗(yàn)，以期為篩選出對油菜菌核病具有良好防治效果的藥劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用的油菜核盤菌采集自宜昌市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院枝江四崗試驗(yàn)基地發(fā)病的油菜植株莖稈。無菌環(huán)境下將收集的菌核浸入1%次氯酸鈉中10 s，然后再浸入70%酒精中1 min，最后用無菌水洗滌3次，用無菌濾紙吸干表面水分，再用無菌刀切開，轉(zhuǎn)至PDA培養(yǎng)基平板上，于20℃黑暗條件下培養(yǎng)3 d，然后將新生長出的菌絲轉(zhuǎn)移到PDA平板上純化，轉(zhuǎn)接3次以后得到純化的菌株，在PDA平板上培養(yǎng)備用。

稱取各藥劑溶入無菌水（對不易溶解的藥劑，可添加其他助溶劑）制成母液。

1.2 供試藥劑

選擇市場上常見的抑制真菌型病害的藥劑，具體見表1。

1.3 主要儀器設(shè)備

電子天平（精度0.1 mg）、生物培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、接種器、打孔器、移液器、酒精燈等。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 17種藥劑不同倍液對核盤菌的抑制

選取17種市場上常見的農(nóng)藥，以200倍液、1 000倍液、5 000倍液的濃度制成含藥PDA培養(yǎng)基，倒入直徑9 cm培養(yǎng)皿中，每皿倒入25 mL，制成含藥培養(yǎng)基平板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 藥劑濃度梯度對核盤菌的抑制

根據(jù)1.4.1試驗(yàn)結(jié)果以及農(nóng)藥經(jīng)濟(jì)價(jià)格，選擇部分農(nóng)藥進(jìn)行濃度梯度試驗(yàn)。將母液按照等比數(shù)列稀釋成5個(gè)濃度，從稀釋好的藥液中吸取1 mL加入到100 mL融化的PDA培養(yǎng)基中，混合均勻后倒入直徑9 cm培養(yǎng)皿中，每皿倒入25 mL，制成含藥培養(yǎng)基平板測藥劑有效中濃度EC50。

用直徑為5 mm滅菌打孔器將備用菌株置于含有不同濃度藥劑的PDA培養(yǎng)基平板中，每個(gè)培養(yǎng)皿中心一個(gè)菌餅，另設(shè)不含藥劑的PDA培養(yǎng)基為對照，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)3 d后，采用十字交叉法（將直尺經(jīng)過菌落生長中心，測得相互垂直的兩邊菌落直徑的長度）測量各處理的菌落直徑。每個(gè)處理4次重復(fù)。

1.5 藥劑防效計(jì)算

按照公式（1）和（2）計(jì)算藥劑對菌絲的生長抑制率。

（1）D=D1-D2

其中：D為菌落增長直徑，D1為菌落直徑，D2為菌餅直徑；

（2）I=（D0-D1）×100/D0

其中：I為菌絲生長抑制率，D0為空白對照菌絲生長直徑，D1藥劑處理菌絲生長直徑。

將菌絲生長抑制率轉(zhuǎn)換為幾率值，并計(jì)算藥劑濃度的對數(shù)值。以藥劑濃度對數(shù)值為橫坐標(biāo)、抑制率的幾率值為縱坐標(biāo)，用最小二乘法計(jì)算抑制率的幾率值和藥劑濃度對數(shù)值之間的線性回歸，求出各藥劑對供試菌株的毒力回歸方程和抑制50%菌落有效的藥物濃度EC50。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、整理采用WPS Office（2011版）軟件，差異顯著性分析采用SPSS軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 17種藥劑不同倍液對核盤菌的抑制效果

試驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對照（CK）相比，供試17種藥劑中有16種對核盤菌菌落生長有明顯的抑制作用（表2）。不同藥劑對菌落抑制作用有差異，其中含有效成分氟唑菌酰羥胺、異菌脲·氟啶胺、啶酰菌胺、腐霉利、異菌脲、多菌靈、菌核凈、戊唑醇、咪鮮胺等12種藥劑在200倍液下的菌絲生長抑制率在99%以上，含有效成分氟唑菌酰羥胺、異菌脲·氟啶胺、啶酰菌胺、腐霉利、多菌靈、咪鮮胺等8種藥劑在1 000倍液下的菌絲生長抑制率在90%以上，以含有效成分異菌脲·氟啶胺和咪鮮胺藥劑對菌絲生長的抑制作用最好，在5 000倍液下的菌絲生長抑制率仍能達(dá)到96%和98%以上。含有相同有效成分的不同商品藥劑如異菌脲、多菌靈、咪鮮胺等的抑制率出現(xiàn)差別，有的甚至達(dá)到顯著差異。

2.2 7種藥劑不同濃度梯度的抑菌作用

根據(jù)1.4.1試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合文獻(xiàn)常用藥劑及用藥成本，選用含有效成分異菌脲·氟啶胺、咪鮮胺、啶酰菌胺、多菌靈、腐霉利、異菌脲和菌核凈等7種藥劑進(jìn)行梯度濃度抑菌試驗(yàn)。結(jié)果表明，與對照相比，7種藥劑濃度越大，對菌落抑制作用越明顯（表3）。其中以含有效成分異菌脲·氟啶胺和咪鮮胺的防治效果最好，EC50值分別為0.01 mg/L和0.03 mg/L，其次為啶酰菌胺、多菌靈和腐霉利，而異菌脲和菌核凈的藥效結(jié)果一般。

3 結(jié)論與討論

本研究對常見17種藥劑對油菜核盤菌抑制作用進(jìn)行了測定，發(fā)現(xiàn)含有效成分400 g/L異菌脲·氟啶胺和45%咪鮮胺的對菌核病菌絲生長的抑制作用最明顯，可作為優(yōu)先推薦進(jìn)一步在大田試驗(yàn)。此外有效成分相同而商品名稱不同的殺菌劑對菌絲生長的抑制作用出現(xiàn)差別，部分達(dá)到顯著差異，推測與不同廠家的生產(chǎn)工藝和添加劑類型不同有關(guān)。下一步將對異菌脲·氟啶胺和咪鮮胺藥劑在不同地區(qū)的大田應(yīng)用效果、防治時(shí)期及藥劑安全性進(jìn)行深入研究，以便為示范推廣提供數(shù)據(jù)支撐。

參考文獻(xiàn)

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