2023年湖南部分地區(qū)豬場CSFV、PRRSV、PRV的抗體檢測與分析

摘要：為研究我國湖南部分地區(qū)豬場豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）和豬偽狂犬病（PR）的疫苗免疫狀況和病毒感染狀況，2023年上半年，對湖南不同豬場隨機采集的221份血清樣品，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）分別對該三種疫病進行抗體檢測。結(jié)果表明，CSF、PR的免疫情況較好，抗體陽性率均高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%的標準；豬瘟病毒（CSFV）平均抗體陽性率為89.1%；豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）平均抗體陽性率為65.2%；豬偽狂犬病毒（PRV）gB的抗體陽性率為87.3%、gE的抗體陽性率為10.4%，存在野毒感染的情況；綜上所述，建議定期合理地對豬群進行抗體檢測，并通過檢測結(jié)果來調(diào)整免疫程序，進而提高豬群疫病的防控水平。

關(guān)鍵詞：抗體檢測；豬瘟；豬繁殖與呼吸障礙綜合征；豬偽狂犬病

豬瘟（CSF），是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起豬的一種以高熱和出血為主要癥狀的重要傳染病，其暴發(fā)時嚴重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[1]，已被世界動物衛(wèi)生組織（WOAH）列為法定通報疾病[2]，目前應(yīng)對該病最好的方法是疫苗免疫。豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS），又稱豬藍耳病，是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種高度傳染性疾病，主要引起豬呼吸道疾病和母豬流產(chǎn)[3]，該病于1987年首先暴發(fā)于美國，隨后在歐洲國家相繼暴發(fā)，我國于1996年在國內(nèi)首次分離到PRRSV并命名為CH-1a株[4]；此外近年也有研究結(jié)果表明，國內(nèi)毒株的基因重組進一步加劇了PRRSV的防控難度[5-6]。豬偽狂犬病（PR），是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，其臨床癥狀常表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎等；公豬生殖衰竭；育肥豬生長停滯；仔豬表現(xiàn)嚴重的神經(jīng)癥狀及腹瀉等癥狀。2011年東北地區(qū)規(guī)模化疫苗免疫場暴發(fā)的高致病性PRV突變毒株使其又在國內(nèi)豬群中呈流行趨勢[7]，給國內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失及新的挑戰(zhàn)。

為了解2023年上半年湖南部分地區(qū)CSFV、PRRSV、PRV免疫抗體水平，本試驗采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）抗體檢測試劑盒對湖南4個地區(qū)（瀏陽、株洲、邵陽、婁底）的中小型豬場的221份血清樣品進行抗體檢測及分析，以期為湖南部分地區(qū)豬場疫病防控工作提供參考。

1 材料與方法

1.1" 材料

1）樣品來源。2023年上半年分別對湖南4個地區(qū)（瀏陽、株洲、邵陽、婁底）中小型豬場隨機采集221份血液樣品，樣品主要以懷孕中期母豬為主。待血液樣品凝固后吸取血清5 000 r/min離心2 min進一步分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2）主要試劑。CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE抗體檢測試劑盒，均為北京金諾診斷（金諾百泰生物科技有限公司）。

3）主要儀器。酶標儀，型號Infinite？誖 200 PRO，瑞士帝肯集團公司；高速離心機，型號5424，德國Eppendoft；移液器，德國Eppendoft；微孔板恒溫振蕩器，型號Leopard 70-2A，普萊特科學(xué)儀器（北京）有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號SPX-250BIII，天津泰斯特。

1.2 方法

1）三種病毒Elisa抗體檢測及結(jié)果判定。按照CSFV、PRRSV、PRV-gE 和 PRV-gB 病毒抗體檢測試劑盒說明書進行操作。基本操作過程如下：加入稀釋血清、陰性血清和陽性血清孵育→洗滌→加入酶標抗體孵育→洗滌→加入底物孵育→加入終止液→ OD 值測定與分析。3種病毒抗體檢測結(jié)果按說明書標準判定（表 1）。注意所有檢測試劑盒組分在使用前需恢復(fù)至 18～25 ℃條件下操作。

2 結(jié)果

2.1 總體檢測情況

在采集的湖南省四個市州共221份樣品中，CSFV抗體陽性率為89.1%，變異系數(shù)為0.32%，免疫水平較高且抗體水平整齊度高，達到國家規(guī)定的免疫標準免疫（抗體合格率保持在70%以上）；PRRSV抗體陽性率為65.2%，變異系數(shù)為0.91%，免疫水平較差，未達到國家規(guī)定的免疫標準；PRV-gB的陽性率為87.3%，變異系數(shù)1.15%，免疫效果較好但整齊度不高；PRV-gE抗體陽性率為10.4%，其結(jié)果表明該地區(qū)存在一定的野毒感染。具體結(jié)果見表2。

2.2 不同病原抗體檢測情況

1）CSFV抗體檢測結(jié)果。CSFV不同地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果（表3）表明：湖南瀏陽、株洲、邵陽、婁底在四個地區(qū)中抗體陽性率最高為婁底94.7%，最低為瀏陽78.6%，其結(jié)果表明，湖南部分地區(qū)CSF抗體陽性率均在70%以上，且變異系數(shù)較低，總體免疫狀態(tài)良好。

2）PRRSV抗體檢測結(jié)果。PRRSV不同地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果（表4）表明：湖南四個地區(qū)的PRRSV免疫水平差異較大且只有邵陽地區(qū)符合國家規(guī)定免疫標準，其余三個地區(qū)免疫效果均未達到免疫標準，免疫水平較低，其中株洲地區(qū)抗體合格率不到50%。

3）PRV抗體檢測結(jié)果。PRV不同地區(qū)統(tǒng)計結(jié)果（表5、表6）表明：婁底市PRV-gB抗體陽性率最高，為95.7%；其次是株洲、邵陽和瀏陽。同時株洲、邵陽、婁底地區(qū)存在一定比例的PRV-gE抗體陽性，提示存在一定程度的野毒感染。

3 討論

根據(jù)中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定的《國家動物疫病強制免疫計劃》的相關(guān)規(guī)定，存欄豬群體免疫密度應(yīng)保持在90%以上，且同時抗體陽性率≥70%判定為合格。CSF、PRRS、PR作為豬場基礎(chǔ)免疫指標，其免疫效果關(guān)乎整個豬群的健康狀況和生產(chǎn)效益，目前由于該三類疫病的商品化疫苗眾多，進而導(dǎo)致不同地區(qū)不同豬場的免疫效果存在較大差異，因此通過血清學(xué)技術(shù)第一時間掌握豬群抗體水平并制定相應(yīng)措施，對這三類疫病的防控甚至凈化具有重要的生產(chǎn)意義。

通過本次調(diào)查對于湖南省部分地區(qū)2023年2—4月CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE的血清檢測結(jié)果顯示，其抗體陽性率分別為89.1%、65.2%、87.3%、10.4%。

本次調(diào)查的CSFV抗體結(jié)果表明湖南各地區(qū)CSFV抗體陽性率均在70%以上，婁底地區(qū)陽性率達到94.7%，各地區(qū)免疫效果較好且群體抗體水平整齊度高。近年來，我國市場上已有60余家企業(yè)獲得豬瘟疫苗的政府生產(chǎn)批文[8]，隨著CSFV疫苗的迭代創(chuàng)新，疫苗具有更高的安全性和穩(wěn)定性，這可能是大部分豬場CSFV免疫抗體相比于其他疫病抗體合格率高的原因，如于浩洋[9]于2017—2018年調(diào)查了湖南部分地區(qū)CSFV抗體陽性率為82.2%，張振興等[10]調(diào)查了云南2016—2020年云南部分地區(qū)五年來CSFV抗體陽性率為88.23%，孫建宏等[11]對2021—2022年規(guī)模化豬場主要疫病抗體進行統(tǒng)計CSFV抗體陽性率為93.74%，根據(jù)以上調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)2018年后CSFV血清抗體陽性率有逐年上升的趨勢，一方面原因可能是2018年新型豬瘟基因工程亞單位疫苗相繼研究成功并開始推廣使用[12]，另一方面可能是2018年我國發(fā)生非洲豬瘟，豬場加大了生物安全防控措施的執(zhí)行力度。

本次調(diào)查經(jīng)ELISA檢測PRRSV血清樣本共221份，總體抗體陽性率僅65.2%，且變異系數(shù)高，群體免疫效果差，從不同區(qū)域?qū)Ρ葋砜矗渲兄挥猩坳柕貐^(qū)抗體合格率達標陽性率為82.3%，株洲地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征陽性率最低，導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因一方面可能是環(huán)境中存在PRRSV野毒，使免疫PRRSV 疫苗產(chǎn)生的保護性抗體與PRRSV野毒發(fā)生了中和，進而導(dǎo)致整個抗體水平偏低，另一方面可能與采樣的隨機性有關(guān)。目前各地區(qū)豬場逐漸重視藍耳病的生物安全防控，并通過抗體檢測結(jié)果采取相應(yīng)的應(yīng)對措施降低損失提高生產(chǎn)效益[13-15]。

本次調(diào)查PRV-gB血清樣本陽性率為87.3%，其中陽性率最高的地區(qū)為婁底，其次為株洲、邵陽、瀏陽，陽性率分別為94.7%、91.9%、77.45%和75%，同時除瀏陽外，其他三個地區(qū)均檢測到不同程度的PRV-gE抗體，提示該地區(qū)存在野毒感染，分析該結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野毒感染的陽性率與疫苗抗體的陽性率的高低趨勢相類似，造成這樣的原因可能是PRV疫苗與PRV野毒均能使PRV-gB抗體的滴度升高，同時這也說明即使存在較高的gB抗體也不能完全保護豬群免受野毒感染，這也與段群鵬[16]和李海琴[17]調(diào)查的結(jié)果類似。通過本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，即便是存在高滴度疫苗抗體，也會存在野毒感染的情況，說明PRV在豬群中普遍存在，因此對PRV的防控甚至凈化，還需要完善生物防控體系，同時使用對豬群使用保健產(chǎn)品以提高豬群非特異性免疫配合gE基因缺失苗及時淘汰感染豬以達到凈化PRV的目的。■

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收稿日期：2023-10-07

基金項目：生豬重大疫病快速流動檢測體系建立和應(yīng)用（2021-RD20）。

作者簡介：范方程（1998.06— ），男，碩士，研究方向：獸醫(yī)傳染病診斷與防控。E-mail：fanfangcheng1998@126.com。

*通信作者：劉進輝（1968.09— ），男，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：獸藥創(chuàng)制與臨床應(yīng)用，動物疾病綜合防控與保健飼養(yǎng)。E-mail：13974803880@163.com。