乳癌組織中Cath-D與突變型p53的相關性及其臨床意義

［摘要］ 目的 探討乳癌組織中人組織蛋白酶D（Cath-D）與突變型p53的相關性及其臨床意義。

方法 采用免疫組化法檢測156例乳癌標本中Cath-D與突變型p53蛋白的表達，分析二者的相關性以及Cath-D表達與臨床病理特征的關系。

結果 乳癌組織中Cath-D與突變型p53的陽性表達率分別是74.4%和58.3%。與無淋巴結轉移和組織學Ⅰ級相比，有淋巴結轉移、組織學Ⅱ～Ⅲ級的乳癌病人癌組織中Cath-D的表達率顯著增高（χ²=4.416、19.896，P＜0.05）。相關分析結果顯示，乳癌組織中Cath-D的表達與人類表皮生長因子受體2（Her-2）、Ki-67和突變型p53的表達呈正相關（r=0.197～0.308，P＜0.05）。與Cath-D（-）、突變型p53（-）以及其他類型腫瘤相比，Cath-D（+）、突變型p53（+）以及Cath-D（+）/p53（+）腫瘤無病生存期明顯縮短（χ²=3.924～5.97 P＜0.05），而Cath-D和突變型p53表達與病人總生存期無關（P＞0.05）。

結論 聯合檢測乳癌組織中Cath-D與突變型p53的表達可判斷乳癌預后，對臨床治療有一定的參考價值。

［關鍵詞］ 乳腺腫瘤；組織蛋白酶D；基因，p53；預后；免疫組織化學；病理學，臨床

［中圖分類號］ R737.9；R365

［文獻標志碼］ A

［文章編號］ 2096-5532（2024）06-0796-05

doi：10.11712/jms.2096-5532.2024.60.202

［開放科學（資源服務）標識碼（OSID）］

［網絡出版］ https：//link.cnki.net/urlid/37.1517.R.20250109.1700.003;2025-01-10 10：56：40

Correlation between Cath-D and mutant p53 in breast cancer tissue and their clinical significance

JIANG Nan， WANG Xin， MA Ping，ZHANG Guofen， LI Xiangli

（Department of Thoracic Surgery， Beijing Chest Hospital， Capital Medical University， Beijing 101149， China）

［Abstract］ Objective To investigate the correlation between Cath-D and mutant p53 in breast cancer tissue and their clinical significance.

Methods "Immunohistochemistry was used to measure the protein expression of Cath-D and mutant p53 in 156 breast cancer specimens， and the correlation between Cath-D and mutant p53 was analyzed， as well as the association between Cath-D expression and clinicopathological features.

Results "The positive expression rates of Cath-D and mutant p53 in breast cancer tissue were 74.4% and 58.3%， respectively. Compared with the patients without lymph node metastasis and those with histological grade Ⅰ breast cancer， the patients with lymph node metastasis or histological grade Ⅱ-Ⅲ breast cancer had a significant increase in the expression of Cath-D in cancer tissue （χ²=4.416，19.896，Plt;0.05）. The correlation analysis showed that the expression of Cath-D in breast cancer tissue was positively correlated with the expression of Her- "Ki-67， and mutant p53 （r=0.197-0.308，Plt;0.05）. Compared with the Cath-D （-） group， the mutant p53 （-） group， and the other types of tumor， the Cath-D （+） group， the mutant p53 （+） group， and the Cath-D （+）/p53 （+） group had a significantly shorter disease-free survival （χ²=3.924-5.97 Plt;0.05）， while the expression of Cath-D and mutant p53 was not correlated with the overall survival of patients （Pgt;0.05）.

Conclusion The combined measurement of Cath-D and mutant p53 in breast cancer tissue can be used to assess the prognosis of breast cancer， which has a certain reference value in clinical treatment.

［Key words］ breast neoplasms; cathepsin D; genes， p53; prognosis; immunohistochemistry; pathology， clinical

乳癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一^[1-3]，嚴重危害女性健康。其發生是多種基因參與的結果，多種癌基因和抑癌基因與乳癌的預后密切相關^[4-5]。研究表明，人組織蛋白酶D（Cath-D）與乳癌發生、發展及預后密切相關，其過表達提示腫瘤惡性程度高和預后不良^[6]。p53是一種抑癌基因，分為野生型和突變型。野生型p53是一種正常的抑癌基因，可以抑制癌細胞的生長并殺死癌細胞，而突變型p53基因則喪失了抑癌功能。目前，關于乳癌組織中 Cath-D 和突變型 p53之間關系的研究相對較少。本研究采用免疫組織化學法檢測乳癌組織中Cath-D與突變型p53的表達，分析二者之間的相關性以及Cath-D與乳癌各臨床特征和預后的關系，旨在探討Cath-D在乳癌診斷、治療和預后評估中的價值。現將結果報告如下。

1 材料和方法

1.1 標本及其來源

選擇2011年1月—2019年2月清華大學第一附屬醫院普外科收治的156例女性乳癌病人作為研究對象，獲取156個乳癌蠟塊組織標本。納入標準：①女性；②均行手術治療，病理確診為乳癌；③術前未行放療、化療等新輔助治療；④臨床病理資料完整；⑤隨訪資料完整；⑥未合并其他惡性腫瘤。對所有156例乳癌病人定期進行生存隨訪，所有生存數據通過查閱病歷系統以及電話隨訪獲得。隨訪時間22～122個月，中位隨訪時間71.5個月，隨訪時間截至2022年5月。本研究經清華大學第一附屬醫院倫理委員會批準且所有病人及家屬均知情同意。

1.2 免疫組織化學方法檢測Cath-D與p53表達

采用SP法對組織切片進行染色，Cath-D與p53抗體購于北京中杉金橋生物技術有限公司。蠟塊切片、脫蠟、水化后，滅活內源性過氧化物酶，高壓熱抗原修復（EDTA，pH=8.0），滴加一抗Cath-D（ZA-064 工作液）與p53（ZM-0408，工作液），4 ℃孵育過夜，37 ℃孵育2 h，滴加二抗，室溫避光孵育30 min，37 ℃孵育30 min，二氨基聯苯胺（DAB）避光顯色，蘇木精復染，透明，封片。分別以p53陽性的卵巢漿液性癌組織和Cath-D陽性的其他人乳癌組織作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖溶液（PBS）代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定

Cath-D和突變型p53的免疫組織化學染色結果判定參照文獻標準^[7-9]：Cath-D的陽性反應物為胞質內棕色顆粒，突變型p53的陽性反應為細胞核呈棕黃色。Cath-D陽性表達根據染色強度和陽性細胞比例判定。①染色強度評分：無著色1分，淺黃色2分，棕黃色3分，棕褐色4分；②陽性細胞比例評分：陽性細胞0～10%為1分，陽性細胞11%～25%為2分，陽性細胞26%～50%為3分，陽性細胞51%～75%為4分，陽性細胞≥76%為5分。兩項評分之和≥8分為陽性，＜8分為陰性。突變型p53陽性表達根據p53的表達率進行判斷，陽性細胞數的cutoff值75%，陽性表達率=（弱陽性+陽性+強陽性）例數/總例數×100%。

1.4 統計學處理

采用SPSS 26.0統計軟件對數據進行統計學分析。計數資料比較采用χ²檢驗；采用Spearman相關分析Cath-D與分子特征和突變型p53之間的關系；采用Kaplan-Meier生存分析法（Log-rank檢驗）進行生存分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結" 果

2.1 Cath-D與突變型p53在乳癌組織中的表達

乳癌組織中Cath-D主要表達于細胞質，突變型p53主要表達于細胞核。156例乳癌病人組織中，Cath-D與突變型p53的陽性表達率分別為74.4%（116/156）和58.3%（91/156）。見圖1。

2.2 Cath-D與臨床病理特征的關系

有淋巴結轉移、組織學Ⅱ～Ⅲ級的乳癌病人癌組織中Cath-D的表達率分別顯著高于無淋巴結轉移、組織學Ⅰ級的病人（χ²=4.416、19.896，P＜0.05），而Cath-D表達與病人的年齡、腫瘤部位和病理類型無關（P＞0.05）。見表1。

2.3 Cath-D與分子特征和突變型p53的關系

Spearman相關性分析結果顯示，乳癌組織中Cath-D的表達與Her-2、Ki-67和突變型p53的表達呈正相關（r=0.197～0.308，P＜0.05），且Cath-D的表達與腫瘤分子分型有關（r=0.295，P＜0.01）。見表2。

2.4 Cath-D和突變型p53與病人術后生存時間的關系

2.4.1 Cath-D和突變型p53與病人無病生存率（DFS）的關系 Kaplan-Meier分析顯示，Cath-D（+）組的3年和5年DFS分別為85.3%和75.0%（總DFS為70.7%），而Cath-D（-）組分別為97.5%和95.0%（總DFS為87.5%），兩組比較差異有統計學意義（Log-rank檢驗，χ²=4.00 P＜

0.05）。突變型p53（+）組的3年和5年DFS分別為84.6%和75.8%（總DFS 69.2%），而突變型p53（-）組分別為93.8%和86.2%（總DFS為83.1%），兩組比較差異有統計學意義（Log-rank檢驗，χ²=3.92 P＜0.05）。Cath-D（+）/p53（+）組病人3年和5年DFS分別為82.1%和73.1%（總DFS為66.7%），而其他組分別為94.9%和87.2%（總DFS為83.3%），兩組比較差異有統計學意義（Log-rank檢驗，χ²=5.97 P＜0.05）。見圖2。

2.4.2 Cath-D和突變型p53與病人總生存率（OS）的關系 Kaplan-Meier分析顯示，Cath-D（+）組的3年和5年OS分別為94.8%和88.8%（總OS為75.9%），而Cath-D（-）組分別為97.5%和97.5%（總OS為90%），兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。突變型p53（+）組的3年和5年OS分別為94.5%和87.9%（總OS為75.8%），而突變型p53（-）組分別為96.9%和95.4%（總OS為84.6%），兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。Cath-D（+）/p53（+）組的3年和5年OS分別為93.6%和85.9%（總OS為74.4%），而其他組分別為97.4%和96.2%（總OS為84.6%），兩組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見圖3。

3 討" 論

Cath-D是一種普遍存在的溶酶體天冬氨酸蛋白酶，在低pH值條件下具有蛋白水解活性^[10-13]。人乳癌細胞分泌過量Cath-D^[14]，其表達水平與不良預后相關^[8，14-15]。Cath-D可以通過促進乳癌細胞增殖^{[8，1 16-17]}、成纖維細胞生長^[18-19]以及腫瘤血管生成^[20-21]，改變乳腺腫瘤微環境并促進腫瘤生長和轉移^[17]。本研究中的Cath-D在乳癌組織中的陽性表達率為74.4%，與TEMMIM等^[22]報道的72%非常接近。BARTHELL等^[23]研究發現，Cath-D在淋巴結陽性的乳癌組織中高表達；趙亞新等^[24]研究發現，Cath-D的表達與多種提示預后差的臨床病理特征呈正相關。本文研究結果顯示，Cath-D在組織學分級Ⅱ～Ⅲ級乳癌組織中的表達顯著高于Ⅰ級，且在淋巴結轉移組的表達明顯高于無淋巴結轉移組。提示Cath-D 的高表達預示著腫瘤的高度惡性和侵襲性。

Her-2參與調控細胞生長發育，促進腫瘤細胞的增殖和分化，與腫瘤的發生密切相關^[25-28]。目前，大量研究已證實Her-2與乳癌的發生、發展密切相關，其過度表達提示惡性程度高和不良預后。許良中等^[29]研究顯示，Cath-D的表達與Her-2的表達呈正相關。提示Cath-D的高表達與腫瘤的高侵襲性和不良預后相關，也提示Cath-D高表達的病人可能對曲妥珠單抗等抗Her-2靶向治療敏感。Ki-67是一種與細胞增殖相關的核蛋白，可影響細胞有絲分裂，與腫瘤細胞的增殖和調控密切相關。Ki-67在乳癌中高表達提示腫瘤分化差、侵襲性高、易轉移^[30-31]。本文研究結果顯示，Cath-D與Ki-67的表達呈正相關，Cath-D在預后較好的Luminal A型腫瘤中的表達明顯低于其他類型腫瘤。p53參與細胞的凋亡過程，是重要的細胞生長調節因子。采用免疫組織化學方法檢測到的突變型p53蛋白可導致細胞轉化和癌變，并可激活其他癌基因。突變型p53的陽性表達提示乳癌具有高度侵襲性和預后不良^[32]。本研究結果顯示，Cath-D與突變型p53的表達呈正相關，與有關研究結果一致^[33]。本文生存分析結果顯示，Cath-D（+）、突變型p53（+）以及Cath-D（+）/p53（+）乳癌病人的DFS較低，與文獻報道一致^[6，34-35]，表明Cath-D和p53的高表達提示預后較差。

綜上所述，Cath-D的高表達預示著乳癌較差的生物學行為和預后，聯合檢測乳癌組織中Cath-D與突變型p53的表達可判斷乳癌病人的預后，對臨床治療具有一定的參考價值。

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（本文編輯 牛兆山）