致仔豬腹瀉奇異變形桿菌的分離鑒定與耐藥性分析

摘要：為了鑒定合肥地區規模化養殖場中引起16日齡仔豬腹瀉死亡的病原，本試驗從合肥地區規模化養殖場采集16日齡因腹瀉死亡仔豬的肛拭子、血液及肝臟等病料組織共計3份，采用膠體金試紙條法分別檢測豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、冠狀病毒及豬流行性腹瀉病毒4種病毒性病原；采用分離培養、形態學觀察、生化鑒定對病原菌進行鑒定，采用人工感染動物攻毒試驗和K-B藥敏紙片法分別測定致病菌株的致病性、毒力基因及耐藥性。結果顯示，從采集16日齡因腹瀉死亡仔豬的肛拭子、血液及肝臟等病料組織中4種病毒性病原檢測為陰性；分離得到1株奇異變形桿菌，并命名為SP-1株，它能引起小鼠死亡，其死亡率為60%；SP-1株對青霉素、阿莫西林、氨芐西林等6種抗菌藥耐藥性較高；對頭孢噻呋、恩諾沙星等4種抗菌藥物高度敏感，對大觀霉素、氟苯尼考中敏。為該地區致仔豬腹瀉奇異變形桿菌的流行病學調查和防控提供參考。

關鍵詞：仔豬；奇異變形桿菌；致病性；藥敏試驗

在規模化養殖中，仔豬的養殖數量較多且飼養密度較大，其相關的疾病（病毒性、細菌性）發病呈現逐年上升的趨勢，尤其仔豬腹瀉性疾病發病率和死亡率均較高，且成為規模化養殖中危害比較厲害的疾病[1]。經過國內外相關研究表明，仔豬腹瀉性疾病是危害養豬業主要疾病之一，引起仔豬腹瀉的因素很多（如病毒性因素、細菌性因素、寄生蟲性因素及飼養管理因素等），其中細菌性因素是仔豬養殖過程中最常見的因素之一，如大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌、志賀菌及巴氏桿菌等均能引起仔豬的腹瀉[2]。近幾年，相關研究報道奇異變形桿菌也成為引起仔豬腹瀉的病原之一。奇異變形桿菌是腸桿菌科變形桿菌屬的成員，該菌為革蘭陰性菌，可以引起雞、鴨、豬、牛、羊、馬雞兔等多種動物發病，當感染奇異變形桿菌后，多種動物臨床中以腹瀉、肺炎、尿路感染為主要的臨床癥狀，嚴重者可以導致死亡[3-5]。因此，對奇異變形桿菌的防控具有重要的意義。經過研究表明，臨床分離不同宿主源奇異變形桿菌對常用的抗菌藥物產生不同程度耐藥性，個別的分離菌株出現多重耐藥性，不同宿主源的奇異變形桿菌的耐藥性產生，在臨床中對該病的治療帶來一定的困難[6]。本試驗從合肥地區規模化養殖場采集16日齡因腹瀉死亡仔豬的肛拭子、血液及肝臟等病料組織共計3份，其中 4種病毒性病原檢測為陰性，并分離得到1株奇異變形桿菌，并對其致病性和耐藥性進行檢測，以期為致仔豬腹瀉奇異變形桿菌的流行病學調查和防控提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 病料來源

2023年9月，從合肥地區規模化養殖場采集16日齡因腹瀉死亡仔豬的肛拭子、血液及肝臟等病料組織共計3份。

1.2 病毒性病原的檢測

對采集的病料組織進行處理，將采集的血液病料樣品，采用離心機（6 000 r/min，5 min）進行分離血清，4 ℃保存備用。參照豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、冠狀病毒及豬流行性腹瀉病毒4種病毒病原的膠體金試紙條說明書，將分離血清分別滴入4種病毒性病原（豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、冠狀病毒及豬流行性腹瀉病毒）的膠體金試紙條中，靜置10 min觀察結果，參照說明書進行結果判定。

1.3 細菌分離和培養

采集16日齡因腹瀉死亡仔豬的肛拭子、血液及肝臟等病料組織用無菌生理鹽水進行處理，取處理的病料組織在超凈工作臺中（無菌條件下）接種于增菌液中進行振蕩培養（37 ℃）12 h，取培養物，在無菌的條件下分別接種于XLD和SS培養基中，37 ℃條件下進行培養12～24 h，挑取XLD和SS培養基上典型的單個菌落在無菌的條件接種于普通營養肉湯中37 ℃條件下振蕩培養后，取營養肉湯培養的分離菌株進行革蘭氏染色在，顯微鏡下觀察其形態學。

1.4 細菌生化試驗鑒定

將臨床中分離得到的菌株接種于普通營養肉湯中培養至對數期，采用無菌的營養肉湯調整菌液濃度為0.5～1個麥氏濁度，按照32E腸桿科菌生化鑒定試紙條說明書，將臨床中分離得到的菌株培養液（0.5～1個麥氏濁度），分別接種于32E腸桿科菌生化鑒定試紙條，在37 ℃恒溫條件下培養18～24 h后，對臨床分離的菌株進行生化特性鑒定。

1.5 動物攻毒試驗

取1.3中培養至對數期的分離菌株，采用平板計數法進行菌落計數處理，將菌落計數處理的分離菌株調整菌液濃度為108 CFU/mL，采用腹腔注射攻毒方法攻毒對5只小鼠，每只小鼠的攻毒劑量為0.25 mL（108 CFU/mL），對照組5只小鼠給予等量的無菌的營養肉湯，分離菌株的攻毒試驗期為7 d，在攻毒試驗期間觀察攻毒小鼠及未攻毒小鼠的發病和死亡情況，對發現死亡的小鼠進行剖檢后采集病料組織進行細菌分離和鑒定。

1.6 藥敏試驗

取1.4中培養至對數期的分離菌株（108 CFU/mL）為藥敏試驗的試驗菌株，參照CLSI2013年推薦的標準K-B紙片法，對分離菌株進行敏試驗進行操作結果判斷，并分析對常用的抗菌藥物耐藥性。

2 結果

2.1 病毒性病原的檢測

采用膠體金試紙條法分別檢測豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、冠狀病毒及豬流行性腹瀉病毒4種病毒性病原。結果顯示，從采集病料組織樣品中豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、冠狀病毒及豬流行性腹瀉病毒4種病毒性病的抗原檢測為陰性。

2.2 細菌分離和培養

從采集病料組織樣品中分離到菌株SP-1株，在XLD 培養基和SS培養基均生長出典型的菌落，革蘭氏染色鏡檢可見SP-1株為多形性的陰性菌。與《伯杰氏系統細菌學手冊》中報道的奇異變形桿菌的培養特性及形態學基本一致。

2.3 細菌生化鑒定

通過細菌生化試驗鑒定，SP-1株的生化鑒定與《伯杰氏系統細菌學手冊》中報道的奇異變形桿菌的生化特性基本一致，SP-1株判定為奇異變形桿菌。

2.4 致病性試驗

攻毒的小鼠在攻毒后的2～6 d出現發病與死亡，剖檢死亡的小鼠可見肺臟、肝臟、脾臟及腸道出血腫大，從死亡的小鼠體內分離得到的奇異變形桿菌，直到試驗結束（7 d），對照組的小鼠健康存活。SP-1株對小鼠死亡率為60%。

2.5 耐藥性分析結果

采用K-B藥敏紙片法檢測SP-1株對臨床中常用的18種抗菌藥物的耐藥性。由表1可知，SP-1株對青霉素、阿莫西林、氨芐西林等6種抗菌藥耐藥性較高；對頭孢噻呋、恩諾沙星等4種抗菌藥物高度敏感，對大觀霉素、氟苯尼考中敏。

3 討論

奇異變形桿菌也是臨床中常見的食源性病原菌之一，可以通過多種途徑引起人食物中毒，導致嚴重腹瀉敗血癥等，該菌可以通過食源性傳播及人與動物之間傳播，成為臨床中常見的人獸共患的病原體[6]。近幾年，國內關于奇異變形桿菌引起仔豬腹瀉的報道越來越多。

本試驗研究表明，從合肥地區規模化養殖場采集16日齡因腹瀉死亡仔豬的肛拭子、血液及肝臟等病料組織中豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、冠狀病毒及豬流行性腹瀉病毒4種病毒性病原抗原檢測為陰性，且分離得到1株奇異變形桿菌，并命名為SP-1株，它能引起小鼠死亡，死亡率為60%。說明奇異變形桿菌可能是引起16日齡仔豬腹瀉主要病原菌之一，奇異變形桿菌對仔豬的危害逐漸增加，可能存在潛在威脅，應該引起重視。相關研究表明，奇異變形桿菌對抗菌藥物產生了嚴重的耐藥性，尤其對氟喹諾酮類、β-內酰胺類等多類藥物產生嚴重的耐藥性[7]。本試驗研究表明，SP-1株對青霉素、阿莫西林、氨芐西林等6種抗菌藥耐藥性較高；對頭孢噻呋、恩諾沙星等4種抗菌藥物高度敏感，對大觀霉素、氟苯尼考中敏。因此，在臨床中治療仔豬腹瀉奇異變形桿菌時應該合理使用抗菌藥物，同時配合豬場環境消毒，提高仔豬奇異變形桿菌病治療效果。本研究為該地區致仔豬腹瀉奇異變形桿菌的流行病學調查和防控提供參考。■

參考文獻：

[1] 賴寶色，林秋敏.規模化豬場仔豬腹瀉的原因及防治措施[J].畜禽業，2023，

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[2] 韓鋒，杜森有，薛文禮等.陜西延安市規模化豬場腹瀉性疾病調查與探析[J].現代畜牧科技，2023（9）：40-44.

[3] 楊佳欣，王遠微.一株藏豬源奇異變形桿菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].四川畜牧獸醫，2023，50（8）：26-29.

[4] 陳赫威，馬玲，秦樹英，等.產AmpC酶的豬源奇異變形桿菌分離鑒定及生物學特性分析[J].畜牧與獸醫，2023，55（7）：46-52.

[5] 趙政.斷奶仔豬奇異變形桿菌病的診治[J].獸醫導刊，2021（21）：32-33.

[6] 李元鳳，敖翔，范明東.妊娠后期母豬飼糧添加納米硒和甘草提取物對母豬繁殖性能和后代IUGR仔豬生長性能的影響[J].養豬，2022（5）：10-12.

[7] 胡延波，車麗妍，王超男，等.新疆某養殖場腹瀉仔豬奇異變形桿菌的分離鑒定、藥物敏感性試驗及毒力基因檢測[J].畜牧與飼料科學，2023，44（3）：116-121.

收稿日期：2023-10-08

作者簡介：何雯雯（1988.10— ），女，安徽蕪湖人，碩士，獸醫師，研究方向：預防獸醫。