高亞硝酸鹽對加州鱸消化系統(tǒng)的影響

摘"要：為探究高亞硝酸鹽養(yǎng)殖環(huán)境對加州鱸（Micropterus salmoides）消化系統(tǒng)的影響，分別將高亞硝酸鹽（＞0.15 mg/L）和正常亞硝酸鹽（≤0.005 mg/L）水體養(yǎng)殖下加州鱸的肝臟、胃和腸道組織進行組織學觀察分析。結果顯示：高濃度的亞硝酸鹽養(yǎng)殖環(huán)境下，加州鱸肝臟和腸道組織結構會有顯著損傷，肝臟細胞核出現(xiàn)空泡化和腫大現(xiàn)象，腸道絨毛長度存在顯著差異（P＜0.05）。綜上所述，過高的亞硝酸鹽濃度會對加州鱸的消化系統(tǒng)產(chǎn)生顯著影響，在現(xiàn)有的養(yǎng)殖模式下，控制好亞硝酸鹽的濃度是提高魚類免疫的關鍵。

關鍵詞：加州鱸（Micropterus salmoides）；亞硝酸鹽；消化系統(tǒng)

加州鱸，學名大口黑鱸（Micropterus salmoides），屬硬骨魚綱、鱸形目、太陽魚科、黑鱸屬^[1]。與大多數(shù)肉食性魚類相似，大口黑鱸喜歡在溫度20～30 ℃的清澈水中生存，適宜的pH值為6.0～8.5，溶解氧≥4 mg/L^[2]。加州鱸是一種肉食性魚類，由于其肉質鮮美，營養(yǎng)豐富，深受消費者喜愛^[3]。但加州鱸因自身對糖類利用率不高，易形成脂肪肝，所以作為“先天的肝膽病患者”，再加上水環(huán)境，尤其是亞硝酸鹽的變化對加州鱸產(chǎn)生的應激影響，通過保肝來提高加州鱸產(chǎn)量，增強加州鱸免疫就成了亟待解決的問題。

養(yǎng)殖水體中氨氮會分解轉化成亞硝酸鹽，而養(yǎng)殖動物代謝蛋白質后的分泌與排泄則會產(chǎn)生氨氮，因此，亞硝酸鹽是養(yǎng)殖水體中一種常見的污染物。亞硝酸鹽對苗種的危害大于成體階段，會導致水生動物的生長發(fā)育延遲或停止^[4]。水體環(huán)境中亞硝酸鹽濃度的升高，可能通過擾亂魚類腸道微生物的正常生理功能，進而影響魚類的抗病能力^[5]。

近年來，唐山市加州鱸養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，高密度養(yǎng)殖加州鱸常常造成水體亞硝酸鹽含量增加，從而造成加州鱸誘發(fā)性細菌感染，造成大面積死亡嚴重阻礙本省加州鱸產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。為探究亞硝酸鹽對加州鱸消化和免疫系統(tǒng)影響，本文通過組織切片分析亞硝酸鹽對加州鱸的危害，從而增加加州鱸養(yǎng)殖病害防治基本數(shù)據(jù)，為加州鱸抗逆新品種的研發(fā)奠定基礎。

1"材料與方法

1.1"實驗材料

60尾加州鱸（體質量：400 g±20 g）來自唐山市灤南縣農業(yè)農村局加州鱸養(yǎng)殖示范基地：實驗組（T）30尾取自高亞硝酸鹽水體（＞0.15 mg/L），對照組（C）30尾取自正常亞硝酸鹽水體（≤0.005 mg/L），分別養(yǎng)殖30 d后，將加州鱸麻醉后取肝臟、胃和腸道。

1.2"實驗方法

加州鱸解剖后， 將組織樣品置于Bouin’s固定液中固定40 h后轉移至乙醇中梯度脫水后， 二甲苯透明， 石蠟包埋， 連續(xù)切片厚度為5 μm， 切片采用HE染色，用Nikon SMZ1000顯微鏡拍照觀察。

1.3"數(shù)據(jù)分析

實驗數(shù)據(jù)采用 SPSS 26.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，使用單因素方差分析（One-way ANOVA）進行顯著性差異比較，數(shù)據(jù)以“平均值±標準誤（mean ± SEM）”表示，顯著水平是P＜0.05。

2"結果

2.1"亞硝酸鹽濃度對加州鱸肝臟結構的影響

通過對比高亞硝酸鹽濃度和正常亞硝酸鹽濃度下的加州鱸肝臟組織切片發(fā)現(xiàn)，實驗組的肝臟組織結構模糊，并出現(xiàn)了肝臟細胞核空泡化和血竇現(xiàn)象，而對照組的肝臟組織結果清晰，細胞核排列正常（封二圖1 ）。

2.2"亞硝酸鹽濃度對加州鱸胃組織結構的影響

通過分析對照組和實驗組加州鱸胃組織切片，并未觀察到胃黏膜細胞有明顯的損傷，胃組織結構清晰、胃黏膜腺體排列整齊、結構完整，未見明顯炎癥（封二圖2）。

2.3"亞硝酸鹽濃度對加州鱸腸道組織結構的影響

正常亞硝酸鹽濃度下加州鱸腸道上皮細胞性狀規(guī)則，排列緊密，腸絨毛排列整齊，腸道絨毛長度自前腸、中腸、后腸逐漸降低，中腸的腸壁厚度最大，后腸最小（表1）。高亞硝酸鹽濃度的加州鱸腸道出現(xiàn)損傷，發(fā)現(xiàn)了腸道絨毛變短和退化的現(xiàn)象，腸道絨毛長度前腸最短，后腸最長，中腸腸壁厚度最大，前腸最小（封二圖3）。從表1可以得出，實驗組前腸和中腸絨毛長度顯著低于對照組（P＜0.05），實驗組前腸和中腸腸壁厚度顯著小于對照組（P＜0.05）。

3"討論

肝臟是魚類重要的代謝器官，具有調節(jié)糖脂代謝^[6]、合成多種蛋白質和酶類等功能^[7]，對魚類生長健康十分重要。前期研究發(fā)現(xiàn)，不同投喂水平會對魚類的肝臟健康產(chǎn)生影響，過度攝食會造成肝臟代謝紊亂^[8]，從而誘發(fā)脂肪肝。亞硝酸鹽氮是氨氮進一步氧化的中間產(chǎn)物，其毒性可引起魚類鰓組織病變，降低紅細胞運輸氧的能力^[9-10]。Jia等^[11]發(fā)現(xiàn)高濃度亞硝酸鹽脅迫會導致大菱鲆（Scophthalmus maximus）肝損傷，血紅蛋白Na+濃度下降，超氧化物歧化酶活性失常。本實驗對高亞硝酸鹽加州鱸肝臟組織進行研究，發(fā)現(xiàn)肝臟出現(xiàn)了空泡化、肝細胞核腫大等現(xiàn)象，說明高亞硝酸鹽會在一定程度上會損傷加州鱸肝臟組織，可能進一步產(chǎn)生脂肪肝。

胃是魚類重要的消化器官，外層由結締組織和肌肉層構成，提供了胃的支撐和運動功能；中層是黏膜組織分泌胃液和吸收營養(yǎng)物質；內層是上皮細胞保護胃壁免受胃酸損害。本研究發(fā)現(xiàn)不同濃度亞硝酸鹽對加州鱸胃組織沒有有明顯的病變影響，說明亞硝酸鹽并未對加州鱸胃組織健康產(chǎn)生影響。

腸道是魚類對食物進行消化、吸收的重要器官，腸絨毛為腸道吸收食物的主要結構，腸絨毛的高度、寬度決定了腸黏膜養(yǎng)分吸收面積，對維持魚體健康具有重要作用^[12]。腸道肌層厚度反映了腸道的收縮與擴張能力，當腸道功能紊亂，腸道對食物營養(yǎng)成分吸收能力下降導致肌層變薄^[13-15]。本研究發(fā)現(xiàn)前、中、后腸絨毛長和腸壁厚度均存在差異，高亞硝酸鹽濃度下和正常亞硝酸鹽濃度下加州鱸的腸絨毛長度和腸壁厚度存在顯著差異（P＜0.05），表明高亞硝酸鹽環(huán)境影響大口黑鱸前腸、中腸、后腸絨毛長度和腸壁厚度，對加州鱸腸道造成損傷。

4"結論

本實驗對兩種不同濃度亞硝酸鹽下養(yǎng)殖的加州鱸肝臟、胃和腸道進行分析，探究了亞硝酸鹽對加州鱸消化系統(tǒng)的影響。通過研究發(fā)現(xiàn)在高濃度亞硝酸鹽養(yǎng)殖環(huán)境下，加州鱸胃組織結構均比較完整，但肝臟細胞出現(xiàn)空泡化和腫大現(xiàn)象；腸道絨毛變短、退化。綜上所述，高濃度亞硝酸鹽環(huán)境會對加州鱸的肝臟和腸道組織產(chǎn)生影響，從而影響加州鱸的消化免疫系統(tǒng)。

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The impact of elevated nitrite levels on the digestive system of Micropterus salmoides

WANG Yingguang1，HAO Yanzhen2，RONG Zhen2，SUN Shaoyong3，LI Zeyuan1，GAO Xiaowei2

（1.Luannan County Bureau of Agriculture and Rural Affairs， Luannan063500，China; 2. Ocean College， Hebei Agricultural University， Qinhuangdao066003，China;3.Hebei Provincial Fisheries Technology Extension Center， Shijiazhuang050035，China）

Abstract：To investigate the effects of a high nitrite aquaculture environment on the digestive system of the largemouth bass Micropterus salmoides， histological observations and analyses were conducted on the liver， stomach， and intestinal tissues of M. salmoides cultured in environments with elevated nitrite levels （＞0.15 mg/L） compared to normal nitrite levels （≤0.005 mg/L）. The findings revealed that in high-nitrite environments， the liver and intestinal tissue structures of M. salmoides were significantly compromised， with liver cell nuclei exhibiting vacuolation and enlargement， and a marked difference in the length of intestinal villi （P＜0.05）. In conclusion， excessive nitrite concentrations have a profound impact on the digestive system of M. salmoides. Under the current aquaculture model， controlling nitrite concentration is essential for enhancing fish immunity.

Key words：Micropterus salmoides; nitrite; digestive system

（收稿日期：2024-08-14）