新疆哈密地區牛消化道病原菌分離鑒定與耐藥性分析

摘要：為了分析新疆哈密地區規模化養殖場及散養戶中牛消化道病原的流行分布情況及耐藥性情況。對2021—2023年采集規模化養殖場及散養戶中不同階段的患腹瀉牛的肛拭子、糞便、肝臟及腎臟等病料組織349份，采用細菌分離鑒定、形態學觀察、生化鑒定等方法進行大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿菌等細菌性病原菌的分離鑒定，采用K-B藥敏紙片法檢測臨床分離菌株對臨床常用藥物的耐藥情況。結果顯示：從349份病料樣品中分離到了大腸桿菌40株（12.2%）、沙門菌39株（11.5%）、奇異變形桿菌26株（7.8%）、空腸彎曲桿菌21株（6.0%）；分離的致牛腹瀉的大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿菌均對頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考等7種藥物敏感，對其他藥物耐藥。本研究為該地區規模化養殖場及散養戶中牛腹瀉病的防控及合理指導臨床用藥提供參考。

關鍵詞：牛；消化道病原菌；分離鑒定；藥敏試驗

在奶牛、肉牛的養殖過程中，其中消化道疾病中腹瀉病已經成為臨床中重要的及常見的疾病之一，經過統計在規模化養殖場及散養戶中牛的細菌性腹瀉發病率一直有增無減。引起牛腹瀉疾病的因素復雜，各個階段牛容易感染，腹瀉病尤其對犢牛危害較嚴重，經過統計犢牛腹瀉的發病率高達80%，其死亡率高達50%，嚴重影響我國養牛的發展 [1-2]。相關研究表明，引起牛腹瀉病的因素很多，臨床中以傳染性因素較為常見，主要包括病毒、細菌、寄生蟲等病原菌會引起牛的腹瀉性疾病，還有一些環境因素，其中病原菌是引起牛腹瀉最為常見的因素之一[3-4]。引起牛細菌性腹瀉的病原主要有大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌、奇異變形桿菌、巴氏桿菌、鏈球菌等 [5-6]。目前，臨床中牛細菌性腹瀉主要通過抗生素進行預防與治療，隨著抗生素的不合理使用，導致其多種牛細菌性腹瀉疾病產生嚴重的耐藥性，且出現多種耐藥菌株，嚴重降低其多種抗菌藥物的治療效果，同時導致藥物殘留問題，嚴重危害著人們的健康[7]。

本試驗對2021—2023年采集自規模化養殖場及散養戶中不同階段的患腹瀉牛的肛拭子、糞便、肝臟及腎臟等病料組織349份進行大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿菌的分離鑒定，并測定其細菌性病原菌的耐藥性，為該地區規模化養殖場及散養戶中牛細菌性腹瀉病的防控及合理指導臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 病理來源

2021—2023年采集自新疆哈密地區規模化養殖場及散養戶中不同階段的患腹瀉牛的肛拭子、糞便、肝臟及腎臟等病料組織349份。

1.2 細菌分離與培養

對采集的病料組織編號，在無菌的條件接種到增菌液中37 ℃振蕩培養8～12 h后，分別接種于大腸桿菌顯色培養基、沙門菌顯色培養基、改良CCD瓊脂基礎培養基和XLD培養基，分別在37 ℃培養條件下鑒別培養12～18 h后，在無菌條件下，挑取4種不同鑒別培養基的單個典型的菌落，參照說明書進行革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察其形態學結構。

1.3 生化試驗鑒定

參照革蘭氏陰性菌生化鑒定試劑盒，將疑似大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌分別接種于營養肉湯中培養，并調整菌液濃度為0.5～1個麥氏濁度，在無菌的條件下，分別接種于革蘭氏陰性菌試劑，37 ℃培養12～18 h后觀察的生化試驗結果。

1.4 藥敏試驗

將臨床分離的大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌菌株進行編號，分別接種于營養肉湯中培養，并調整菌液濃度為0.5～1個麥氏濁度。參照美國臨床實驗室標準化協會（CLSI）2013年推薦的藥敏試驗法標準進行藥敏試驗和結果判定。

2 結果

2.1 細菌分離培養

疑似大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌菌株分離菌株分別在大腸桿菌顯色培養基、沙門菌顯色培養基、改良CCD瓊脂基礎培養基和XLD培養基上長出典型的菌落形態，在顯微鏡下觀察到典型的形態學特征，結果顯示與《伯杰細菌鑒定手冊》表述的大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌菌株培養特性和形態學基本上一致。

2.2 細菌生化試驗

參照革蘭氏陰性菌試劑盒說明書，對分離菌株進行生化試驗結果顯示，分離菌株分別被鑒定大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌菌株。結果如表1可知，分離到得大腸桿菌40株（12.2%）、沙門菌39株（11.5%）、奇異變形桿菌26株（7.8%）、空腸彎曲桿菌21株（6.0%），其中大腸桿菌和沙門菌檢出率較高，說明新疆哈密地區規模化養殖場及散養戶中以大腸桿菌和沙門菌感染引起的牛腹瀉性疾病。

2.3 藥敏試驗

對臨床中分離的致牛腹瀉的大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌4種病原菌進行藥敏試驗并分析其耐藥性，結果由表2可知：分離的致牛腹瀉的大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌均對頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考、多西環素、恩諾沙星、環丙沙星、林可霉素等7種藥物敏感，致牛腹瀉的大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌均對阿莫西林、氨芐西林、新霉素、慶大霉素、鏈霉素、大觀霉素7種藥物耐藥。說明臨床分離的致牛腹瀉的大腸桿菌、沙門菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌對臨床中常用的藥物產生不同的耐藥性。

3 討論

國內外研究表明，在養牛過程中，牛的細菌性消化道疾病成為臨床中常見的疾病之一，尤其是牛的細菌性腹瀉，經過統計在不同階段的牛細菌性腹瀉的發病率在50%～80%之間，細菌性腹瀉尤其對犢牛的危害比較大，尤其是犢牛的大腸桿菌病和沙門菌病感染率和死亡率均較高，細菌性腹瀉如多殺性巴氏桿菌、奇異變形桿菌及空腸彎曲桿菌等病原引起的犢牛腹瀉也有發生，牛的腹瀉性疾病給養牛生產造成了較大的經濟損失，嚴重影響我國奶牛及肉牛養殖業的發展[4-7]。在養牛過程中牛的細菌性腹瀉疾病與養殖環境（衛生狀況、消毒不均衡）具有一定相關性，尤其是當外界環境改變時牛抵抗力下降，外界環境中細菌容易侵入牛的體內在腸道中定植，引起發病，因此控制養殖環境的衛生具有重要意義[8-9]。本試驗研究表明，從349份病料樣品中分離到了大腸桿菌40株（12.2%）、沙門菌39株（11.5%）、奇異變形桿菌26株（7.8%）、空腸彎曲桿菌21株（6.0%），說明4種病原菌是引起該地區牛腹瀉性疾病的主要病原菌。因此，在牛養殖過程中，加強飼養管理消除誘因，減少牛細菌性腹瀉的發生與流行。本試驗耐藥性試驗結果表明，分離的致牛腹瀉的大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲桿菌及奇異變形桿菌均對頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考等7種藥物敏感，對其他藥物耐藥。因此，在臨床治療牛細菌性腹瀉疾病時應該根據藥敏試驗結果進行選擇敏感的藥物交替使用，同時加強飼養管理，注意環境的消毒，對牛細菌性腹瀉疾病進行有效防控和合理臨床用藥。■

參考文獻：

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[2] 趙麗媛，鄒明，原磊，等.引起犢牛腹瀉的病原及其檢測方法[J].中國動物檢疫，2023，40（5）：73-81.

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[9] 張歡，胡朝輝，勾耀鵬，等.4株致病性大腸桿菌致犢牛腹瀉的分離鑒定及毒力與耐藥性分析[J].中國乳業，2022（12）：77-81.

收稿日期：2023-06-29

作者簡介：蘇金鵬（1985— ），新疆巴里坤人，本科，高級獸醫師，研究方向：畜牧獸醫。