芪術方對高脂高果糖高膽固醇誘導的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的影響及其機制

摘要：目的探討芪術方對非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）小鼠模型的療效及作用機制。方法60只雄性C57BL/6J小鼠隨機分為正常組，模型組，芪術方低（4.75 g/kg）、中（9.50 g/kg）、高劑量組（19.00 g/kg），多唏磷脂酰膽堿組（磷脂組）（228 mg/kg），每組10只。高脂高膽固醇飼料和20%果糖水造模16周后，各組給予相應藥物干預，每天給藥1次，連續8周。檢測血清ALT、AST、TC、TG、LDL；酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測血清游離脂肪酸（FFA）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）；蘇木素-伊紅（HE）和油紅O染色觀察肝組織病理變化；蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測微管相關蛋白輕鏈3B（LC3BⅡ/Ⅰ）、螯合體（p62/SQSTM1）、Beclin-1、動力相關蛋白1（Drp1）表達。實時熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測Drp1、Beclin-1、p62/SQSTM1 mRNA表達水平。計量資料多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。結果與正常組比較，模型組血清TG、TC、ALT、AST、LDL、FFA、TNF-α、IL-1β、MDA水平均升高，SOD水平降低（P值均lt;0.05）。HE染色結果顯示，模型組小鼠肝組織可見肝細胞脂肪變及大量脂肪空泡；油紅O染色結果顯示，模型組小鼠肝細胞內有大量大小不一紅色脂滴沉積，油紅O染色面積百分比較正常組升高（Plt;0.05）。Real-time PCR結果顯示，與正常組比較，模型組肝組織中Drp1、Beclin-1 mRNA升高，p62/SQSTM1 mRNA降低（P值均lt;0.05）。Western Blot結果顯示，與正常組比較，模型組肝組織中Drp1、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表達水平升高，p62/SQSTM1蛋白表達水平降低（P值均lt;0.05）。與模型組比較，部分劑量芪術方組和磷脂組血清TG、TC、ALT、AST、LDL、FFA、TNF-α、IL-1β、MDA水平均降低，SOD水平升高（P值均lt;0.05）。與模型組比較，各用藥組肝組織脂肪變改善明顯，且油紅O染色面積百分比降低（P值均lt;0.05）；Drp1、Beclin-1 mRNA降低，p62/SQSTM1 mRNA升高（P值均lt;0.05）；Drp1、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表達水平降低，部分用藥組p62/SQSTM1蛋白表達水平升高（P值均lt;0.05），且芪術方中、高劑量效果更明顯（P值均lt;0.01）。結論芪術方改善NAFLD小鼠肝脂質代謝及炎癥水平可能與調控肝細胞線粒體自噬有關。

關鍵詞：非酒精性脂肪性肝病；芪術方；線粒體自噬；脂質代謝；炎癥

基金項目：上海市2021年度“科技創新行動計劃”生物醫藥科技支撐專項（21S1900400）；安徽省自然科學基金（2308085MH293）；安徽省高校科學研究重大項目（2023AH040098）；安徽省衛生健康科研重點項目（AHWJ2023A10035）；國家中醫藥管理局高水平中醫藥重點學科建設項目（中醫肝膽病學）（zyyzdxk-2023060）

Effect of Qizhu prescription on a mouse model of non-alcoholic fatty liver disease incluced by high-fat，high-fructose，and high-cholesterol diet and its mechanism

CHEN Jiahao1a，ZHOU Zhenhua1b，2.（1.a.Cellular Immunity Laboratory，b.Department of Hepatology，Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China；2.Department of Hepatology，Anhui Hospital，Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230011，China）

Corresponding author：ZHOU Zhenhua，jinghua1220@163.com（ORCID：0000-0002-5639-3857）

Abstract：Objective To investigate the therapeutic effect and mechanism of action of Qizhu prescription in mice withnon-alcoholic fatty liver disease（NAFLD）.Methods A total of 60 male C57BL/6J mice were randomly divided into normal group，model group，low-dose Qizhu prescription group（4.75 g/kg），middle-dose Qizhu prescription group（9.50 g/kg），high-dose Qizhu prescription group（19.00 g/kg），Yishanfu group（228 mg/kg），with 10 mice in each group.After 16 weeks of modeling with a high-fat high-cholesterol diet and 20%fructose water，each group was given the corresponding drug once a day for 8 weeks.The serum levels of alanine aminotransferase（ALT），aspartate aminotransferase（AST），total cholesterol（TC），triglyceride（TG），and low-density lipoprotein（LDL）were measured；ELISA was used to measure the serum levels of free fatty acid（FFA），tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin-1β（IL-1β），superoxide dismutase（SOD），and malondialdehyde（MDA）；HE staining and oil red O staining were used to the pathological changes of liver tissue；Western blot was used to measure the protein expression levels of LC3BⅡ/Ⅰ，p62/SQSTM1，Beclin-1，and Drp1，and real-time PCR was used to measure the mRNA expression levels of Drp1，Beclin-1，and p62/SQSTM1.A one-way analysis of variance was used for comparison of continuous data between multiple groups，and the least significant difference t-test was used for further comparison between two groups.Results Compared with the normal group，the model groups had significant increases in the serum levels of TG，TC，ALT，AST，LDL，FFA，TNF-α，IL-1β，and MDA and a significant reduction in the serum level of SOD（Plt;0.05）.HE staining showed that the mice in the model group had hepatocyte steatosis and a large number of fat vacuoles in liver tissue，and oil red O staining showed that the mice in the model group had a large number of red lipid droplets of varying sizes in hepatocytes，with a significant increase in the percentage of oil red O staining area compared with the normal group（Plt;0.05）.Real-time PCR showed that compared with the normal group，the model group had significant increases in the mRNA expression levels of Drp1 and Beclin-1 and a significant reduction in the mRNA expression level of p62/SQSTM1 in liver tissue（all Plt;0.05），and Western blot showed that compared with the normal group，the model group had significant increases in the protein expression levels of Drp1，Beclin-1，and LC3BⅡ/Ⅰand a significant reduction in the protein expression level of p62/SQSTM1 in liver tissue（all Plt;0.05）.Compared with the model group，some Qizhu prescription groups and the Yishanfu group had significant reductions in the serum levels of TG，TC，ALT，AST，LDL，FFA，TNF-α，IL-1β，and MDA and a significant increase in the serum level of SOD（all Plt;0.05）.Compared with the model group，each administration group had a significant improvement in steatosis of liver tissue，a significant reduction in the percentage of oil red O staining area，significant reductions in the mRNA expression levels of Drp1 and Beclin-1，and a significant increase in the mRNA expression level of p62/SQSTM1（all Plt;0.05）；there were significant reductions in the protein expression levels of Drp1，Beclin-1，and LC3BⅡ/Ⅰ，while some administration groups had a significant increase in the protein expression level of p62/SQSTM1（all Plt;0.05），with a significantly better effect in the middle-and high-dose Qizhu prescription groups（all Plt;0.01）.Conclusion Qizhu prescription improves lipid metabolism and inflammation in mice with NAFLD possibly by regulating hepatocyte mitophagy.

Key words：Non-alcoholic Fatty Liver Disease；Qi Zhu Formula；Mitophagy；Lipid Metabolism；Inflammation

Research funding：Shanghai 2021“Science and Technology Innovation Action Plan”Biomedical Science and Technology Support Special Project（21S1900400）；Natural Science Foundation of Anhui Province（2308085MH293）；Key Scientific Research Project of Anhui Province（2023AH040098）；Health as a key project of scientific research in anhui province（AHWJ2023A10035）；The state administration of traditional Chinese medicine high level key discipline construction project of traditional Chinese medicine（TCM liver epidemiology）（zyyzdxk-2023060）

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是世界范圍內最常見的慢性肝病，在全球普通人群中的患病率高達38%［1-2］。因此，早期預防和阻斷NAFLD意義重大。

脂肪在肝臟中不斷沉積導致脂質代謝紊亂與脂肪酸氧化應激產生的炎癥因子共同構成NAFLD肝細胞損傷的主要病理環節［3］。肝脂質代謝紊亂可導致線粒體功能障礙，進而引起肝損傷。肝臟線粒體自噬在清除肝細胞受損線粒體，肝臟保護方面起著重要作用［4］。隨著中醫藥研究的不斷深入，中藥復方在減輕肝炎癥狀、改善肝功能、肝脂肪變性以及延緩肝纖維化等方面療效顯著［5］。已成為當前研究熱點。本課題組前期研究［6］表明，芪術方可減輕高脂高膽固醇飲食誘導的NASH小鼠肝損傷。為進一步探索其作用機制，本研究通過建立高脂高膽固醇高果糖飲食NAFLD小鼠模型，為芪術方的臨床運用提供更多實驗基礎。

1材料與方法

1.1實驗動物與飼料60只SPF級雄性C57BL/6J小鼠，6～8周齡，體質量20～25 g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，實驗動物生產許可證編號：SCXK（滬）2022-0004。實驗動物使用許可證編號：SCXK（滬）2020-0009。小鼠飼養于上海中醫藥大學實驗動物中心。溫度20～24℃、濕度45%～55%、12 h光暗周期。高脂高膽固醇飼料由江蘇省協同醫藥生物工程有限責任公司提供，許可證號：蘇飼證（2019）01008。果糖由南通特洛菲飼料科技有限公司提供。

1.2藥物組成與制備芪術方：生黃芪15 g（上海虹橋中藥飲片有限公司，220919）、虎杖9 g（上海康橋中藥飲片有限公司，221105）、杠板歸9 g、澤蘭9 g、蒼術9 g（上海萬仕誠藥業有限公司，20221006-1、20220923-1、20220821-1）、廣陳皮6 g（上海養和堂中藥飲片有限公司，2022092407）。

提取工藝：將所有飲片加入藥品體積12倍純水中浸泡1 h，煮沸后提取濾液，共提取3次，加熱濃縮至含生藥0.475、0.95、1.90 g/mL的濃縮液。將多唏磷脂酰膽堿（北京賽諾菲制藥有限公司，H20059010，CBJD471）溶于純水中，質量濃度為22.8 g/L，藥液于4℃冰箱存放備用。多唏磷脂酰膽堿及中藥飲片均購自上海中醫藥大學附屬曙光醫院，由王衛東主管藥師鑒定，符合2020年版《中華人民共和國藥典》標準。

1.3試劑ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix、Freezol Reagent RNA逆轉錄試劑盒、提取試劑盒（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，Q711-03、R223-01、R711-02）；PCR引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成；TNF-α、IL-1β、游離脂肪酸（FFA）（上海圓創生物科技有限公司，202308-M028、202308-M009、YCM4328）；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）（ELISA）試劑盒（上海威奧生物科技有限公司，ET0012M、ET0001M）；山羊抗兔免疫球蛋白（Ig）G（H+L）抗體、BCA蛋白濃度測定試劑盒、組織線粒體分離試劑盒、PMSF（上海碧云天生物技術有限公司，A0208、P0009-1、C3606、ST506）；LC3B抗體、p62/SQSTM1抗體、Beclin-1抗體（杭州華安生物技術有限公司，ET1701-65、HA721171、HA721216）、動力相關蛋白1（Drp1）、GAPDH、β-actin（武漢三鷹技術有限公司，12957-1-AP、60004-1-Ig、23660-1-AP）

1.4儀器QuantStudio 6 Pro型聚合酶鏈式反應（PCR）擴增儀、TSX600型?80℃超低溫冰箱（美國Thermo Scientific公司）；AMG-2201-023型全自動酶標儀（美國BioTek公司）；1658034型電泳轉膜儀ChemiDocMP型凝膠成像儀（美國Bio-Rad公司）；Centrifuge 5430R型臺式高速離心機（德國Eppendorf公司）。

1.5方法

1.5.1造模、分組及給藥60只C57BL/6J雄性小鼠于動物房適應性喂養1周后，隨機分為正常組（n=10）、模型組（n=10）和給藥組（n=40）。正常組小鼠予正常飼料和飲水，模型組和給藥組給予高脂高膽固醇飼料和20%果糖水［6-7］。造模16周后開始給藥，給藥組分為芪術方低、中、高劑量組、多唏磷脂酰膽堿組（磷脂組）。根據《中藥藥理實驗方法學》中人與小鼠藥物換算方式和本課題組前期研究［6］，得出芪術方低、中、高劑量組給藥劑量為4.75、9.50、19.00 g/kg，成人體質量（按60 kg計算）日服劑量的5、10、20倍，磷脂組給藥劑量為228 mg/kg（成人日服劑量的10倍）。第17周起，正常組和模型組每日給予純水灌胃，其余各組給予對應藥物灌胃，每日1次，持續8周。末次給藥后，腹腔注射1%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉小鼠，眼眶后靜脈叢取血收集血清和肝組織樣本。

1.5.2肝組織線粒體提取稱取新鮮肝臟100 mg，按說明書加入試劑勻漿。3 000 r/min，4℃，10 min離心后，將上清轉移至另一離心管中。12 000 r/min，4℃，10 min，沉淀即為線粒體。存放于?80℃冰箱備用。

1.5.3生化指標檢測血清委托上海中醫藥大學附屬曙光醫院檢驗科檢測肝功能及血脂。

1.5.4 HE染色固定好的肝組織石蠟包埋，切片，放入二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水；蘇木素、伊紅染色5 min，沖水后無水乙醇浸泡脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，鏡下觀察各組小鼠肝組織。

1.5.5油紅O染色冰凍切片復溫干燥后固定液浸泡15 min，純水洗后晾干；油紅染液浸染10 min后60%異丙醇分化，自來水沖洗；蘇木素染色，純水浸洗，甘油明膠封片劑封片；鏡下觀察各組小鼠肝脂質沉積。

1.5.6透射電鏡觀察肝組織超微結構將新鮮肝組織切至1 mm3，放入2.5%戊二醛中固定2 h，清洗3次后放入1%餓酸中固定，清洗3次后，梯度乙醇脫水，丙酮浸透后包埋，半薄定位切片后采用醋酸雙氧鈾-檸檬酸鉛雙染法染色，鏡下觀察肝組織超微結構。

1.5.7 ELISA法檢測炎癥因子、脂質代謝、氧化應激相關分子水平將存放于?80℃冰箱的血清取出，依據試劑盒說明書進行操作，檢測小鼠血清中TNF-α、IL-1β、FFA、MDA含量和SOD酶活力。

1.5.8實時熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測Drp1、p62/SQSTM1、Beclin-1 mRNA表達按照RNA提取試劑盒說明書提取肝組織RNA，用HiScriptⅡQ RT SuperMix for qPCR試劑盒進行逆轉錄合成cDNA。將cDNA與ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix混合后進行Real-time PCR擴增（反應條件參考說明書），以GAPDH為內參，采用相對定量2?ΔΔCt法進行分析。PCR引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司設計提供。序列見表1。

1.5.9 Western Blot檢測肝組織線粒體p62/SQSTM1、Drp1、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表達使用BCA法檢測線粒體蛋白濃度，配置蛋白樣品。上樣，電泳，轉膜，封閉。分別加入一抗p62/SQSTM1、Drp1、Beclin-1、LC3B（1∶1 000），4℃孵育過夜后TBST洗膜3次分別加入二抗GAPDH、β-actin（1∶5 000），室溫孵育1 h，TBST洗膜3次后ECL法顯影，凝膠成像系統拍攝。以β-Actin和GAPDH為內參，采用Image J進行蛋白質表達定量。

1.6統計學方法采用SPSS 25.0統計軟件進行數據分析。計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1芪術方對各組小鼠肝功能、血脂的影響與正常組相比，模型組小鼠AST、ALT、TC、TG、LDL水平均升高（P值均lt;0.05）。與模型組相比，各給藥組小鼠ALT、AST、TC、TG、LDL水平均降低（P值均lt;0.05）（表2）。

2.2芪術方對各組小鼠肝組織學變化的影響HE染色結果顯示：正常組小鼠肝小葉結構正常，肝細胞邊界清晰，無脂肪空泡；模型組小鼠充斥大量脂肪變，伴炎癥細胞浸潤，肝細胞氣球樣變；與模型組比較，各用藥組均有不同程度改善，其中芪術方中、高劑量組脂肪變顯著減輕（圖1）。油紅O染色結果顯示：正常組小鼠肝細胞無紅色脂滴；模型組小鼠干細胞內充斥大量形狀不規則紅色脂滴緊密排列，陽性面積較正常組明顯增加（Plt;0.05）；芪術方各劑量組干預后，較模型組顯著改善，其中芪術方中、高劑量組效果顯著（P值均lt;0.01）（圖2，表3）。

2.3芪術方對各組小鼠肝臟超微結構的影響正常組小鼠肝細胞形態正常，細胞內可見大量線粒體、內質網和少量微小脂滴。模型組可見受損肝細胞，大量脂滴，腫脹線粒體及自噬溶酶體。芪術方中、高劑量組與磷脂組細胞胞漿中脂質空泡減少，其中芪術方中、高劑量組中可見自噬小體（圖3）。

2.4芪術方對各組小鼠肝臟TNF-α、IL-1β、FFA、MDA及SOD的影響ELISA結果顯示，與正常組相比，模型組小鼠血清中TNF-α、IL-1β、FFA、MDA表達水平提高，SOD表達水平降低（P值均lt;0.05）；用藥組小鼠血清中TNF-α、IL-1β、MDA均有不同程度改善（P值均lt;0.05），IL-1β、FFA、MDA在芪術方中、高劑量組改善作用更為明顯（P值均lt;0.05），芪術方低、中、高劑量組的SOD酶活性較模型組顯著提高（P值均lt;0.05）（表4）。

2.5芪術方對各組小鼠肝組織Drp1、Beclin-1、p62/SQSTM1 mRNA的影響與正常組相較，模型組小鼠肝組織Drp1、Beclin-1 mRNA表達水平增加，p62/SQSTM1 mRNA表達水平降低（P值均lt;0.05）；與模型組相比，各用藥組Drp1、Beclin-1 mRNA表達水平減少，芪術方中、高劑量組p62/SQSTM1 mRNA表達水平增加（P值均lt;0.05）（表5）。

2.6芪術方對各組小鼠肝組織線粒體Drp1、Beclin-1、p62/SQSTM1、LC3B蛋白表達影響與正常組相比，模型組小鼠肝組織線粒體LC3BⅡ/Ⅰ比值、Drp1、Beclin-1蛋白表達水平明顯增加，p62/SQSTM1蛋白表達水平減少（P值均lt;0.05）；與模型組相比，各用藥組LC3BⅡ/Ⅰ比值、Drp1、Beclin-1蛋白表達水平降低，部分用藥組p62/SQSTM1蛋白表達水平上升（P值均lt;0.05），其中芪術方中、高劑量組作用更明顯（P值均lt;0.01）（圖4，表6）。

3討論

NAFLD患病率逐年上升，中醫藥治療NAFLD具有獨特優勢，芪術方是由上海中醫藥大學附屬曙光醫院肝病科研發治療NAFLD的有效驗方，臨床療效好，為進一步探索其作用機制，本實驗通過建立高脂高膽固醇高果糖NAFLD小鼠模型，采用不同劑量芪術方干預8周，結果表明，芪術方可顯著降低NAFLD小鼠血脂、血清FFA，改善肝功能，減輕肝臟病理損傷及炎癥反應。

NAFLD發病機制復雜，目前尚未完全闡明。隨著研究的深入，多重打擊學說被廣泛認可，其中炎癥、肝脂肪變性、線粒體功能障礙和脂質過氧化誘發氧化應激在NAFLD發病中起重要作用［8］。炎癥作為NAFLD的關鍵加速因子，能促進肝脂肪變性向肝纖維化進展［9］。本研究結果顯示，芪術方能減少NAFLD小鼠血清TNF-α、IL-1β、MDA，促進SOD表達，表明芪術方能減輕NAFLD肝臟炎癥。芪術方由生黃芪、虎杖、杠板歸、澤蘭、蒼術、廣陳皮組成。黃芪中主要活性成分黃芪甲苷對自噬可表現出不同的調控作用。在大鼠心肌再灌注損傷模型中，黃芪甲苷通過降低PINK1/Parkin信號通路表達，抑制線粒體自噬水平，發揮心肌細胞保護作用［10］。Su等［11］研究發現，黃芪甲苷上調PINK1線粒體自噬水平，改善糖尿病大鼠線粒體功能障礙。虎杖中的活性成分能夠改善胰島素抵抗、抗氧化應激、調節脂質代謝、改善內質網應激、減輕炎癥浸潤緩解NAFLD［12］。虎杖苷可下調ATF6表達抑制自噬改善NAFLD［13］。蒼術苷可促進AMPK活化，降低mTOR活性，誘導自噬體形成，從而加速肝臟中脂質降解［14］。陳皮中的主要成分川陳皮素除了具有抑制炎癥反應、抗腫瘤、改善代謝紊亂等藥理作用，也能促進自噬。線粒體自噬是一種發生在線粒體中的高度保守的自我消化過程［15］，介導受損線粒體的清除，是維持線粒體穩態的重要環節。線粒體自噬功能失調與多種肝臟疾病的發生發展密切相關［16］，是細胞為應對氧化應激、營養缺乏、衰老等外界刺激的重要防御機制［17］。Drp1作為線粒體分裂的關鍵調控因子，能夠激活線粒體自噬。Li等［18］研究表明，柴胡疏肝散可抑制Drp1介導的線粒體過度自噬增強消化不良大鼠胃動力。Drp1與LC3相互作用促進線粒體自噬。LC3作為線粒體自噬標志物，在線粒體自噬過程中發生泛素化，與自噬體的磷脂乙醇胺結合，在自噬體膜上形成LC3Ⅱ。LC3Ⅱ和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平在一定程度上反映了線粒體自噬水平［19］。p62/SQSTM1是一種特異性的線粒體吞噬底物，是參與選擇性自噬重要的接頭蛋白，對于泛素化聚集體的形成及運輸至關重要，能夠與LC3結合通過自噬選擇性降解，調節線粒體自噬活性，從而維持線粒體自噬穩態［20-21］。本研究發現NAFLD小鼠肝組織線粒體中Drp1表達增加，芪術方可抑制Drp1在肝組織線粒體中表達，調節自噬相關蛋白Beclin-1、p62/SQSTM1、LC3，電鏡中也觀察到模型組中線粒體數量減少，線粒體損傷明顯，可見自噬溶酶體；芪術方中、高劑量組可見自噬小體，線粒體嵴較為明顯，線粒體損傷緩解。因此，芪術方治療NAFLD的作用機制可能與調控Drp1介導的肝臟線粒體自噬相關。

綜上所述，芪術方能夠減輕NAFLD小鼠肝損傷，其機制與調控Drp1介導的肝臟線粒體自噬及減輕肝臟炎癥有關。然而，NAFLD引發肝臟線粒體自噬，以及進一步導致肝損傷的機制尚未完全了解，還有待進一步闡述。

倫理學聲明：本研究方案于2023年3月29日經由上海中醫藥大學實驗動物倫理委員會審批，批號：PZSHUTCM2304110001，符合實驗室動物管理與使用準則。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻聲明：陳佳豪負責動物相關實驗，數據統計及文章初稿；周振華負責擬定寫作思路，指導撰寫文章并最后定稿。

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收稿日期：2024-05-23；錄用日期：2024-07-11

本文編輯：王瑩

引證本文：CHEN JH， ZHOU ZH. Effect of Qizhu prescription on a mouse model of non-alcoholic fatty liver disease incluced by high-fat， high-fructose， and high-cholesterol diet and its mechanism[J]. J Clin Hepatol， 2024， 40（11）： 2205- 2212.

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