冠心病病人血清KAL、ENOX1水平與冠狀動脈斑塊穩定性、預后的關系

摘要目的：分析冠心病病人血清卡利他?。↘AL）、Ecto-NOX二硫化物硫醇交換器1（ENOX1）水平與冠狀動脈斑塊穩定性、預后的關系。方法：選取2021年1月—2022年2月我院收治的103例冠心病病人（作為冠心病組），根據冠狀動脈斑塊穩定性分為不穩定組（47例）和穩定組（56例）；根據6個月后是否發生主要不良心血管事件分為預后不良組（34例）和預后良好組（69例）。另選取同期50名體檢健康者（作為對照組）。采用酶聯免疫吸附法檢測血清KAL、ENOX1水平。采用Spearman法分析冠心病病人血清KAL與ENOX1水平的相關性；多因素Logistic回歸分析血清KAL、ENOX1水平與冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定、預后不良的關系；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清KAL、ENOX1水平對冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的預測價值。結果：冠心病組血清KAL水平低于對照組，ENOX1水平高于對照組（P＜0.001）。不穩定組血清KAL水平低于穩定組，ENOX1水平高于穩定組（P＜0.001）。預后不良組血清KAL水平低于預后良好組，ENOX1水平高于預后良好組（P＜0.001）。Spearman相關性分析顯示，冠心病病人血清KAL與ENOX1水平呈負相關（r＝－0.780，P＜0.001）。多因素Logistic回歸分析顯示，KAL升高為冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的獨立保護因素，ENOX1升高為獨立危險因素。ROC曲線分析顯示，血清KAL、ENOX1水平聯合預測冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的ROC曲線下面積高于各指標單獨預測。結論：冠心病病人血清KAL水平降低，ENOX1水平升高與冠狀動脈斑塊不穩定、預后不良有關，二者聯合對冠心病病人冠狀動脈斑塊穩定性和預后的預測價值較高。

關鍵詞冠心??；卡利他??；Ecto-NOX二硫化物硫醇交換器1；斑塊穩定性；預后

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.18.004

Relationship between Serum KAL， ENOX1 and Coronary Artery Plaque Stability， Prognosis in Patients with Coronary Heart Disease

MA Wenhui， LIU Xiaolin， YU Huapeng， MA Shengting

The Fourth People′s Hospital of Jinan， Jinan 250031， Shandong， China

Corresponding AuthorMA Shengting， E-mail： mstlhy@163.com

AbstractObjective：To analyze the relationship between serum kallistatin（KAL），Ecto-NOX disulfide mercaptan exchanger-1（ENOX1） levels and coronary artery plaque stability and prognosis in patients with coronary heart disease.Methods：A total of 103 patients with coronary heart disease were" divided into unstable group（47 cases） and stable group（56 cases） according to coronary artery plaque stability.According to the occurrence of major adverse cardiovascular events after 6 months，103 patients were divided into poor prognosis group（34 cases） and good prognosis group（69 cases）.Another 50 healthy subjects in the same period were selected（control group）.Serum KAL and ENOX1 levels were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.Spearman method was used to analyze the correlation between serum KAL and ENOX1 levels in patients with coronary heart disease.Multivariate Logistic regression was used to analyze the relationship between serum KAL，ENOX1 levels and coronary plaque instability，prognosis in patients with coronary heart disease.The value of serum KAL and ENOX1 levels was analyzed by receiver operating characteristic（ROC） curve.Results：Serum KAL level in the CHD group was lower than that in the control group，and ENOX1 level was higher than that in the control group（P＜0.001）.Serum KAL level in the unstable group was lower than that in the stable group，and ENOX1 level was higher than that in the stable group（P＜0.001）.Serum KAL level in the poor prognosis group was lower than that in the better prognosis group，and ENOX1 level was higher than that in the better prognosis group（P＜0.001）.Spearman correlation analysis showed that serum KAL was negatively correlated with ENOX1 level in CHD patients（r＝－0.780，P＜0.001）.Multivariate Logistic regression analysis showed that the increased KAL was an independent protective factor for coronary plaque instability and poor prognosis in patients with coronary heart disease，and the increased ENOX1 was an independent risk factor.ROC curve analysis showed that the combined predictive value of serum KAL and ENOX1 levels of coronary artery plaque instability and poor prognosis in patients with coronary heart disease had a higher area under the ROC curve than predictive value of the single index.Conclusion：The decreased KAL level and the increased ENOX1 level in patients with coronary heart disease were associated with coronary plaque instability and poor prognosis，and the combination of KAL and ENOX1 showed a high value in the evaluation of coronary artery plaque stability and prognosis in patients with coronary heart disease.

Keywordscoronary artery disease; kallistatin; Ecto-NOX disulfide-thiol exchanger 1; plaque stability; prognosis

心血管病是我國居民的首要死亡原因，冠心病是我國居民心血管病死亡的第二大病因［1］。冠心病包括穩定性冠心?。怨诿}綜合征）［2］和不穩定性冠心?。毙怨诿}綜合征）［3］，冠狀動脈動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）引起的血管狹窄或阻塞是共同的致病原因，但不穩定性斑塊侵蝕或破裂導致不穩定型心絞痛甚至心肌梗死，最終發生心力衰竭和/或死亡［4］。因此，及時評估冠心病病人冠狀動脈斑塊穩定性至關重要。相關研究表明，炎癥反應和氧化應激是AS發病機制的核心因素［5-6］?？ɡ。╧allistatin，KAL）是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，具有調節炎癥反應、氧化應激等作用［7］。Ecto-NOX二硫化物硫醇交換器1（Ecto-NOX disulfide-thiol exchanger 1，ENOX1）是一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NADH）氧化酶，通過增加活性氧促進氧化應激［8］。有研究報道，血清KAL水平與心肌梗死病人心血管事件發生有關［9］。有研究指出，KAL可抑制NADH氧化酶的活性［10］。上述研究提示KAL與ENOX1之間可能存在生物學聯系。本研究旨在探討血清KAL、ENOX1水平與冠心病病人冠狀動脈斑塊穩定性和預后的關系。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2021年1月—2022年2月我院收治的103例冠心病病人作為冠心病組，其中，男67例，女36例；年齡42～87（64.02±9.92）歲；體質指數18.16～31.27（24.06±2.86）kg/m2。另選取同期50名體檢健康者作為對照組，其中，男32名，女18名；年齡28～81（62.69±7.51）歲；體質指數18.16～27.85（23.62±1.06）kg/m2。兩組一般資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。本研究經醫院倫理委員會批準。

納入標準：冠心病符合《臨床冠心病診斷與治療指南》［10］診斷標準，冠狀動脈造影顯示冠狀動脈主干或主要分支管腔狹窄≥50%；初次確診，入院前未接受相關治療；年齡＞18歲；病人或家屬知情并簽署同意書。

排除標準：先天性心臟??；既往血管旁路手術或經皮冠狀動脈介入史；合并嚴重肝、腎、肺功能損害或血液、免疫系統損害；造影劑過敏；合并腦血管疾?。缓喜盒阅[瘤；院內死亡。

1.2方法

1.2.1資料收集

收集冠心病病人一般資料，包括性別、年齡、體質指數、吸煙史、病史、實驗室指標［入院次日清晨收集血液標本檢測總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、白細胞計數、血小板計數、淋巴細胞計數］和左室射血分數（left ventricular ejection fraction，LVEF）（入院后6 h內采用深圳邁瑞BS-280彩色多普勒超聲診斷儀行心臟彩超進行測定）。

1.2.2血清KAL、ENOX1水平檢測

采集冠心病組入院次日和對照組體檢當日3 mL空腹靜脈血，4 ℃條件下1 000×重力加速度（g）離心10 min，收集上層血清，置于－80 ℃冰箱中保存。采用酶聯免疫吸附試驗（武漢菲恩生物科技有限公司，編號：FN-EH0209、FN-EH8241）檢測血清KAL、ENOX1水平。

1.2.3血管內超聲

冠心病病人入院后采用荷蘭飛利浦EPIQ血管彩色超聲診斷系統行冠狀動脈血管內超聲檢查，參考Naghavi等［11］評估斑塊穩定性，不穩定性斑塊為斑塊內低回聲暗區（脂質核）≥1 mm2，脂質核/斑塊比率＞20%，纖維帽厚度＜0.7 mm或斑塊破裂、血栓。不符合上述標準則為穩定性斑塊。根據冠狀動脈斑塊穩定性將冠心病病人分為不穩定組（47例）和穩定組（56例）。

1.3隨訪

病人出院后電話或門診隨訪6個月，記錄心力衰竭、不穩定型心絞痛、心肌梗死、心源性休克、惡性心律失常、心源性死亡等主要不良心血管事件發生情況。根據病人是否發生主要不良心血管事件分為預后不良組（34例）和預后良好組（69例）。

1.4統計學處理

采用SPSS 28.0統計軟件分析數據，符合正態分布的定量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗；不符合正態分布的定量資料以中位數、四分位數［M（P25，P75）］表示，采用非參數檢驗。定性資料以例數、百分比（%）表示，采用χ2檢驗。采用Spearman法分析冠心病病人血清KAL與ENOX1水平的相關性；多因素Logistic回歸分析血清KAL、ENOX1水平與冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的關系；受試者工作特征（ROC）曲線分析血清KAL、ENOX1水平對冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的預測價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1冠心病組與對照組血清KAL、ENOX1水平比較

冠心病組血清KAL水平低于對照組，ENOX1水平高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.001）。詳見表1。

2.2冠心病病人血清KAL與ENOX1水平的相關性分析

Spearman相關性分析顯示，冠心病病人血清KAL與ENOX1水平呈負相關（r＝－0.780，P＜0.001）。詳見圖1。

2.3不穩定組與穩定組臨床資料比較

不穩定組吸煙、糖尿病比例和三酰甘油、LDL-C、ENOX1水平高于穩定組，LVEF、KAL水平低于穩定組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。詳見表2。 圖1冠心病病人血清KAL與ENOX1

水平的相關性分析散點圖

2.4冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定的影響因素

以KAL（實測值）、ENOX1（實測值）、吸煙（是＝1，否＝0）、糖尿?。ㄓ校?，無＝0）、三酰甘油（實測值）、LDL-C（實測值）、LVEF（實測值）為自變量，冠狀動脈斑塊穩定性（不穩定＝1，穩定＝0）為因變量，進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示，KAL升高為冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定的獨立保護因素；吸煙、糖尿病、三酰甘油升高、LDL-C升高、ENOX1升高為獨立危險因素（P＜0.05）。詳見表3。

2.5預后不良組與預后良好組臨床資料比較

預后不良組年齡大于預后良好組，不穩定斑塊比例、LDL-C、ENOX1水平高于預后良好組，LVEF、KAL水平低于預后良好組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。詳見表4。

2.6冠心病病人預后不良的影響因素分析

以KAL（實測值）、ENOX1（實測值）、年齡（原值輸入）、斑塊穩定性（不穩定＝1，穩定＝0）、LDL-C（實測值）、LVEF（實測值）為自變量，預后（不良＝1，良好＝0）為因變量，進行多因素Logistic回歸分析。結果顯示，LVEF、KAL升高為冠心病病人預后不良的獨立保護因素；年齡增加、斑塊不穩定、ENOX1升高為獨立危險因素（P＜0.05）。詳見表5。

2.7血清KAL、ENOX1水平對冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的預測價值

ROC曲線分析顯示，血清KAL、ENOX1水平聯合預測冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的ROC曲線下面積（area under the curve，AUC）較各指標單一預測更高。詳見表6、表7和圖2。

3討論

冠心病是冠狀動脈血管發生AS，引起血管狹窄或阻塞，導致心肌缺血、缺氧或壞死，冠狀動脈不穩定斑塊破裂、糜爛（侵蝕）及血栓形成是導致穩定性冠心病發展為不穩定性冠心病的重要原因。隨著藥物與非藥物手段的發展和區域協同救治體系的逐漸完善，不穩定性冠心病病人殘疾和死亡風險大幅度降低，但不良心血管事件發生率仍較高，病人預后較差［12-14］。因此，及時評估冠心病病人斑塊穩定性有重要的臨床意義。

AS是冠心病發生發展的病理基礎，相關研究顯示，血管內皮損傷是AS發生的始動因素，炎癥反應和氧化應激貫穿AS發生發展的過程，通過損傷血管內皮促進AS發生，增強斑塊局部炎癥反應，誘導細胞外基質降解增加和合成減少，導致斑塊纖維帽變薄，最終導致斑塊不穩定和破裂［15-16］。KAL是一種內源性蛋白質，廣泛表達于心臟和動脈血管等多種組織和器官，通過肝素結合結構域調節多種細胞生物學行為［7］。相關研究指出，KAL通過肝素結合結構域抑制腫瘤壞死因子-α結合其受體，進而抑制核因子-κB通路激活，發揮抗炎作用；通過磷酸化激活內皮型一氧化氮合酶，促進一氧化氮生成，抑制活性氧產生，發揮抗氧化應激作用［17-18］。本研究結果顯示，冠心病病人血清KAL水平降低，提示KAL可能抑制冠心病發生；進一步分析顯示，不穩定斑塊冠心病病人血清KAL水平進一步降低，血清KAL水平升高為冠狀動脈斑塊不穩定的獨立保護因素，說明血清KAL水平降低與冠心病病人斑塊不穩定有關，分析KAL具有抗炎和抗氧化作用，KAL降低導致抗炎和抗氧化作用降低，促進斑塊為發展不穩定性。動物實驗表明，載脂蛋白E誘導的AS小鼠冠狀動脈斑塊KAL表達下調，上調KAL可抑制氧化應激抑制斑塊形成，通過調節巨噬細胞極化抑制斑塊內炎癥反應［19-20］。本研究結果還顯示，KAL升高為冠心病病人預后不良的獨立保護因素，考慮與KAL水平降低可促進炎癥反應和氧化應激進展有關。炎癥和氧化應激不僅參與AS斑塊的發生發展，而且通過損傷心肌細胞誘導其壞死和凋亡，促進心力衰竭、心源性休克等不良心血管事件發生［13］。

活性氧生成增多是氧化應激激活的主要原因，NADH氧化酶是一類以生成活性氧為主要功能的蛋白質，稱為氧化應激激活的關鍵元素［21］。ENOX1作為一種NADH氧化酶，通過催化NADH的氧化及蛋白質二硫化物-硫醇交換，促進活性氧生成增多，進而促進氧化應激發生發展［22］。Lee等［23］研究顯示，含有ENOX1的質膜電子傳遞途徑可誘導人血管內皮細胞氧化應激，提示ENOX1可能與AS有關。本研究結果顯示，冠心病病人血清ENOX1水平升高，提示ENOX1可能參與冠心病發生；進一步分析顯示，不穩定斑塊冠心病病人血清ENOX1水平進一步升高，血清ENOX1水平升高為冠狀動脈斑塊不穩定的獨立危險因素，說明血清ENOX1水平升高與冠心病病人斑塊不穩定有關，分析與ENOX1升高可催化NADH氧化促進氧化應激反應、導致斑塊不穩定性增加有關。本研究結果還顯示，ENOX1升高為冠心病病人預后不良的獨立危險因素，分析與ENOX1升高可促進氧化應激、加重心肌損傷導致預后不良有關。有研究指出，KAL通過抑制NADH氧化酶活性，減少心臟內氧化應激［10］，抑制KAL可促進NADH氧化酶活性，導致心臟超氧化物含量增多［24］。上述研究提示KAL與NADH氧化酶活性密切相關。本研究相關性分析結果顯示，冠心病病人血清KAL與ENOX1水平呈負相關，提示二者可能共同參與冠心病發展，但具體作用需進一步研究證實。本研究繪制ROC曲線可知，血清KAL、ENOX1水平預測冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的AUC分別為0.786，0.799與0.793，0.794，說明二者均可作為預測斑塊不穩定和預后不良的輔助指標；血清KAL、ENOX1水平聯合評估的AUC為0.907與0.860，較各指標單一預測更高，說明血清KAL、ENOX1水平聯合評估冠心病病人冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的價值更高。

綜上所述，冠心病病人血清KAL水平降低，ENOX1水平升高，二者可能共同參與影響冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良，可作為預測冠狀動脈斑塊不穩定和預后不良的輔助指標，且二者聯合的預測價值更高。本研究結果仍需多中心大樣本研究證實，進一步分析KAL、ENOX1與冠心病的關系。

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（收稿日期：2023-03-31）

（本文編輯薛妮）