玉露香梨組培快繁體系建立研究

摘 " "要：【目的】針對梨品種間組培繁殖差異大、玉露香梨組培快繁體系也尚未建立的問題開展了相關研究，旨在建立玉露香梨的組培快繁技術體系，為深入開展玉露香梨的分子生物學研究和培育脫毒苗提供技術支撐。【方法】以玉露香梨（Pyrus bretschneideri ‘Yuluxiang’）組培苗為試材，采用完全隨機試驗設計篩選影響繼代增殖和生根的因素，如基本培養基及植物生長調節劑；設置暗培養和活性炭處理，對繼代苗的生根條件進行優化。【結果】適宜玉露香梨組培苗繼代增殖的培養基為MS+1.00 mg·L-1 6-BA+0.10 mg·L-1 NAA，繁殖系數為3.57，平均有效新梢數為1.17；適宜玉露香梨組培苗生根的培養基為1/2MS+2.00 mg·L-1 NAA，生根率為60.00%，生根條數為3.40。暗培養和活性炭處理均不適于玉露香梨組培苗生根，其中，暗培養0～20 d對玉露香生根無顯著促進作用，且隨暗培養時間延長，根部愈傷增大，莖尖枯死情況加重；活性炭對玉露香梨組培苗生根有顯著抑制作用，低質量濃度活性炭（0.5 g·L-1）可促進地上部生長，高質量濃度活性炭（1.0～4.0 g·L-1）對地上部有明顯抑制作用，部分組培苗的葉片出現褐化現象。移栽于溫室60 d后，玉露香成活率為32.57%，植株生長良好。【結論】建立了玉露香梨組培快繁體系，篩選出適宜玉露香的繼代增殖培養基、生根培養基及生根條件，并成功進行了玉露香梨生根苗的馴化移栽。

關鍵詞：玉露香梨；組織培養；繼代增殖；生根；馴化移栽

中圖分類號：S661.2 文獻標志碼：A 文章編號：1009-9980（2025）01-0227-10

Propagation of of Yuluxiang pear （Pyrus bretschneideri Rehd.） through tissue culture

CHENG Xiaohua1， ZHAO Shuliang2， ZHANG Ying3， ZHANG Yuxing1， 4*

（1College of Horticulture， Hebei Agricultural University， Baoding 071000， Hebei， China; 2College of Landscape and Ecological Engineering， Hebei University of Engineering， Handan 056038， Hebei， China; 3Institute of Biotechnology and Food Science， Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences， Shijiazhuang 050050， Hebei， China; 4Pear Technology Innovation Center of Hebei Province， Baoding 071000， Hebei， China）

Abstract： 【Objective】 Yuluxiang （Pyrus bretschneideri Rehd.） is an excellent mid-late repening variety with thin skin， delicate flesh， sweet taste aroma， and other excellent characteristics， which is widely recognized by the domestic and foreign fruit markets. In view of the large differences in tissue culture propagation among pear varieties and there was no rapid propagation system through tissue culture for Yuluxiang pear， the study aimed to establish the tissue culture technology for Yuluxiang pear， and provide technical support for further molecular biology research and production of virus-free nursery trees of Yuluxiang pear. 【Methods】 The experimental materials were prepared as follows： firstly， the new shoots of Yuluxiang pear were collected from the specimen garden of Hebei Agricultural University 5-10 days after flowering. Secondly， the blades of the leaves were removed， and only the petioles were kept on the stem. The single bud stem segments were cut in about 1 cm with pruning scissors and placed in a clean triangular bottle. They were rinsed with running water for 30 min， sterilized with 0.1% HgCl2 for 6 min， then sterilized with 75% alcohol for 1 min. After three times of rinsing with sterile water， they were dried using sterile filter paper. The explants were inoculated on the medium MS， with 1.00 mg·L-1 6-BA， 0.10 mg·L-1 IBA， 30.0 g·L-1 sucrose， 6.0 g·L-1 agar， and 2.0 g·L-1 PVA. Factors affecting proliferation and rooting， such as basic medium and plant growth regulator， were screened by completely randomized experiment design; the way of gradient for dark culture time and activated carbon concentration were used to optimize rooting conditions. 【Results】 The medium of MS+1.00 mg·L-1 6-BA +0.10 mg·L-1 NAA +30.0 g·L-1 sucrose +6.0 g·L-1 agar was suitable for the proliferation of Yuluxiang pear， and the propagation coefficient was 3.57 and the number of effective shoots was 1.17. The suitable medium for rooting of Yuluxiang pear was 1/2MS+2.0 mg·L-1 NAA +20.0 g·L-1 sucrose +6.0 g·L-1 agar. The rooting rate was 60.00%， and the average number of roots was 3.40. There was no significant difference in rooting rate and average number of roots between dark culture of 0 day， 5 days， and 15 days. The rooting rate and average number of roots of the treatments with 10 days and 20 days dark culture was significantly lower than that of the treatments with 0 day on the rooting rate and average rooting number. With the increase of dark culture time， the root became thinner， the stem tip dieback rate of the explants significantly increased， and the root callus became larger. Therefore， the dark culture had no promotion effect on rooting. 0.5 g·L-1 activated carbon could promote the aboveground growth of Yuluxiang shoots. However， when the concentration of activated carbon was increased to 1.0-4.0 g·L-1， there was an obvious inhibitory effect on the aboveground parts， and the leaves of some plantlets turned brown. After 40 days culture after rooting， 132 Yuluxiang tissue culture seedlings were domesticated in the greenhouse for 10 days and transplanted into the nutrient pots. It was observed that Yuluxiang exhibited a mortality phenomenon 10 days after transplantation. The survival rate of Yuluxiang plantlets was 32.57% 60 days after transplantation， and the overall growth of the plants was robust and healthy. 【Conclusion】 This study screened out the optimal media for proliferation and rooting of Yuluxiang pear in vitro， successful acclimation and transplantation process for plantlets in glasshouse.

Key words： Pyrus bretschneideri ‘Yuluxiang’; Tissue culture; Subculture proliferation; Rooting; Acclimation and transplanting

關于不同品種梨組培快繁體系的研究已有很多報道，但品種間差異較大。李昌珠等[1]發現歐洲梨Koporeka繼代培養28 d后繁殖系數達5.60，生根培養14 d后，生根率達88.65%，而Vila連續培養60 d后只形成少量愈傷組織，無芽、根的分化；宋梅等[2]研究表明，與碭山酥梨相比，誘導庫爾勒香梨莖尖分化更難，且繁殖系數較小；劉小芳等[3]發現庫爾勒香梨的繁殖系數最高為1.30，生根誘導效果較差，僅有一株組培苗在1/2MS+1.00 mg·L-1 IBA+0.05 g·L-1活性炭生根培養基上誘導出一條根；其他品種如中梨1號在1/2MS+1.00 mg·L-1 IBA中生根率為44.80%[4]，黃冠梨生根率最高為33.33%[5]。綜上所述，不同梨品種間組培快繁效率的差異較大，有必要針對具體品種開展相關研究，建立適合某一品種的組培快繁體系。

玉露香梨是山西省農業科學院果樹研究所通過庫爾勒香梨×雪花梨雜交選育出的優新品種，該品種具有果皮薄、果肉細膩、口感香甜、石細胞少等優點，受到國內外市場的普遍認可[6-7]，是農業農村部主推的中晚熟梨優良品種，且已在山西、河北等地進行大面積推廣[8]。目前，玉露香梨研究主要集中在生理及栽培方面[7-9]，尚未建立它的組培快繁體系。筆者旨在建立玉露香梨高效、穩定的組培快繁體系，為深入開展玉露香梨的分子生物學研究和培育脫毒苗提供理論和技術支撐。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗材料為實驗室保存的繼代30 d的玉露香梨組培苗。常規培養條件：溫度（25±2）℃，光照度2000～3000 lx，光周期（晝/夜）=16 h/8 h。

1.2 試驗方法

1.2.1 材料獲得 盛花5～10 d后，于河北農業大學標本園采集玉露香梨新梢外植體。將外植體去掉葉片，留下葉柄，用枝剪刀剪為1 cm單芽莖段，放于干凈三角瓶中，流水沖洗30 min。在超凈臺上用0.1% HgCl2消毒6 min，75%乙醇消毒1 min，無菌水沖洗3次，無菌濾紙吸干水分后，接種于MS+1.00 mg·L-1 6-BA+0.10 mg·L-1 IBA+30.0 g·L-1蔗糖+6.0 g·L-1瓊脂+2.0 g·L-1 聚乙烯醇（PVA）（pH值為5.8～6.0）培養基上，擴繁到一定數量后開展試驗。

1.2.2 基本培養基對玉露香梨組培苗繼代的影響 以MS、1/2MS、1/4MS、NN69、WPM為基本培養基，附加1.00 mg·L-1 6-BA、0.10 mg·L-1 NAA、30.0 g·L-1蔗糖、6.0 g·L-1瓊脂、2.0 g·L-1 PVA（pH值為5.8～6.0），共5個處理開展試驗，每個處理接6瓶，每瓶接5個1 cm單芽莖段，采用完全隨機試驗設計，3次重復，常規培養40 d后，調查統計繁殖系數及平均有效新梢數（繁殖系數=調查總株數/接種株數；有效新梢為繼代苗中株高≥1.5 cm且可用于生根的嫩梢；平均有效新梢數=調查有效新梢數/接種株數；玻璃苗發生率/%=發生玻璃化的株數/接種株數×100；下同）。

1.2.3 植物生長調節劑對玉露香梨組培苗繼代的影響 以MS+0.10 mg·L-1 NAA為基本培養基，附加0.50、1.00、1.50和2.00 mg·L-1 6-BA；以MS+1.00 mg·L-1 6-BA為基本培養基，附加0.05、0.10、0.15和0.20 mg·L-1 IBA或NAA（pH值為5.8～6.0），共11個處理用于試驗。

1.2.4 基本培養基對玉露香梨組培苗生根的影響 以MS、1/2MS、1/4MS、NN69、1/2NN69、1/4NN69為基本培養基，附加2.00 mg·L-1 NAA、20.0 g·L-1蔗糖、6.0 g·L-1瓊脂（pH值為5.8～6.0），共6個處理用于試驗，每個處理接9瓶，每瓶接5個1 cm單芽莖段，采用完全隨機試驗設計，3次重復，常規培養40 d后，調查統計生根率及平均生根數（生根率/%=生根株數/接種株數×100；平均生根數/條=主根發生總數/接種株數；莖尖枯死率/%=莖尖枯死的株數/接種株數×100；下同）。

1.2.5 植物生長調節劑對玉露香梨組培苗生根的影響 以1/2MS為基本培養基，附加0.20、0.50、1.00、2.00、5.00 mg·L-1 IBA或NAA（pH值為5.8～6.0），共10個處理用于試驗。

1.2.6 暗培養時間對玉露香梨組培苗生根的影響 以1.2.4、1.2.5篩選到的生根培養基為基礎，設置暗培養時間為0、5、10、15、20 d，共5個處理用于試驗。

1.2.7 活性炭對玉露香梨組培苗生根的影響 以1.2.4、1.2.5篩選到的生根培養基為基礎，設置活性炭質量濃度為0.0、0.5、1.0、2.0、4.0 g·L-1，共5個處理用于試驗。

1.2.8 玉露香梨組培生根苗馴化移栽 選取生根誘導40 d的玉露香梨組培苗132棵，于溫室強光（18 000～35 000 lx）閉瓶鍛煉7 d后再開瓶鍛煉3 d，然后移栽到基質（草炭土、蛭石體積比為1∶2，121 ℃高壓滅菌20 min后晾涼備用）中。移栽后，噴施0.1%多菌靈預防病害，扣育苗塑料蓋保溫保濕。移栽7 d后逐漸通風，10 d后去掉塑料蓋。調查移栽10、15、25、40、60 d后玉露香梨組培苗的成活率（移栽成活率/%=成活株數/移栽株數×100），并觀察記錄幼苗生長狀態。

1.3 數據分析

使用Excel進行數據統計，利用DPS軟件進行數據分析，采用Duncan’s新復極差法進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 基本培養基對玉露香梨組培苗繼代的影響

試驗結果表明，WPM處理的繁殖系數、平均有效新梢數及玻璃苗發生率均顯著高于其他處理。MS、1/2MS、NN69三者間的繁殖系數無顯著差異，但均顯著高于1/4MS處理；MS、1/2MS、1/4MS、NN69處理間的平均有效新梢數均無顯著差異（表1）。除了MS處理無玻璃苗出現外，1/2MS、1/4MS、NN69、WPM處理組培苗均有不同程度的玻璃化現象。由圖1可知，MS處理葉片大，葉色濃綠，相對更加健壯；1/2MS、1/4MS、NN69處理葉片小而黃，輕微玻璃化；而WPM處理葉片較大，葉色發黃，頂端卷曲，質脆，整體玻璃化嚴重。綜合評價認為，適合玉露香梨組培苗繼代增殖的基本培養基為MS培養基。

2.2 植物生長調節劑對玉露香梨組培苗繼代的影響

當NAA質量濃度為0.10 mg·L-1時，1.00 mg·L-1 6-BA處理的繁殖系數顯著高于低質量濃度（0.50 mg·L-1 6-BA）和較高質量濃度（1.50～2.00 mg·L-1 6-BA）處理，1.00 mg·L-1 6-BA處理與其他處理間的平均有效新梢數差異不顯著（表2，圖2）。總體而言，當NAA質量濃度為0.10 mg·L-1時，培養基中添加1.00 mg·L-1 6-BA較合適，6-BA質量濃度過高或過低均抑制玉露香梨繼代增殖。

當6-BA質量濃度為1.00 mg·L-1時，不同質量濃度IBA處理間繁殖系數差異不顯著，0.15 mg·L-1 IBA處理的平均有效新梢數顯著高于0.05 mg·L-1 IBA處理，但與0.10、0.20 mg·L-1 IBA處理間差異不顯著，說明0.10、0.15、0.20 mg·L-1 IBA均適合玉露香梨繼代增殖。當6-BA質量濃度為1.00 mg·L-1時，不同質量濃度NAA處理間平均有效新梢數差異不顯著，但0.10 mg·L-1 NAA的繁殖系數顯著高于0.05、0.15、0.20 mg·L-1 NAA處理，表明0.10 mg·L-1 NAA適合玉露香繼代增殖（表2，圖2）。

整體看，1.00 mg·L-1 6-BA+0.10 mg·L-1 NAA處理的繁殖系數顯著高于其他處理，平均有效新梢數與其他處理間無顯著差異，更適合玉露香梨組培苗繼代擴繁。

2.3 基本培養基對玉露香梨組培苗生根的影響

MS、1/2MS兩處理間生根率、平均生根條數均無顯著差異，但均顯著高于其他處理，這兩個處理的植株地上部葉片均較大、較為舒展、葉色油綠，長勢好于其他處理（表3、圖3）。在不同濃度NN69處理下，隨NN69濃度降低，生根率顯著下降，1/4NN69處理的生根率、生根數均為0（表3）；不同NN69處理下玉露香組培苗均出現葉小、卷曲、皺縮、發黃的情況，整體長勢較差。除去1/2MS與NN69處理的莖尖枯死率為0外，其他處理均有不同程度莖尖枯死情況出現。綜合評價認為，適合玉露香梨組培苗生根的基本培養基為1/2MS（圖3）。

2.4 植物生長調節劑對玉露香梨組培苗生根的影響

在0.20～5.00 mg·L-1 NAA范圍內，隨質量濃度增加，生根率顯著提高；當NAA質量濃度為5.00 mg·L-1時，生根率達到最高，為70.00%；而除5.00 mg·L-1 IBA處理外，其他質量濃度IBA處理間的生根率差異均不顯著。當NAA質量濃度為2.00 mg·L-1時，平均生根數為3.40，顯著高于其他處理，此時生根率為60.00%（表4、圖4）。以上結果表明，2.00 mg·L-1 NAA更適于玉露香梨組培苗生根。

2.5 暗培養時間對玉露香梨組培苗生根的影響

暗培養0、5、15 d處理間生根率、平均生根數均無顯著差異，但均顯著高于暗培養10、20 d處理。未經暗培養處理時，根系較粗壯；隨暗培養時間增加，根系變細，莖尖枯死率顯著增加，根部愈傷變大；暗培養20 d后，莖尖全部枯死，愈傷達到最大（表5、圖5）。以上結果表明，玉露香梨組培苗生根的培養條件為常規光培養，不適宜暗培養。

2.6 活性炭對玉露香梨組培苗生根的影響

隨活性炭質量濃度增加，玉露香梨組培苗生根率及生根數均顯著降低或減少，根部愈傷也變小；當活性炭質量濃度等于或高于1.0 g·L-1時，生根率及生根數均為0；當活性炭質量濃度為4.0 g·L-1時，無愈傷產生（表6）。0.5 g·L-1活性炭可使葉片變綠，但質量濃度高于1.0 g·L-1時，葉片開始變黃，部分出現褐化現象（圖6）。結果表明，活性炭對玉露香梨組培苗生根有顯著抑制作用。

2.7 玉露香梨組培生根苗馴化移栽

將生根誘導40 d的玉露香梨組培苗，于溫室馴化10 d后移栽至營養缽中。觀察發現，玉露香梨組培苗在移栽10 d后開始有死亡現象出現，隨著時間推移死亡增多，移栽60 d后，死亡情況趨于穩定，成活率為32.57%，存活的植株生長良好（圖7）。

3 討 論

3.1 基本培養基對玉露香梨組培苗生長的影響

基本培養基是繼代增殖及生根的關鍵因素，梨常用基本培養基有MS、NN69、1/2MS、WPM等[10-11]；其中，WPM有助于木本植物的生長和分化，在木本植物組織培養中較為常用[12]。本試驗通過對比MS、1/2MS、1/4MS、NN69、WPM等5種基本培養基，發現使用WPM的繁殖系數顯著高于其余4種培養基，但組培苗的玻璃化程度也顯著增高。郭靜等[13]報道，與MS相比，WPM培養基可顯著降低蘋果砧木G.11的玻璃化率，但在玉露香梨中得出了相反結果，具體原因有待進一步研究。

3.2 植物生長調節劑對玉露香梨組培苗繼代和生根的影響

植物生長調節劑對組培苗繼代增殖及生根有重要影響[14-16]。組培苗繼代增殖中常用激素為6-BA、NAA、IBA、IAA，其中6-BA常與NAA、IBA、IAA配合使用。筆者通過對比6-BA與NAA、IBA不同組合下玉露香梨的繼代增殖效果發現，當NAA的質量濃度為0.10 mg·L-1時，添加1.00 mg·L-1的6-BA才會對繼代增殖有顯著促進作用，添加低質量濃度（0.50 mg·L-1）或較高質量濃度（1.50～2.00 mg·L-1）6-BA時，繁殖系數均較低，不利于玉露香繼代擴繁。楊冠宇等[17]研究也發現，6-BA質量濃度過高或過低均不適宜杜梨7-4株系進行擴繁，當6-BA質量濃度為0.30～1.50 mg·L-1時，杜梨7-4株系組培苗生長正常，繁殖系數較高，均在3.90以上；當6-BA質量濃度降低到0.10～0.20 mg·L-1或提高到3.00 mg·L-1時，繁殖系數均降低。其他品種如西洋梨矮化砧木BA-29[18]、碭山酥梨[19]等也得出了相同的結論。筆者發現當6-BA質量濃度為1.00 mg·L-1時，添加0.10～2.00 mg·L-1 IBA或NAA均能促進玉露香梨組培苗繼代擴繁，但6-BA與0.10 mg·L-1NAA組合的擴繁效果要好于6-BA與不同質量濃度IBA處理的組合，因此適合玉露香梨繼代擴繁的激素種類為6-BA與NAA。前人報道適合津香蜜、巴梨、南果梨繼代擴繁的激素也為6-BA與NAA[20-21]。

組培生根常用激素為NAA、IBA、IAA，使用其中一種或兩種以上均可促進生根。筆者發現僅用NAA或IBA便可促進玉露香生根，IBA處理生根率最高為46.67%，NAA處理生根率可達70.00%。前人報道豐水梨、云南榅桲在僅添加NAA的生根培養基上也可生根，生根率分別為91.30%、62.50%[22-23]。

配合使用IBA、IAA也可促進生根，如巴梨在1/2MS+1.00 mg·L-1 IAA+1.00 mg·L-1 IBA生根培養基中生根率為56.70%，津香蜜在1/2MS+1.00 mg·L-1 IAA+3.00 mg·L-1 IBA中生根率為70.30%[20]，杜梨在1/2MS+2.00 mg·L-1 IAA+0.50 mg·L-1 IBA中生根率為86.70%[24]。NAA與IBA配合使用也有較好效果，如西洋梨矮化砧木BA-29在1/2MS+0.50 mg·L-1 NAA+0.50 mg·L-1 IBA中生根率為81.56%[18]。

3.3 影響玉露香梨組培苗生根的其他因素

光照強弱對梨組培苗生根有重要影響，湯浩茹等[25]發現前期適當暗培養可促進早酥和身不知生根；田海青[26]將新梨7號暗培養7 d后轉到光下常規培養，生根率達75.00%。而湯浩茹等[25]發現巴梨和考密斯等西洋梨在暗培養時，生根誘導效果較差；苗冉冉等[20]也發現暗培養對津香蜜和巴梨不定根誘導均無顯著促進作用，且會使組培苗出現細弱、枯尖現象。本試驗發現暗培養0～20 d對玉露香梨組培苗生根均無顯著促進作用，且隨暗培養時間增加，愈傷明顯增大，莖尖枯死現象加重。

一般來說，適當質量濃度活性炭有助于組培苗生根，如現代月季葉片再生植株添加0.1%活性炭可形成完整根系[27]；甜櫻桃組培苗添加1.0 g·L-1活性炭生根率可達100.00%[28]；黃金梨組培苗加入0.5 g·L-1活性炭后，生根率超過80.00%[29]；秋子梨添加1.0 g·L-1活性炭后生根率由45.50%提高到90.00%，平均生根條數由2.24提高到6.20，根系長度和植株表面積均顯著增加[30-31]。但也有研究表明活性炭會抑制組培苗生根，如0.5 g·L-1和1.0 g·L-1活性炭顯著抑制中矮1號組培苗生根[32]。本試驗發現，活性炭對玉露香組培苗生根有顯著抑制作用，當活性炭質量濃度為1.0～4.0 g·L-1時，生根率及生根數均為0。

4 結 論

適合玉露香梨組培苗繼代增殖的培養基配方為MS+1.00 mg·L-1 6-BA+0.10 mg·L-1 NAA，繁殖系數為3.57，平均有效新梢數為1.17；適合玉露香梨組培苗生根的培養基配方為1/2MS+2.00 mg·L-1 NAA，生根率為60.00%，平均生根條數為3.40；暗培養和添加活性炭均不適于玉露香梨組培苗生根。

參考文獻 References：

[1] 李昌珠，JIRI S，BLAZEK J. 不同基因型歐洲梨離體繁殖研究[J]. 果樹學報，2002，19（4）：227-230.

LI Changzhu，JIRI S，BLAZEK J. Studies on in vitro propagation of common pear （Pyrus communis Linn.） with different genotypes[J]. Journal of Fruit Science，2002，19（4）：227-230.

[2] 宋梅，王淑娟，劉振江，劉紅旗. 香梨、碭山梨組織培養及脫毒快繁技術[J]. 新疆農業科學，2003，40（6）：376-377.

SONG Mei，WANG Shujuan，LIU Zhenjiang，LIU Hongqi. Tissue culture and de-poison high-speed breeding technique of Fragrant pear and Dangshan pear[J]. Xinjiang Agricultural Sciences，2003，40（6）：376-377.

[3] 劉小芳，馮建榮，梁曉桐，呂文娟，李文慧，樊新民. 庫爾勒香梨組織培養的研究[J]. 山東農業科學，2016，48（5）：9-13.

LIU Xiaofang，FENG Jianrong，LIANG Xiaotong，Lü Wenjuan，LI Wenhui，FAN Xinmin. Research on tissue culture of Korla fragrant pear[J]. Shandong Agricultural Sciences，2016，48（5）：9-13.

[4] 段瑩瑩，田彩芳，宋宇琴，李六林，王旭. ‘中梨一號’離體培養與快速繁殖[J]. 北方果樹，2014（5）：7-9.

DUAN Yingying，TIAN Caifang，SONG Yuqin，LI Liulin，WANG Xu. In vitro culture and rapid propagation of ‘Zhongli 1’ pear[J]. Northern Fruits，2014（5）：7-9.

[5] 宗娟，朱立武，賈兵. 黃冠梨莖尖離體培養再生體系建立初探[J]. 廣東農業科學，2010，37（2）：51-53.

ZONG Juan，ZHU Liwu，JIA Bing. Primary study of regeneration system of pear cultivar ‘Huangguan’ stem apex by in vitro culture[J]. Guangdong Agricultural Sciences，2010，37（2）：51-53.

[6] 郭黃萍，李曉梅，張建功. 優質中熟紅梨新品種‘玉露香’（暫定名）[J]. 山西果樹，2001（1）：3-4.

GUO Huangping，LI Xiaomei，ZHANG Jiangong. A new variety of high-quality medium ripe red pear ‘Yuluxiang’ （tentative name）[J]. Shanxi Fruits，2001（1）：3-4.

[7] 謝鵬，蔚露，王紅寧，林琭，牛自勉. 不同產區玉露香梨果實品質特性綜合分析[J]. 果樹學報，2023，40（11）：2371-2380.

XIE Peng，YU Lu，WANG Hongning，LIN Lu，NIU Zimian. Comprehensive analysis on the fruit quality of Yuluxiang pear in different production areas[J]. Journal of Fruit Science，2023，40（11）：2371-2380.

[8] 于宛婷，王文輝，張鑫楠，閻維巍，孫曉楠，賈曉輝. 外源褪黑素對玉露香梨常溫貯藏品質和生理特性的影響[J]. 果樹學報，2023，40（8）：1583-1591.

YU Wanting，WANG Wenhui，ZHANG Xinnan，YAN Weiwei，SUN Xiaonan，JIA Xiaohui. Effects of exogenous melatonin on fruit quality and physiological characteristics during room temperature storage in Yuluxiang pear[J]. Journal of Fruit Science，2023，40（8）：1583-1591.

[9] 賈曉輝，王文輝，姜云斌，王志華，杜艷民，佟偉. 采收成熟度對‘玉露香’梨果實品質和耐貯性的影響[J]. 果樹學報，2016，33（5）：594-603.

JIA Xiaohui，WANG Wenhui，JIANG Yunbin，WANG Zhihua，DU Yanmin，TONG Wei. Effects of harvest maturity on fruit quality and storage life of ‘Yuluxiang’ pears[J]. Journal of Fruit Science，2016，33（5）：594-603.

[10] 葉宇，歐春青，王斐，張艷杰，馬力，楊冠宇，李佳純，姜淑苓. 梨組織培養研究進展及其在育種中的應用[J]. 中國果樹，2022（5）：1-7.

YE Yu，OU Chunqing，WANG Fei，ZHANG Yanjie，MA Li，YANG Guanyu，LI Jiachun，JIANG Shuling. Research progresses of tissue culture in pear and its application in breeding[J]. China Fruits，2022（5）：1-7.

[11] 王海燕. 農桿菌介導rolB基因轉化杜梨的研究[D]. 保定：河北農業大學，2014.

WANG Haiyan. The rolB gene transformation via agrobacterium tumefaciens mediated in pear rootstock ‘Pyrus betulifolia Bge.’[D]. Baoding：Hebei Agricultural University，2014.

[12] 王蒂，陳勁楓. 植物組織培養[M]. 2版. 北京：中國農業出版社，2013.

WANG Di，CHEN Jinfeng. Plant tissue culture[M]. 2nd ed. Beijing：China Agriculture Press，2013.

[13] 郭靜，柴慈江，史燕山，駱建霞，江文. 蘋果砧木G. 11試管苗增殖與生根培養研究[J]. 天津農學院學報，2019，26（4）：38-42.

GUO Jing，CHAI Cijiang，SHI Yanshan，LUO Jianxia，JIANG Wen. Micro shoot proliferation and rooting of apple rootstock G. 11[J]. Journal of Tianjin Agricultural University，2019，26（4）：38-42.

[14] 閆帥，徐鍇，袁繼存，程存剛，張少瑜，趙德英. 梨組織培養及遺傳轉化研究進展[J]. 中國果樹，2017（增刊1）：72-77.

YAN Shuai，XU Kai，YUAN Jicun，CHENG Cungang，ZHANG Shaoyu，ZHAO Deying. Review of pear regeneration and genetic transformation system[J]. China Fruits，2017（Suppl. 1）：72-77.

[15] JIN W M，WANG Y H，WANG H. Adventitious shoot regeneration from leaves of apple rootstock ‘Pingyitiancha’ （Malus hupehensis var. pinyiensis） and genetic fidelity of regenerated plantlets using SSR markers[J]. Canadian Journal of Plant Science，2014，94（8）：1345-1354.

[16] SAINI S，SHARMA I，KAUR N，PATI P K. Auxin：A master regulator in plant root development[J]. Plant Cell Reports，2013，32（6）：741-757.

[17] 楊冠宇，王斐，張艷杰，馬力，李佳純，歐春青，姜淑苓. 杜梨砧木組培擴繁技術研究[J]. 中國果樹，2022（6）：59-63.

YANG Guanyu，WANG Fei，ZHANG Yanjie，MA Li，LI Jiachun，OU Chunqing，JIANG Shuling. Study on tissue culture propagation technology of Pyrus betulifolia rootstocks[J]. China Fruits，2022（6）：59-63.

[18] 王蘇珂，楊健，王龍，周厚成，李秀根. 西洋梨矮化砧木BA-29的組培快繁技術研究[J]. 果樹學報，2010，27（6）：1002-1005.

WANG Suke，YANG Jian，WANG Long，ZHOU Houcheng，LI Xiugen. Studies on tissue culture and rapid propagation of dwarf rootstock BA-29 of European pear[J]. Journal of Fruit Science，2010，27（6）：1002-1005.

[19] 金青，蔡永萍. ‘碭山酥梨’的組織培養和脫毒快速繁殖[J]. 植物生理學通訊，2006，42（5）：900.

JIN Qing，CAI Yongping. Tissue culture and rapid propagation of Pyrus bretschneideri Rehd.[J]. Plant Physiology Communications，2006，42（5）：900.

[20] 苗冉冉，喬月蓮，吳沅洙，王莉，師校欣，杜國強. ‘津香蜜’和‘巴梨’組織培養快速繁殖[J]. 分子植物育種，2019，17（7）：2297-2302.

MIAO Ranran，QIAO Yuelian，WU Yuanzhu，WANG Li，SHI Xiaoxin，DU Guoqiang. Rapid propagation of ‘Jinxiangmi’ and ‘Bartlett’ pear by tissue culture[J]. Molecular Plant Breeding，2019，17（7）：2297-2302.

[21] 陳麗靜，于春葉，李浩戈，張麗，鐘鳴，馬慧. 南果梨莖尖離體快繁技術研究[J]. 中國農學通報，2011，27（31）：168-173.

CHEN Lijing，YU Chunye，LI Haoge，ZHANG Li，ZHONG Ming，MA Hui. Rapid propagation of Pyrus ussuriensis Maxin. by shoot tip culture[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin，2011，27（31）：168-173.

[22] 侯修勝. 豐水梨試管快速繁殖技術研究[J]. 河北林業科技，2003（1）：1-2.

HOU Xiusheng. Study on the tube rapid propagation techniques of ‘Hosui’ pear[J]. Journal of Hebei Forestry Science and Technology，2003（1）：1-2.

[23] 徐凌飛，李致慧，賈東峰，李慧. 梨矮化砧木云南榅桲離體快繁研究[J]. 北方園藝，2012（5）：113-115.

XU Lingfei，LI Zhihui，JIA Dongfeng，LI Hui. Study on in vitro propagation of Yunnan quince as a dwarf rootstock of pear[J]. Northern Horticulture，2012（5）：113-115.

[24] 閆帥，張少瑜，徐鍇，袁繼存，李曉光，周江濤，程存剛，趙德英. 杜梨組培生根過程中多胺、內源激素及相關氧化酶活性的變化[J]. 果樹學報，2019，36（3）：318-326.

YAN Shuai，ZHANG Shaoyu，XU Kai，YUAN Jicun，LI Xiaoguang，ZHOU Jiangtao，CHENG Cungang，ZHAO Deying. Dynamic changes in polyamines，endogenous hormones and oxidase activities during rooting of in vitro plantlets of Pyrus betulifolia Bunge[J]. Journal of Fruit Science，2019，36（3）：318-326.

[25] 湯浩茹，劉翠瓊，羅婭，王小蓉. 培養基和培養條件對4個梨基因型試管苗生根的影響[J]. 果樹學報，2006，23（2）：283-286.

TANG Haoru，LIU Cuiqiong，LUO Ya，WANG Xiaorong. Effects of media and cultural conditions on the rooting ability in vitro of 4 genotypes of Pyrus spp.[J]. Journal of Fruit Science，2006，23（2）：283-286.

[26] 田海青. 新梨7號梨組培快繁體系建立及微嫁接技術的研究[D]. 保定：河北農業大學，2014.

TIAN Haiqing. Study on establishment of rapid propagation system and micrografting of the pear cultivar Xinli Pear 7[D]. Baoding：Hebei Agricultural University，2014.

[27] 任桂芳，王建紅，馮慧，李毅，李燕，施雪波. 現代月季（Rosa hybrida）葉片植株再生體系的建立[J]. 園藝學報，2004，31（4）：533-536.

REN Guifang，WANG Jianhong，FENG Hui，LI Yi，LI Yan，SHI Xuebo. Establishment of plant regeneration from leaves explants of Rosa hybrida[J]. Acta Horticulturae Sinica，2004，31（4）：533-536.

[28] 韓文璞，袁明蓮. 活性炭在甜櫻桃組織培養中的應用[J]. 落葉果樹，2001，33（3）：7-8.

HAN Wenpu，YUAN Minglian. Application of active carbon in tissue culture of sweet cherry[J]. Deciduous Fruits，2001，33（3）：7-8.

[29] 王獻革，及華，王利民. 黃金梨的組織培養和快速繁殖[J]. 植物生理學通訊，2003，39（6）：621.

WANG Xiange，JI Hua，WANG Limin. Tissue culture and rapid propagation of Pyrus pyrifolia cv. Whangkumbe[J]. Plant Physiology Communications，2003，39（6）：621.

[30] 王德芬，張梅，李鼎立，王然，馬春暉，宋健坤. 秋子梨葉片高效再生體系的構建[J]. 北方園藝，2016（4）：97-101.

WANG Defen，ZHANG Mei，LI Dingli，WANG Ran，MA Chunhui，SONG Jiankun. Establishment of high efficient regeneration system of Pyrus ussuriensis leaves[J]. Northern Horticulture，2016（4）：97-101.

[31] 欒曉龍，史昊，許波，張倩男，劉莉. 活性炭對秋子梨組培幼苗生根的影響[J]. 分子植物育種，2023，21（2）：589-593.

LUAN Xiaolong，SHI Hao，XU Bo，ZHANG Qiannan，LIU Li. Effect of activated carbon on rooting of tissue culture seedlings of Qiuzi pear（Pyrus ussuriensis Maxim.）[J]. Molecular Plant Breeding，2023，21（2）：589-593.

[32] 王藝衡，馮靜涵，于春亮，李濤，李金斗，趙健霄，張海霞，張玉星，馬輝，許建鋒. 梨矮化砧木中矮1號組培快繁技術研究[J]. 山東農業科學，2023，55（6）：32-41.

WANG Yiheng，FENG Jinghan，YU Chunliang，LI Tao，LI Jindou，ZHAO Jianxiao，ZHANG Haixia，ZHANG Yuxing，MA Hui，XU Jianfeng. Study on tissue culture and rapid propagation technology of pear dwarfing rootstock Zhong’ai 1[J]. Shandong Agricultural Sciences，2023，55（6）：32-41.