奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定與耐藥性分析

摘要：為了分析某地區規模奶牛場中引起奶乳房炎病原菌的分布情況及耐藥性情況。于2022-2023年跟蹤采集某地區規模奶牛場中，疑似患奶牛乳房炎的乳汁樣品197份，對采集的樣品進行細菌（大腸桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌）分離鑒定，采用K-B藥敏紙片法分別檢測奶牛乳房炎病原菌對臨床中抗菌藥物的耐藥情況。結果顯示：從197份樣品中分離得到病原菌68株（34.5%），其中，大腸桿菌23株（11.7%）、金黃色葡萄球菌20株（10.2%）、鏈球菌15株（7.6%）和腸球菌10株（5.1%）；總體來看，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率較高。藥敏試驗結果顯示，分離得到的大腸桿菌、腸球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、氟苯尼考等7種藥物敏感；分離得到的金黃色葡萄球菌、鏈球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、阿莫西林等8種藥物敏感。結果表明：引起該地區奶牛發生乳房炎的主要病原菌為大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，且該類菌對頭孢類抗菌藥物較為敏感，為該地區規模奶牛場中乳房炎病綜合防控及合理指導臨床用藥提供參考。

關鍵詞：奶牛；乳房炎；病原菌；分離鑒定；藥敏試驗

在奶牛的養殖過程中隱性乳房炎常不表現典型的臨床癥狀，因不易診斷而往往被忽視，常導致產奶量下降和嚴重影響牛乳品質，給奶牛養殖業造成嚴重經濟損失，影響奶牛養殖業的健康發展[1-3]。相關研究表明，奶牛的乳房炎在不同國家地區養殖場內均有流行，在中國隱性乳房炎的發病率在7%～95%之間，嚴重可以轉化為臨床性乳房炎，且呈現上升的趨勢[4-5]。目前，在我國不同養殖場中引起細菌性乳房炎的病原菌主要有金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷白桿菌、鏈球菌、腸球菌、化膿棒狀桿菌等[6-7]。目前，在奶牛養殖過程中細菌性奶牛乳房炎主要通過抗菌藥物進行治療，且耐藥性菌株不斷地出現，嚴重降低其治療效果，同時引起藥物在生鮮乳中殘留問題，嚴重危害著人們的健康和生物安全[8]。

本試驗于2022—2023年跟蹤采集某地區規模化牛場中疑似患奶牛乳房炎的乳汁樣品197份，進行相關病原菌（大腸桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌等）分離鑒定，并測定其耐藥性，旨在為該地區規模奶牛場中奶牛乳房炎的預防及臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1病理來源

2022—2023年采集某地區規模奶牛場中疑似患奶牛乳房炎的乳汁樣品197份。

1.2 細菌分離與培養

對采集的197份乳汁樣品進行編號分裝，按照1：100比例加入含有5%犢牛血清普通營養肉湯中，在37 ℃恒溫培養振蕩培養8～12 h增菌后，在超凈工作臺中分別取增菌培養液分區劃線接種大腸桿菌顯色培養基、鏈球菌顯色培養基、金黃色葡萄球菌顯色培養基及哥倫比亞血培養基，分別在37 ℃培養條件下鑒別培養12～18 h后，挑取大腸桿菌顯色培養基、鏈球菌顯色培養基、金黃色葡萄球菌顯色培養基及哥倫比亞血培養基不同鑒別培養基上典型的菌落進行革蘭氏染色，觀察其細菌形態。

1.3 生化試驗鑒定

參照革蘭氏陰性和陽性菌的生化鑒定試劑說明書，分別接種于陰性和陽性菌的生化鑒定試劑盒中在37 ℃條件下恒溫培養12～18 h后，參照說明書對分離菌株的生化特性進行比對。

1.4 藥敏試驗

將1.3中分離菌株的對數期菌液，用無菌的營養肉湯調整菌液濃度為0.5～1個麥氏濁度，參照美國臨床實驗室標準化協會（CLSI）2013年推薦的藥敏試驗法標準進行藥敏試驗和結果判定。

2 結果

2.1 細菌分離培養

疑似分離得到的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌菌株的培養特性與形態學與《伯杰細菌鑒定手冊》報道的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌培養特性和形態學基本上一致。

2.2 細菌生化試驗

分離菌株的生化試驗鑒定結果顯示，分離菌株分別被鑒定大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌，與《伯杰細菌鑒定手冊》報道的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌生化特性基本上一致。結果如表1可知，從197份樣品中分離得到68株病原菌（34.5%），其中23株大腸桿菌（11.7%）、20株金黃色葡萄球菌（10.2%）、15株鏈球菌（7.6%）和10株腸球菌（5.1%），其中，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率較高。

2.3 藥敏試驗

采用K-B藥敏紙片法對臨床中分離的4種奶牛乳房炎源病原菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌）進行藥敏試驗并分析其耐藥性，結果由表2可知，分離大腸桿菌、腸球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、氟苯尼考等7種藥物敏感，分離的金黃色葡萄球菌、鏈球菌對頭孢噻呋、頭孢喹肟、阿莫西林等8種藥物敏感，對其他藥物耐藥；說明臨床分離的4種奶牛乳房炎源病原菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌）對臨床中常用的藥物表現出不同的耐藥性。

3 討論

目前，我國不同地區養殖場中的奶牛乳房炎發病率較高，尤其是隱性的乳房炎對奶牛的危害較高，給養牛生產中造成了較大的經濟損失，嚴重影響我國養牛業的發展[3-5]。奶牛細菌性乳房炎發病率與奶牛的養殖環境具有一定相關性，在擠奶過程中感染環境中的病原菌通過乳房管進入乳房內并在乳房中定值，引起乳房炎。因此，在奶牛養殖過程中有效地控制奶牛養殖環境中的衛生，在減少奶牛細菌性乳房炎相關疾病具有重要意義[7-9]。本試驗研究表明，從197份樣品中分離得到68株病原菌（34.5%），其中23株大腸桿菌（11.7%）、20株金黃色葡萄球菌（10.2%）、15株鏈球菌（7.6%）和10株腸球菌（5.1%），總體表現為大腸桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率較高，說明大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌4種病原菌是該地區引起奶牛乳房炎的主要病原菌。本試驗耐藥性試驗結果表明，分離得到的大腸桿菌、腸球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、氟苯尼考等7種藥物敏感，分離得到的金黃色葡萄球菌、鏈球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、阿莫西林等8種藥物敏感，對其他藥物耐藥。因此，在臨床治療細菌性奶牛乳房炎時，應該根據藥敏試驗合理選擇藥物與使用藥物，注意環境的消毒，提高細菌性奶牛乳房炎治療效果。

4 結論

通過對某地區規模奶牛場中疑似患乳房炎的奶牛進行采樣檢測，從采集的197份乳汁樣品中，分離得到68株病原菌，檢出率占34.5%。其中，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌占比較高，說明這2種病原菌是引起該地區奶牛發生乳房炎的主要病原。對檢出的病原菌進行藥敏試驗，發現頭孢類抗菌藥較為敏感。建議在生產實際中，通過強化產后護理、規范擠奶程序、加強飼養管理等措施進行預防，出現臨床病例及時對癥治療。■

參考文獻：

[1] 趙勝楠，郭亞男，閆背背，等.寧夏地區某規模化奶牛場泌乳奶牛急性乳房炎病原的分離及耐藥性分析[J].黑龍江畜牧獸醫，2023（16）：77-82+87.

[2] 高鷹，苑雙杰，余永濤.奶牛乳房炎主要致病菌PCR檢測分析[J].現代畜牧科技，2023（8）：32-35.

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[7] 達舉云，宋倩，史金蓮，等.銀川某牛場牛源金黃色葡萄球菌的耐藥性分析及毒力基因檢測[J].動物醫學進展，2023，44（6）：33-40.

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[9] 尹金花，李玫毅，吳興，等.新疆某牛場奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定和耐藥性分析[J].中國獸醫雜志，2023，59（5）：86-90.

收稿日期：2023-10-21

基金項目：甘肅省奶牛健康養殖與主要疫病防控技術集成應用（GNKJ-2023-12）；張掖市畜禽規模養殖場動物疫病凈化關鍵技術集成和應用（GNKJ-2023-31）。

作者簡介：麗娜（1987.10— ），女，甘肅高臺人，畜牧師，本科學歷，研究方向：畜牧獸醫學。

*通信作者：張學虎（1987.01— ），甘肅甘州人，碩士研究生學歷，高級獸醫師，研究方向為預防獸醫學，主要從事動物疫病防控及技術推廣工作。