GSDMB在口腔鱗狀細胞癌組織中的表達及臨床意義

［摘要］ 目的 探討Gasdermin B（GSDMB）在口腔鱗狀細胞癌（OSCC）組織中的表達及臨床意義。

方法 應用免疫組織化學法檢測128例OSCC組織及癌旁組織中GSDMB和白細胞介素1β（IL-1β）的表達水平，分析兩者表達以及GSDMB與OSCC臨床病理參數的關系。

結果 與癌旁組織相比，GSDMB和IL-1β在128例OSCC組織中的表達水平顯著升高（χ2=9.022、9.478，P＜0.01），且兩者在OSCC組織中的表達呈正相關（r=0.26 P＜0.01）。GSDMB的高表達與OSCC較高分化、較高臨床分期、淋巴結轉移和腫瘤復發相關（χ2=3.970～6.29 P＜0.05）。生存分析顯示，GSDMB表達較高的OSCC病人總生存期和無病生存期較短（χ2=25.839、27.79 P＜0.001）。Cox多因素回歸分析顯示，GSDMB高表達是影響OSCC病人總生存期和無病生存期的獨立預后因素。

結論 GSDMB在OSCC組織中的高表達與病人的預后不良有關，是OSCC病人的獨立預后因素。

［關鍵詞］ 口腔腫瘤；孔蛋白質類；疾病特征；預后；免疫組織化學；病理學，臨床

［中圖分類號］ R739.8

［文獻標志碼］ A

［文章編號］ 2096-5532（2024）06-0801-06

doi：10.11712/jms.2096-5532.2024.60.180

［開放科學（資源服務）標識碼（OSID）］

［網絡出版］ https：//link.cnki.net/urlid/37.1517.r.20241231.1450.005;2025-01-02 14：10：33

Expression and clinical significance of Gasdermin B in oral squamous cell carcinoma tissue

ZHANG Xuan， LI Tongtong， GUO Yan， FENG Yuanyong， WANG Ning

（Department of Pathology， School of Basic Medicine， Qingdao University， Qingdao 266000， China）

［Abstract］ Objective To investigate the expression and clinical significance of Gasdermin B （GSDMB） in oral squamous cell carcinoma （OSCC）.

Methods "Immunohistochemistry was used to measure the expression levels of GSDMB and interleukin-1β （IL-1β） in 128 OSCC tissue samples and paracancerous tissue samples， and a correlation analysis was performed between the expression levels of GSDMB and IL-1β and between GSDMB and the clinicopathological parameters of OSCC.

Results "The expression levels of GSDMB and IL-1β in OSCC tissue were significantly higher than those inparacancerous tissue （χ²=9.02 9.478，Plt;0.01）， and there was a positive correlation between them in OSCC tissue （r=0.26 Plt;0.01）. The high expression of GSDMB was associated with well-differentiated tumor，high clinical stages， lymph node metastasis， and tumor recurrence of OSCC （χ²=3.970-6.29 Plt;0.05）.The survival analysis showed that the OSCC patients with a relatively high expression level of GSDMB tended to have shorter overall survival time and disease-free survival time （χ²=25.839，27.79 Plt;0.001）. The multivariate Cox regression analysis showed that the high expression of GSDMB was an independent prognostic factor for the overall survival and di-sease-free survival of OSCC patients.

Conclusion The high expression of GSDMB in OSCC is associated with poor prognosis and is an independent prognostic factor for patients with OSCC.

［Key words］ mouth neoplasms; porins; disease attributes; prognosis; immunohistochemistry; pathology， clinical

口腔鱗狀細胞癌（OSCC）是最常見的口腔惡性腫瘤，病人的5年生存率僅為40%～50%^[1]。盡管OSCC的手術和輔助治療水平不斷提高，但由于侵襲性生長和較高的轉移率，其5年生存率一直沒有顯著地增加^[2-3]。因此，探索與OSCC預后相關的新靶點具有重要意義。既往研究表明，Gasdermin B（GSDMB）在哮喘、腸道感染和炎癥性腸病等炎癥性疾病中高表達并發揮不同的作用^[4-9]，但在銀屑病中表達下調并抑制細胞增殖^[10]。最近的研究表明，GSDMB也能像其他Gasdermin一樣參與細胞焦亡過程^[11]。此外，GSDMB可被半胱天冬酶-3/-6/-7切割，或被自然殺傷細胞或細胞毒性T淋巴細胞釋放的顆粒酶A切割并激活，形成細胞毒性N末端結構域，引發靶細胞焦亡^[12]。近年來的研究顯示，GSDMB在某些惡性腫瘤中異常表達^[13-19]，其異常表達與OSCC預后不良有關^[20]。然而，目前關于OSCC病人GSDMB的表達及其與臨床預后的關系報道較少。因此，本研究應用免疫組織化學方法，檢測GSDMB和白細胞介素1β（IL-1β）在OSCC組織中的表達水平，分析二者相關性，并分析GSDMB表達與病人臨床病理參數的關系及對術后生存時間的影響，旨在探討GSDMB在OSCC預后評估中的作用。

1 材料與方法

1.1 標本及其來源

收集2010—2020年在青島大學附屬醫院接受頜面部手術的128例病人（男88例，女40例）的OSCC組織，同時收集了16例OSCC癌旁組織。病人術前均未接受放療或化療，保證了其信息參數的完整性。對所有128例OSCC病人定期進行生存隨訪，隨訪時間2010年1月1日—2020年1月1日。本研究經青島大學附屬醫院倫理委員會批準且所有病人均簽署了知情同意書。

1.2 免疫組化方法檢測GSDMB和IL-1β的表達

石蠟切片經脫蠟和梯度乙醇水化后，嚴格按照通用SP試劑盒（福州邁新公司，KIT-9710）說明書進行操作。檸檬酸鈉抗原修復液微波加熱修復抗原10 min，自然冷卻至室溫；磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，滴加內源性過氧化物酶阻斷劑，孵育10 min，PBS沖洗3次，每次3 min；滴加非特異性染色阻斷劑，孵育15 min，不沖洗。切片滴加一抗GSDMB兔抗人多克隆抗體（武漢Proteintech公司，12885-1-AP，滴度1∶100）和IL-1β兔抗人多克隆抗體（abcam公司，ab283818，滴度1∶500），4 ℃孵育過夜。用PBS 沖洗，滴加生物素標記的羊抗兔IgG 聚合物和鏈霉親和素-過氧化物酶，分別孵育10 min。用PBS沖洗3次，每次3 min，二氨基聯苯胺（DAB）顯色，光鏡下觀察，當細胞質出現棕色顆粒時即為陽性表達，立即用蒸餾水沖洗終止實驗，然后用蘇木精復染，中性樹膠封片。以已知GSDMB陽性的腎透明細胞癌組織作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定

由兩位經驗豐富的病理醫師在光鏡下雙盲閱片并判定結果。免疫組化染色根據陽性細胞所占百分比及染色強度進行評分^[21]。①染色強度評分標準：無著色0分，染色淺黃色1分，染色黃色2分，染色棕黃色3分；②陽性細胞所占百分比評分：陽性細胞占比＜5%為0分，陽性細胞占比5%～25%為1分，陽性細胞占比26%～50%為2分，陽性細胞占比51%～75%為3分，陽性細胞占比76%～100%為4分。總評分≤6分為低表達，＞6分為高表達。

1.4 統計學處理

采用SPSS 25.0軟件對數據進行統計學分析。采用χ2檢驗分析GSDMB表達與臨床病理特征的關系；采用Kaplan-Meier生存分析法（Log-rank檢驗）進行生存分析；應用Cox回歸模型分析影響OSCC病人術后預后獨立因素。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結" 果

2.1 頭頸鱗狀細胞癌（HNSC）和正常鱗狀上皮組織中GSDMB mRNA表達比較

對癌癥基因組圖譜（TCGA）數據庫進行檢索，并分析HNSC與正常鱗狀上皮組織中GSDMB mRNA的表達情況。結果顯示，GSDMB mRNA在HNSC組織中的表達高于正常鱗狀上皮組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖1。

2.2 GSDMB和IL-1β在OSCC組織及癌旁組織中的表達比較

免疫組化檢測結果顯示，OSCC及癌旁組織中GSDMB和IL-1β主要表達于細胞質（圖2）。在128例OSCC組織中，GSDMB高表達者82例，低表達者46例；IL-1β高表達者67例，低表達者61例。而在癌旁組織中，4例GSDMB呈高表達，12例呈低表達；3例IL-1β呈高表達，13例呈低表達。與癌旁組織相比，GSDMB和IL-1β在OSCC組織中的表達水平均升高，差異有顯著性（χ2=9.022、9.478，P＜0.01）。在OSCC組織中GSDMB與IL-1β的表達呈正相關（r=0.26 P＜0.01）。見表1。

2.3 GSDMB與OSCC病人臨床病理參數的關系

OSCC病人癌組織中GSDMB高表達與較高分化、較高臨床分期、淋巴結轉移和腫瘤復發等有關（χ2=3.970～6.29 P＜0.05），與病人性別、年齡和腫瘤大小無關（P＞0.05）。見表2。

2.4 GSDMB與OSCC病人術后生存時間的關系

對128例OSCC病人進行生存分析，結果顯示，GSDMB高表達病人的總生存期、無病生存期中位數分別為65.85、57.54個月，低表達病人分別為111.25、110.45個月，GSDMB高表達病人的總生存期和無病生存期較低表達者更短（χ2=25.839、27.79 P＜0.001）（圖3A、B）。在中、低分化的病人中，GSDMB高表達病人的總生存期和無病生存期中位數分別為37.58、19.83個月，低表達病人分別為93.42、91.31個月，GSDMB高表達病人的總生存期和無病生存期較低表達者更短（χ2=26.139、33.10 P＜0.001）（圖3C、D）。在有腫瘤復發的病人中，GSDMB高表達病人的總生存期、無病生存期中位數分別為46.71、17.42個月，低表達病人分別為86.00、56.67個月，GSDMB高表達病人總生存期和無病生存期較低表達者更短（χ2=6.330、13.289，P＜0.05）（圖3E、F）。

2.5 OSCC病人獨立預后影響因素分析

將OSCC病人的性別（女為參照）、年齡（≤60歲為參照）、分化程度（中、低分化為參照）、淋巴結轉移（陰性為參照）、TNM分期（Ⅲ～Ⅳ期為參照）、腫瘤大小（直徑≥4 cm為參照）、腫瘤復發（陰性為參照）、GSDMB表達（低表達為參照）等臨床病理特征納入Cox回歸模型，進行獨立預后影響因素分析。單因素回歸分析結果表明，GSDMB表達、分化程度、淋巴結轉移、TNM分期和腫瘤復發對OSCC病人總生存期和無病生存期的影響差異均有統計學意義（Plt;0.05）。多因素回歸分析結果表明，GSDMB表達、淋巴結轉移、TNM分期和腫瘤復發是影響OSCC病人總生存期的獨立預后因素，而GSDMB表達、分化程度、淋巴結轉移、TNM分期和腫瘤復發是影響OSCC病人無病生存期的獨立預后因素（Plt;0.05）。見表3、4。

3 討" 論

GSDMB是一種基因位于染色體17q21的成孔蛋白，主要表達在胃腸道、肝臟等器官的上皮細胞和淋巴組織^[22]，調節細胞遷移與黏附。本文研究結果顯示，GSDMB在OSCC組織中的表達高于癌旁組織，其表達與OSCC的分化程度、臨床分期、淋巴結轉移和腫瘤復發密切相關。Kaplan-Meier生存分析顯示，GSDMB高表達的OSCC病人總生存期和無病生存期較短，GSDMB表達是影響OSCC病人生存的獨立預后因素。這與之前許多其他惡性腫瘤的研究結果相似，即GSDMB高表達的病人預后較差^{[13-16，23-24]}。

HE等^[24]的研究結果顯示，GSDMB可通過與STAT3相互作用，提高膀胱癌中STAT3的磷酸化水平，從而調節糖代謝，促進膀胱癌的生長和侵襲。此外，GSDMB可能與其他信號通路相互作用，誘發乳癌的發生^[25]。以往的研究表明，GSDMB和其他Gasdermin家族成員一樣，也參與細胞焦亡的發生^[11]，細胞焦亡后釋放IL-1β和IL-18等多種趨化因子^[26]。然而，GSDMB在腫瘤中參與細胞焦亡發生鮮見報道。本研究檢測了IL-1β在OSCC組織中的表達，結果顯示，IL-1β在OSCC中高表達，且與GSDMB的表達呈正相關。提示GSDMB在OSCC組織中過度表達可能會觸發腫瘤細胞焦亡，從而參與腫瘤的演進。此外，GSDMB還被認為是一種與免疫浸潤相關的分子^[27]。研究表明，GSDMB在哮喘病人的支氣管黏膜上皮細胞中高表達，從而上調包括轉化生長因子-β、基質金屬蛋白酶9、粒細胞趨化蛋白-2和CXC基序趨化因子配體在內的多種因子的表達，并通過趨化中性粒細胞和嗜酸性粒細胞到達炎癥部位，促進氣道重塑^[4]。另外，相關研究表明，GSDMB在腎透明細胞癌中的高表達與中性粒細胞、CD4⁺/CD8⁺T細胞等免疫細胞密切相關，可通過與免疫細胞的相互作用影響病人的術后生存時間^[23]。我們前期的實驗結果也顯示，OSCC組織中存在大量中性粒細胞浸潤，并與病人臨床預后不良有關^[28]。這可能是由于GSDMB觸發OSCC細胞焦亡，釋放多種趨化因子（如IL-1β和IL-18），吸引更多的中性粒細胞到達腫瘤部位，從而參與腫瘤的發展和演進^[23]。

綜上所述，OSCC組織中GSDMB的高表達與OSCC病人的不良預后有關，為OSCC的獨立預后因素。本實驗僅探討了GSDMB表達與OSCC病人預后的關系，后續還需要進一步探索GSDMB表達對OSCC影響的具體生物學作用及其分子機制。

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（本文編輯 牛兆山）