離子對-HPLC法測定磷霉素鈣分散片主藥含量

摘要：為了采用離子對-HPLC方法測定出磷霉素鈣分散片中的藥物物質含量，先進行物質試劑和要素測定試劑的制備，構建色譜測定條件，同時進行藥物質量分數標準曲線的繪制，采用重復性實驗的方式測算出磷霉素鈣分散片中藥物物質的檢測限和定量限，與設定的基礎指標對比，檢測其準確度和穩定度，最終獲取對應的主藥物含量。結果表明：在相同的測定環境下，分析出主藥種類分別為磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關藥物，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。該方法的溶出分析重現性好，最大程度避免出現含量測定的偏差，標示量與準確度較高，具有實際的應用價值。

關鍵詞：離子對；離子對-HPLC法；磷霉素；鈣分散片；藥量檢測

中圖分類號：R917.4文獻標志碼：A 文章編號：1004-0935（2025）02-0352-04

磷霉素是一種通過防止肽聚糖定向合成來達到抗菌、抑菌效果的抗生素，其化學結構及抑菌機制較為特殊[1]。市面上最常見的磷霉素藥物就是磷霉素鈣分散片。為了測定分析出磷霉素分散片內部的藥物含量，綜合實際的測定需求及標準，采用離子對-HPLC法完成測定，并進行定向驗證與分析。所謂離子對-HPLC法通常指的是一種定向的單目標色譜測定方式，在實際測定的過程中可利用檢測裝置對溶液中的離子數量及濃度進行分離研究[2]。將其應用在磷霉素鈣分散片主藥含量的測定之中，可一定程度上提升測定數據的穩定性。

1實驗準備

1.1材料準備

根據實際的測試需求及標準，首先進行基礎測試材料的準備，并搭建基礎的測試環境。準備實驗用蒸餾水、磷霉素氨丁三醇對照品（確保質量分數在99.56%以上）、冰乙酸、正辛胺乙腈（確保自身的純度，可以提升實驗結果的精準與穩定）、磷霉素二醇物對照品、三氟乙酸以及磷霉素鈣分散片測試樣本[3]。

完成材料準備之后，接下來需要搭接、安裝專業的處理儀器。先選取多環境高效液相色譜儀、實驗用蒸餾裝置、光度轉換檢測裝置和檢測器，在同等的環境下設置一個Synergi 4 μm Fusion-RP 80A色譜柱作為測定的比照標準[4]，至此完成對測試材料及儀器的準備。

1.2實驗布置

根據色譜柱的變化情況，進行基礎性的實驗布置。首先需要設定具體的色譜條件[5]。色譜柱設定為PrevailC18，配制出對應的輔助溶液，設定對應的吸收峰值標準，同時設定最大波長的檢測值，測定出具體的響應值。在輔助溶液中增加正辛胺，振搖使其溶解，隨后采用冰醋酸調節溶液的pH[6]。此時，依據實際的測定需求及標準，設定色譜的檢測條件，同時測算出具體的質量分數檢測偏差，如公式（1）所示。

（1）

式中：H—質量分數檢測偏差；

α—溶解總量；

—pH溶出度；

i—檢測次數；

δ—色譜變動值；

σ—定向波長。

根據上述測定，完成對質量分數檢測偏差的測算。將獲取的質量分數檢測偏差設定為基礎的藥量質量分數檢測標準，同時根據離子對-HPLC法設定對應的線性測定范圍[7]。

將測試所用樣本藥物搗碎，加入適量蒸餾水，在特定的環境下，將溶出介質逐漸稀釋為每1 mL含30 mg的測試樣本，分置于10 mL測試量瓶中，二次稀釋后搖勻，注入色譜儀[8]。測定出此時的定向藥物標準質量濃度，完成基礎性的實驗布置，接下來，綜合測定需求及標準，進行具體的測驗分析。

2實驗方法與過程

根據上述搭建的測試環境以及測定需求，綜合實際的目標，采用離子對-HPLC法對磷霉素鈣分散片的主藥質量分數進行測試驗證。首先，需要配制質量分數測定試劑和要素測定試劑[9]。采用專業的設備及裝置，稱取適量的磷霉素氨丁三醇對照品，并在內部加入適量的蒸餾水，靜置1 h后，加入10 mmol·L-1的正辛胺-乙腈，在反應的過程中需要采用冰乙酸進行合理調節，確保后續應用測試的穩定性和安全性。測定出此時試劑的pH，如果達到3.0以上，便表明試劑溶液被較好地溶解并稀釋成含磷霉素鈣元素的儲備液。此時，將儲備液分別置于不同的量瓶中，根據實際測定需求及標準的變化，向量瓶中增加溶劑稀釋，靜置0.5 h后，采用霧化處理的方式檢測溶液的定向質量濃度，作為測試的溶液。此外，以此為基礎還需要將供試品溶液加入三氟乙酸，促使其質量濃度可以達到預設水平，一般控制在0.5～1.0 mg·mL-1即可。

在此基礎之上，進行要素測定試劑的配制。這部分主要是為了分離磷霉素鈣分散片中藥物物質所設計的環節。首先，根據實際的測定分解需求，綜合離子對-HPLC法，先測定出樣本試劑中磷霉素二醇物對照品的質量分數，在其中增加適量的正辛胺乙腈，測定其此時的質量濃度，形成混合試劑之后，加入適量蒸餾水，完成基礎性測試試劑的制備。此時，在不同的溫度環境作用下，測算出磷霉素鈣質量濃度，如公式（2）所示。

（2）

式中：P—磷霉素鈣質量濃度；

g—預設定位偏差；

t—對照標準；

φ—吸收峰值；

e—定位次數；

—溶解量。

根據測算得出的磷霉素鈣質量濃度值，設定對應的藥物物質分離標準。綜合離子對-HPLC法，進行色譜條件的調節，色譜條件調節設定表如表1所示。

根據表1完成對色譜條件的調節與設定。此時，利用冰乙酸將溶液中的pH逐步調節到靠近4.8的程度，同時對此時的溶液進行霧化處理，設定霧化的氣流量為1.5 L·min-1。但是這部分需要注意的是，色譜條件的設置并不是固定的，可以依據測定需求及標準的變化進行調整，具有較強的靈活性。因此，在不同的溫度狀態下，利用離子對-HPLC法，對試劑溶液中的藥物物質測定，同時與初始設定的色譜進行對比研究，結果如圖1所示。

根據圖1完成對磷霉素鈣藥物HPLC譜的測定分析。隨后，綜合設計的色譜變化狀態，設定對應的藥物物質檢測標準。利用離子對-HPLC法，測定計算出此時磷霉素鈣分散片的磷霉素氨丁三醇的具體質量分數及質量濃度，依據色譜圖的記錄，對峰面積（ A ）與質量濃度（c）進行定向線性測定，最終繪制出標準的藥物質量分數曲線。

此時，可以采用重復性實驗的方式對磷霉素鈣分散片中的主藥質量分數進行測定驗證。將磷霉素鈣分散片的溶液實際以每一份10 mL分裝在量瓶中，共分為4份進行測定。基礎測定指標數值設定表如表2所示。

根據表2完成對基礎測定指標數值的設定。接下來，根據上述設定對基礎的測試環境作出調整，與此同時有針對性地設定相關的藥物質量分數測定標準，測定出定量限。此時，磷霉素鈣分散片中的正辛胺質量濃度為23 mg·mL-1，與初始設定的標準相對比，進行測定偏差的計算。在上述的測試環境下，進行藥物質量分數測定準確度的測試。這部分可以先對測定的樣本溶液進行合理稀釋，測定出內部的藥物種類及具體的質量分數，為（96.8±0.5）%和（0.25±0.003）%（n= 6）。與基礎測定方式所獲取的測試結果保持一致。

在制備的藥品溶劑中加入適量的三氟乙酸，靜置2 h，并將保持的溫度調整至30 ℃。最終獲得以下的結果磷霉素鈣主藥物質總量的RSD分別為0.6%和1.1%（n=4），且質量濃度為0.8、25 mg·mL-1。此時，分別測算得出磷霉素鈣分散片中磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及有關物質總量的質量分數，如公式（3）所示。

（3）

式中：M—測定藥物質量分數；

—試劑總量，

z—溶液偏差；

s1、s2—預設質量濃度值和實際質量濃度值。

依據此，逐步測算出主藥物質的對應質量分數，如表3所示。

由表3可以看出，磷霉素鈣分散片內部的主藥物質基本可以判定為磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關藥物，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。依據獲取的數值信息，對測試得出的結果比照分析。

3討 論

利用離子對-HPLC法，對磷霉素鈣分散片中的主藥質量分數進行測定，得知該藥物由磷霉素鈣、磷霉素鈣二醇物以及相關藥物構成，占比分別為85.2%、9.3%和5.5%。采用色譜比照的方式驗證測定，對藥物進行溶出分析，整個測定過程環節十分精準簡單，重現性好，利用標準曲線的限制，最大程度避免出現質量分數測定的偏差。得出的質量分數與設定的標準基本保持一致，說明對磷霉素鈣分散片主藥質量分數的標示量與準確度較高，具有實際的應用價值。

4結 論

與傳統的測定方法相對比，離子對-HPLC法的測定范圍以及精度相對較高，同時測定過程較為簡單，可以加強對測定誤差的控制，確保最終測試結果的真實性與可靠性。與此同時，離子對-HPLC法的測定環節以及測定結構也更為科學、合理，對磷霉素鈣分散片內部藥物的提取、分離也更加明確，對于內置物質不會造成過多的損壞，建立更為穩定、靈活的測定結構，為后續的測定分析工作奠定基礎環境。

參考文獻：

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Determination of Main Drug Content of Fosfomycin Calcium Dispersible Tablet by Ion-Pair HPLC

HAO Peina， LIAN Weiwei， MA Zhihuan

（Zhengzhou University of Industry Technology， Zhengzhou Henan 451100， China）

Abstract： In order to determine the content of fosfomycin calcium dispersible tablets by ion-pair HPLC， substance reagent and element determination reagent were prepared， chromatographic determination conditions were established， and the standard curve of drug content was drawn. The detection limit and quantitation limit of drug substances in fosfomycin calcium dispersible tablets were calculated by means of repetitive experiments. The accuracy and stability of the detector were compared with the set basic indicators， and the corresponding main drug content value was finally obtained. The results showed that under the same determination environment， the main drug types were fosfomycin calcium， fosfomycin calcium glycols and related drugs， accounting for 85.2%， 9.3% and 5.5% respectively. This method had good reproducibility and avoided the deviation of content determination to the greatest extent. The labeling quantity and accuracy were high， having practical application value.

Key words： Ion pair; Ion pair HPLC method; Fosfomycin; Calcium dispersible tablets; Dosage detection