基于MAPK通路探討三蟲通絡散結方對Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用

〔摘要〕 目的 研究三蟲通絡散結方對Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及對絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路的調控作用。方法 選取C57BL/6小鼠48只，隨機挑選6只作為空白組;42只C57BL/6小鼠構建Lewis肺癌荷瘤小鼠模型，隨機分為模型組（生理鹽水）、陽性對照組（順鉑注射液2 mg/kg）、散劑低劑量組（三蟲通絡散結方散劑0.45 g/kg）、散劑高劑量組（三蟲通絡散結方散劑1.8 g/kg）、散劑低劑量+順鉑組（三蟲通絡散結方散劑0.45 g/kg+順鉑注射液2 mg/kg）、湯劑低劑量組（三蟲通絡散結方湯劑3.9 g/kg）、湯劑高劑量組（三蟲通絡散結方湯劑15.6 g/kg），每組6只，給藥14 d后取材。計算抑瘤率和去瘤體質量;HE染色觀察皮下移植瘤體、肺組織、肝組織的病理變化;qPCR檢測皮下移植瘤細胞外調節蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases， Erk）、缺氧誘導因子-1α（hypoxia inducible factor-1α， HIF-1α）、p38、血管內皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A， VEGFA）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）、基質金屬蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2， MMP-2） mRNA的表達量;Western blot檢測皮下移植瘤Erk、HIF-1α、p38、VEGFA、JNK、MMP-2蛋白表達情況。結果 （1）與模型組相比，陽性對照組、散劑低劑量+順鉑組、散劑高劑量組瘤體質量降低（Plt;0.05）。與散劑低劑量組相比，散劑高劑量組瘤體質量降低（Plt;0.05）。與陽性對照組相比，各中藥單藥組及模型組去瘤體質量升高（Plt;0.05）。（2）各組小鼠肺組織HE染色結果顯示，散劑低劑量+順鉑組見較多腫瘤細胞壞死;各中藥組細胞均少見核分裂，腫瘤轉移灶較模型組少。各組小鼠肝組織HE染色結果顯示，散劑低劑量+順鉑組、陽性對照組未見明顯腫瘤病灶形成;散劑高劑量組、湯劑高劑量組的腫瘤轉移灶體積相對較小。（3）與模型組相比，其余各荷瘤組皮下移植瘤組織中Erk、p38 mRNA表達下降（Plt;0.05），散劑低劑量+順鉑組、散劑低劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組JNK mRNA表達下降（Plt;0.05）;與陽性對照組相比，散劑低劑量+順鉑組及各中藥組皮下移植瘤組織中JNK mRNA表達下降（Plt;0.05）。（4）與模型組相比，陽性對照組、散劑低劑量組、湯劑高劑量組Erk蛋白表達水平降低（Plt;0.05），陽性對照組、散劑低劑量+順鉑組、散劑低劑量組、散劑高劑量組、湯劑高劑量組p38、HIF-1α蛋白表達水平降低（Plt;0.05），其余各荷瘤組JNK蛋白表達水平均降低（Plt;0.05）。結論 三蟲通絡散結方對Lewis肺癌小鼠有一定的抑瘤作用，以散劑高劑量組抑瘤效果較優，其機制可能是與抑制MAPK信號通路相關。

〔關鍵詞〕 Lewis肺癌細胞;三蟲通絡散結方;肺癌;MAPK信號通路;抑瘤作用

〔中圖分類號〕R285.5" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2024.12.004

Tumor inhibitory effects of Sanchong Tongluo Sanjie Formula on Lewis lung cancer mice based on MAPK pathway

LI Yang*， ZHANG Qiachun， CHEN Lei， MO Panyan， HUANG Guodong， WANG Jigou， ZENG Chao

The Seventh Clinical College， Guangzhou University of Chinese Medicine， Shenzhen， Guangdong 518100， China

〔Abstract〕 Objective To study the tumor inhibitory effects of Sanchong Tongluo Sanjie Formula （SCTLSJF） on Lewis lung cancer mice and its regulatory effects on the mitogen-activated protein kinase （MAPK） signaling pathway. Methods A total of 48 C57BL/6 mice were selected， and six of them were randomly assigned to the blank group. The remaining 42 C57BL/6 mice were used to establish the Lewis lung cancer-bearing mouse model， and were then randomized into model group （normal saline）， positive control group （Cisplatin Injection 2 mg/kg）， low-dose powder group （SCTLSJF powder 0.45g/kg）， high-dose powder group （SCTLSJF powder 1.8 g/kg）， low-dose powder+cisplatin group （SCTLSJF powder 0.45 g/kg+Cisplatin Injection 2 mg/kg）， low-dose decoction group （SCTLSJF decoction 3.9 g/kg）， and high-dose decoction group （SCTLSJF decoction 15.6 g/kg）， with six mice in each group. Samples were collected 14 days after administration. The tumor suppression rate and tumor-free body mass were calculated. HE staining was used to observe the pathological changes of the subcutaneous xenograft tumor， lung tissues， and liver tissues; qPCR was employed to determine the mRNA expressions of extracellular regulated protein kinases （Erk）， hypoxia inducible factor-1α （HIF-1α）， p38 protein （p38）， vascular endothelial growth factor A （VEGFA）， c-Jun N-terminal kinase （JNK）， and matrix metalloproteinase 2 （MMP-2） in the subcutaneous xenograft tumor， while Western blot to examine the protein expressions of them. Results （1） Compared with the model group， the xenograft tumor mass in the positive control， low-dose powder+cisplatin， and high-dose powder groups was lower （Plt;0.05）. Compared with the low-dose powder group， the xenograft tumor mass was lower in the high-dose powder group （Plt;0.05）. Compared with the positive control group， the tumor-free body mass was higher in all pure Chinese medicine groups and model group （Plt;0.05）. （2） The HE staining of lung tissues showed that the low-dose powder+cisplatin group exhibited a higher degree of tumor cell necrosis; in all pure Chinese medicine groups， nuclear division was rarely observed， and the number of tumor metastases was lower compared to the model group. The HE staining of liver tissues showed that no significant tumor lesions were observed in the low-dose powder+cisplatin and positive control groups; the tumor metastasis foci in the high-dose powder and high-dose decoction groups were relatively small in volume. （3） Compared with the model group， the mRNA expressions of Erk and p38 in the subcutaneous xenograft tumor tissues in the other cancer-bearing groups decreased （Plt;0.05）. The expression of JNK mRNA also decreased in the low-dose powder+cisplatin， low-dose powder， low-dose decoction， and high-dose decoction groups （Plt;0.05）. Compared with the positive control group， the low-dose powder+cisplatin group and all pure Chinese medicine groups showed a decrease in JNK mRNA expression in the subcutaneous xenograft tumor tissues （Plt;0.05）. （4） Compared with the model group， the protein expression level of Erk decreased in the positive control， low-dose powder， and high-dose decoction groups （Plt;0.05）， the protein expression levels of p38 and HIF-1α decreased in the positive control， low-dose powder+cisplatin， low-dose powder， high-dose powder， and high-dose decoction groups （Plt;0.05）， and the protein expression level of JNK decreased in the other cancer-bearing groups （Plt;0.05）. Conclusion SCTLJSF has certain inhibitory effects on Lewis lung cancer in mice， with the high-dose powder group showing the superior tumor inhibitory efficacy. The mechanism may be related to the inhibition of MAPK signaling pathway.

〔Keywords〕 Lewis lung cancer cells; Sanchong Tongluo Sanjie Formula; lung cancer; mitogen-activated protein kinase signaling pathway; tumor inhibitory effects

肺癌是我國發病率、死亡率最高的惡性腫瘤[1]，許多患者確診時已處于中晚期[2]。以順鉑注射液為基礎的聯合用藥是目前治療肺癌的一線治療方案[3]，但存在毒副作用、化療耐藥性、依從性差等臨床問題。中醫藥具有高效、低毒、受眾面廣等特點，與放化療聯合在腫瘤康復階段具有獨特優勢，能發揮改善生活質量，延緩腫瘤復發轉移的作用[4-7]。三蟲通絡散結方是在中醫理論指導下，總結名家經驗并經我院長期臨床實踐總結而成的協定處方，該方由蜈蚣、全蝎和壁虎組成。本研究通過構建Lewis肺癌荷瘤小鼠模型，探討三蟲通絡散結方對Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及對MAPK信號通路的調控作用，以期為三蟲通絡散結方在肺癌臨床治療中的應用提供一定的理論依據及實驗基礎。

1 材料

1.1" 動物及細胞株

48只SPF級雄性C57BL/6小鼠，鼠齡4～6周，體質量（16±2） g，購自廣東省銳格生物科技有限公司，許可證號：SCXK（粵）2021-0059。動物實驗通過銳格生物實驗動物倫理委員會審查（批準號：20221228001）。Lewis肺癌細胞株購自武漢普諾賽生命科技有限公司，貨號：CL-0140。

1.2" 藥物

三蟲通絡散結方組成：全蝎，壁虎，蜈蚣。散劑由我院藥物臨床應用中心提供成方膠囊制劑，規格：0.5 g/粒。湯劑由上述飲片按固定比例組成進行煎煮。順鉑注射液（江蘇豪森藥業集團有限公司，批號：601220104，規格：6 mL∶30 mg）。

1.3" 主要試劑

DMEM高糖培養基、10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素溶液（雙抗）、0.25%胰蛋白酶溶液、磷酸鹽緩沖液（武漢普諾賽生命科技有限公司，批號：WHB823P171、WHB823P171、WH0622U051、WH1023N161、WH0023C101）。miRNeasy Mini試劑盒[凱杰企業管理（上海）有限公司，批號：148979541];細胞外調節蛋白激酶（extracellular regulated protein ki?nases，Erk）兔抗、缺氧誘導因子-1α（hypoxia in?ducible factor-1α，HIF-1α）兔抗、p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK）兔抗、血管內皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）兔抗、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）兔抗、基質金屬蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）兔抗（江蘇親科生物研究中心有限公司，批號：22h9958、80h4847、10y0837、83m8093、51n7087、85i1921）。

1.4" 主要儀器

生物安全柜（蘇州安泰空氣技術有限公司，型號：BSC-130ⅡB2）;低速冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司，型號：L530R）;CO2培養箱[益世科（上海）企業發展有限公司，型號：CLM-170B-8-NF];恒溫水浴鍋（天津恒高電氣科技有限公司，型號：HWT-63）;倒置熒光顯微鏡（日本東京OLYMPUS公司，型號：CKX53）。

2 方法

2.1" Lewis肺癌模型小鼠的建立

復蘇培養Lewis肺癌細胞株，使用含10%胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素溶液（雙抗）的DMEM高糖培養基，在5% CO2、37 ℃條件下培養。將細胞傳代培養，當細胞生長狀態良好并處于對數生長期時收集細胞，使用磷酸鹽緩沖液配制成濃度為2×106個/mL的細胞懸液，接種于C57BL/6小鼠右腋皮下（0.2 mL/只），建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型[8]。接種成功后觀察腫瘤生長狀況，2周內于小鼠右腋下可觸及腫塊為造模成功[8]。

2.2" 分組與給藥

從48只C57BL/6小鼠中隨機取6只小鼠作為空白組，不予任何藥物處理，其余小鼠建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。將42只Lewis肺癌荷瘤小鼠隨機分為7組，每組6只。模型組灌胃生理鹽水，灌胃體積為0.2 mL/只;散劑組予三蟲通絡散結方膠囊，將膠囊內容物溶解于生理鹽水中灌胃給藥，0.2 mL/只;根據人的使用劑量（3 g/60 kg），按照體表面積折算法[9]進行人和小鼠等效劑量換算，將小鼠低劑量代替人臨床劑量，散劑低劑量組為0.45 g/kg、散劑高劑量組為1.8 g/kg，2 mL/只，1次/d;湯劑組予傳統中藥飲片煎煮后濃縮至所需濃度，根據人的使用劑量（26 g/60 kg），按照體表面積折算法進行人和小鼠等效劑量換算，將小鼠低劑量代替人臨床劑量，湯劑低劑量組為3.9 g/kg、湯劑高劑量組為15.6 g/kg，20 g小鼠灌藥體積為1 mL/次，1次/d;陽性對照組給予順鉑注射液腹腔注射給藥，按順鉑注射液2 mg/kg給藥，順鉑注射液配制：取順鉑注射液30 mg（即6 mL），加至生理鹽水144 mL中，配制成濃度為0.2 mg/mL，20 g小鼠腹腔注射0.2 mL/次，第1、3、5、7天給藥;散劑低劑量+順鉑組灌胃給予三蟲通絡散結方散劑低劑量（藥物配制、給藥方法、劑量同散劑低劑量組）和腹腔注射順鉑注射液（方法及劑量同陽性對照組）。各組均連續干預14 d。

2.3" 指標檢測

2.3.1" 觀察小鼠一般情況" 每日觀察小鼠精神狀態、活動度，隔2天測體質量、腫瘤體積及飲食、飲水量，記錄小鼠死亡情況，并分析其死亡原因。

2.3.2" 小鼠瘤體質量、抑瘤率及去瘤體質量檢測" 給藥14 d后，脫頸處死小鼠，剝離右腋下移植瘤組織并稱重。抑瘤率（%）=（模型組平均瘤重-治療組平均瘤重）/模型組平均瘤重×100%。

2.3.3" HE染色觀察皮下移植瘤體、肺組織、肝組織的病理變化" 將新鮮小鼠右腋下移植瘤組織、肺組織及肝組織分別進行剝離、固定、脫水、浸蠟、包埋，連續4 μm切片，進行HE染色。具體染色步驟如下：石蠟切片脫蠟后，冰凍切片復溫固定，按HE染色套裝使用說明先予蘇木素染色，然后予伊紅染色，中性樹膠封片。在顯微鏡下檢查，采集圖像后進行分析。

2.3.4" qPCR檢測Erk、p38、JNK、MMP-2、HIF-1α、VEGFA mRNA的表達量" 提取小鼠皮下移植瘤于勻漿器中，加入QIAZol裂解液試劑提取總RNA，按逆轉錄試劑盒說明書要求，將提取的總RNA反轉錄成cDNA，然后再進行擴增，以GAPDH為內參，采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量。引物序列見表1。

2.3.5" Western blot檢測Erk、p38、JNK、MMP-2、HIF-1α、VEGFA蛋白表達情況" 取小鼠皮下移植瘤組織勻漿后提取總蛋白，加入SDS-PAGE后進行電泳，分離后進行轉膜，用BSA封閉PVDF膜1 h，然后洗脫5 min，加入Erk、p38、JNK、MMP-2、HIF-1α、VEGFA一抗（稀釋比例：1∶2 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000），4 ℃孵育過夜。洗膜后加入二抗孵育，再次洗滌，進行化學發光反應，然后浸入顯影液中顯色，最后凝膠成像，采用Image Lab Software測定光密度，以目標蛋白與內參條帶比值表示蛋白相對表達量。

2.4" 統計學方法

采用SPSS 23.0軟件進行數據處理，符合正態分布的計量資料以“x±s”表示，多組間比較采用單因素方差分析，以Plt;0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1" 各組小鼠一般情況

除空白組外，造模后第10～14天，于Lewis肺癌荷瘤小鼠右腋下均可觸及硬結瘤塊，造模過程無小鼠死亡。與空白組相比，模型小鼠精神狀態變差，食欲減退，活動量減少，瘤體逐漸增大。給藥第11天，散劑高劑量組小鼠因灌胃操作不當死亡1只;給藥第13天，陽性對照組死亡1只，散劑低劑量組+順鉑組死亡1只，散劑低劑量組死亡2只，散劑高劑量組死亡1只;給藥第14天，陽性對照組、湯劑低劑量組各死亡1只。小鼠死亡前精神差，活動減少，腫瘤增大、破潰，進食情況差。

3.2" 各荷瘤組小鼠瘤體質量及去瘤體質量比較

與模型組相比，陽性對照組、散劑低劑量+順鉑組、散劑高劑量組瘤體質量降低（Plt;0.05）;與陽性對照組相比，散劑低劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組瘤體質量升高（Plt;0.05）;與散劑低劑量+順鉑組相比，散劑低劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組瘤體質量升高（Plt;0.05）;與散劑低劑量組相比，散劑高劑量組瘤體質量降低（Plt;0.05）。抑瘤率由高到低前4依次為陽性對照組、散劑低劑量+順鉑組、散劑高劑量組、湯劑高劑量組，分別是64.57%、58.02%、34.40%、19.51%。與模型組相比，陽性對照組去瘤體質量下降（Plt;0.05）;與陽性對照組相比，散劑低劑量組、散劑高劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組去瘤體質量升高（Plt;0.05）。各中藥組組間去瘤體質量比較差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。詳見表2。

3.3" 各組小鼠皮下移植瘤體、肺組織、肝組織形態學變化

3.3.1" 各荷瘤組小鼠右腋皮下移植瘤的形態學變化" 各組均見成團胞核較大、異形及核質比高的腫瘤轉移灶。詳見圖1。

3.3.2" 各組小鼠肺組織的形態學變化" 空白組未見腫瘤病灶;模型組肺組織見細胞核較大、異形及核質比高的腫瘤轉移灶;散劑低劑量+順鉑組見較多腫瘤細胞壞死;湯劑低劑量組、湯劑高劑量組、散劑高劑量組、散劑低劑量組細胞均少見核分裂，腫瘤轉移灶較模型組少，但比散劑低劑量+順鉑組多;陽性對照組未見明顯腫瘤病灶形成。詳見圖2。

3.3.3" 各組小鼠肝組織的形態學變化" 空白組未見腫瘤病灶;模型組肝組織見較大體積的成團細胞核、異形及核質比高的腫瘤轉移灶;散劑低劑量+順鉑組、陽性對照組未見明顯腫瘤病灶形成;湯劑低劑量組、湯劑高劑量組、散劑低劑量組、散劑高劑量組均可見細胞核增大、異形及核質比高的腫瘤轉移灶，但散劑低劑量組的腫瘤轉移灶數量較多，體積較大，散劑高劑量組、湯劑高劑量組的腫瘤轉移灶體積相對較小。詳見圖3。

3.4" 各荷瘤組小鼠皮下移植瘤組織Erk、p38、JNK、MMP-2、HIF-1α、VEGFA mRNA的mRNA表達量比較

與模型組相比，其余荷瘤組Erk、p38 mRNA表達下降（Plt;0.05）;散劑低劑量+順鉑組、散劑低劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組JNK mRNA表達下降（Plt;0.05）;散劑低劑量組、散劑高劑量組、湯劑低劑量組HIF-1α mRNA表達下降（Plt;0.05）;散劑低劑量組VEGFA mRNA表達升高（Plt;0.05）。與陽性對照組相比，散劑低劑量+順鉑組、散劑低劑量組、散劑高劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組JNK mRNA表達下降（Plt;0.05）;散劑高劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組MMP-2 mRNA表達下降（Plt;0.05）;散劑低劑量組VEGFA mRNA表達升高（Plt;0.05）。與散劑低劑量+順鉑組相比，散劑低劑量組VEGFA mRNA表達升高（Plt;0.05）。與散劑低劑量組相比，散劑高劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組VEGFA mRNA表達下降（Plt;0.05）。與散劑高劑量組相比，湯劑低劑量組JNK mRNA表達下降（Plt;0.05）。詳見表3。

3.5" 各荷瘤組小鼠皮下移植瘤組織Erk、p38、JNK、MMP-2、HIF-1α、VEGFA的蛋白表達水平比較

與模型組相比，陽性對照組、散劑低劑量組和湯劑高劑量組Erk蛋白表達降低（Plt;0.05），湯劑低劑量組Erk蛋白表達升高（Plt;0.05）;除湯劑低劑量組外的其余各荷瘤組p38、HIF-1α蛋白表達下降（Plt;0.05）;陽性對照組、散劑低劑量組、湯劑高劑量組MMP-2蛋白表達升高（Plt;0.05）;其余各荷瘤組JNK蛋白表達均下降（Plt;0.05）;陽性對照組、散劑低劑量組和散劑高劑量組VEGFA蛋白表達下降（Plt;0.05）。與陽性對照組相比，散劑低劑量+順鉑組Erk、JNK蛋白表達水平升高（Plt;0.05），MMP-2、HIF-1α蛋白表達水平下降（Plt;0.05）;散劑低劑量組MMP-2蛋白表達水平升高（Plt;0.05）;散劑高劑量組Erk、p38、JNK蛋白表達水平升高（Plt;0.05），MMP-2蛋白表達水平下降（Plt;0.05）;湯劑低劑量組Erk、p38、JNK、HIF-1α、VEGFA蛋白表達水平升高（Plt;0.05），MMP-2蛋白表達水平下降（Plt;0.05）;湯劑高劑量組Erk、p38、JNK、VEGFA蛋白表達水平升高（Plt;0.05）。與散劑低劑量+順鉑組相比，散劑低劑量組Erk、p38、JNK、VEGFA蛋白表達水平降低（Plt;0.05），MMP-2蛋白表達水平升高（Plt;0.05）;散劑高劑量組p38、HIF-1α蛋白表達水平升高（Plt;0.05），JNK蛋白表達水平降低（Plt;0.05）;湯劑低劑量組Erk、p38、HIF-1α蛋白表達水平升高（Plt;0.05），JNK蛋白表達水平降低（Plt;0.05）;湯劑高劑量組p38、MMP-2、HIF-1α蛋白表達水平升高（Plt;0.05），Erk蛋白表達水平降低（Plt;0.05）。與散劑低劑量組相比，散劑高劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組Erk、p38、JNK及湯劑低劑量組、湯劑高劑量組的HIF-1α、VEGFA蛋白表達水平升高（Plt;0.05），散劑高劑量組、湯劑低劑量組、湯劑高劑量組MMP-2蛋白表達水平下降（Plt;0.05）。與散劑高劑量組相比，湯劑低劑量組Erk、p38、HIF-1α、VEGFA蛋白表達水平升高（Plt;0.05），湯劑高劑量組JNK、MMP-2蛋白表達水平升高（Plt;0.05）。詳見表4、圖4。

4 討論

中醫學認為肺癌的發病因素主要為痰、瘀、毒、虛[10]，以扶正祛邪為治則。蟲類藥物屬血肉有情之品，具有“無微不入、無堅不破”的特性[11]，既能扶正，又善搜剔攻毒、消瘀散結。醫家張錫純、周岱翰等治療惡性腫瘤善用蟲類藥物，全蝎、蜈蚣、壁虎是治療肺癌的常用藥物[12-14]。從全蝎毒素中分離出的幾種化合物被證實對不同的癌癥細胞具有抑制作用[15]。全蝎與蜈蚣是抗腫瘤治療的常用藥對[12]，兩者聯用可能通過調控COX-2/Akt/MDM2/p53信號通路抑制非小細胞肺癌細胞A549的增殖[16]。壁虎抗腫瘤療效確切，其作用機制可能與抑制腫瘤細胞增殖分化、誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤部位血管新生等有關[17]。

湯劑是臨床最為常用的中藥劑型，具有配方靈活的特點[18]，但煎煮過程繁瑣。將氣味特殊的蟲類藥粉碎過篩制成散劑，填充于空心硬質膠囊中制成膠囊劑[19]，既保留了原有的藥性，又能掩蓋不良氣味，方便攜帶及服用。不同中藥劑型在應用中各有優缺點，本實驗過程中使用了中藥湯劑及散劑以探索其在作用的差異。

MAPK信號傳導通路在非小細胞肺癌的發生、發展、轉移和侵襲等階段均發揮重要作用，Erk、p38、JNK是其中的重要亞族。研究表明，中藥通過降低MAPK通路中關鍵蛋白Erk、p38、JNK的磷酸化水平，抑制肺癌細胞MAPK信號傳導通路的活化，能促進肺癌細胞凋亡，抑制肺癌細胞的體內體外增殖[20-22]。HIF有HIF-1、HIF-2及HIF-3三種亞型，均由α亞基和β亞基構成，α亞基是活性亞基[23]。在肺癌等惡性腫瘤中，HIF-1α的表達量增加，HIF-1能促進腫瘤血管生成、上調并激活基質金屬蛋白酶及賴氨酸氧化酶等細胞因子及信號通路，調節包括VEGF在內的多種血管生長因子表達的編碼基因，參與腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉移等相關生物學行為。VEGF和MMP-2是促進腫瘤微血管生長的細胞因子，可通過使毛細血管增生、新生血管形成等，促進腫瘤生長和擴散[24]。

本研究結果顯示，三蟲通絡散結方能抑制Lewis肺癌皮下移植瘤生長，并且在穩定體質量上較順鉑注射液有優勢。三蟲通絡散結方有抑制腫瘤肺轉移、肝轉移的作用;高劑量組（散劑和湯劑）較低劑量組有更好的抑制肝轉移作用。三蟲通絡散結方可下調Erk、p38、JNK、HIF-1α mRNA表達的效果，高劑量組（散劑、湯劑）三蟲通絡散結方可下調VEGFA mRNA表達。三蟲通絡散結方可以下調Erk、p38、JNK、HIF-1α、VEGFA蛋白表達，不同劑量、不同劑型的三蟲通絡散結方對各蛋白表達上的影響有差異，呈現的趨勢是在同級別劑量組中，散劑組抑制p38、JNK、HIF-1α和VEGFA蛋白表達優于湯劑組;劑量增減對散劑作用的影響似乎較湯劑明顯，散劑高劑量組抑制MMP-2蛋白表達優于散劑低劑量組。

綜上所述，三蟲通絡散結方可抑制Lewis肺癌小鼠移植瘤的生長，有抑制腫瘤肺轉移、肝轉移的作用，推測其機制可能與下調Erk、p38、JNK mRNA表達，下調Erk、p38、JNK蛋白表達，抑制MAPK信號通路有關。三蟲通絡散結方不同劑量及不同劑型在抑瘤作用上有差異，高劑量組抑制移植瘤體、抑制肝轉移作用更佳，以散劑高劑量抑瘤作用更佳。本研究為三蟲通絡散結方在肺癌臨床治療中的應用提供了新的實驗基礎，其藥理學、毒理學等方面有待后續研究探討。

參考文獻

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〔基金項目〕廣東省中醫藥管理局項目（20231294）;深圳市寶安區科創局項目（2021JD145）;深圳市寶安區引進高層次醫學團隊項目資助項目（202403）;深圳市寶安區2024年度區屬公立醫院高質量發展研究項目（BAGZL2024119）。

〔通信作者〕*李" 陽，女，博士，副主任中醫師，E-mail：liyang2001@126.com。