miR-1184對(duì)幽門螺桿菌感染胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

［摘要］" 目的： 探討微小RNA-1184（miR-1184）對(duì)幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染MGC-803細(xì)胞增殖、遷移和炎癥的影響。方法： 應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-1184在Hp感染MGC-803細(xì)胞中的表達(dá)情況，將MGC-803細(xì)胞分為模擬物對(duì)照組（miR-NC組）、miR-1184模擬物組（miR-1184組）、Hp感染組（miR-NC+Hp組）、miR-1184模擬物聯(lián)合Hp感染組（miR-1184+Hp組）、抑制劑對(duì)照組（In-NC組）和miR-1184抑制劑組（anti-miR-1184組）；采用CCK-8實(shí)驗(yàn)、平板克隆實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)miR-1184和Hp感染對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、遷移和相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果： 與未感染組相比，Hp感染MGC-803細(xì)胞后引起細(xì)胞病變效應(yīng)，miR-1184表達(dá)水平降低（Plt;0.01）。與miR-NC組相比，miR-1184組MGC-803細(xì)胞活性降低，平板克隆形成能力降低，G1期細(xì)胞增多、S期和G2期減少，劃痕愈合能力減弱，可上調(diào)E-鈣黏蛋白表達(dá)水平、降低N-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)水平，抑制上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）進(jìn)程（Plt;0.05或Plt;0.01）。與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組抑制MGC-803細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、遷移能力和EMT進(jìn)程（Plt;0.05或Plt;0.01）。與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組降低MGC-803細(xì)胞中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表達(dá)水平，抑制NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白表達(dá)比例（Plt;0.05）。抑制miR-1184則促進(jìn)MGC-803細(xì)胞的增殖、周期、遷移和EMT進(jìn)程（Plt;0.05或Plt;0.01）。結(jié)論： miR-1184在Hp感染胃癌細(xì)胞中表達(dá)下降，高表達(dá)miR-1184可逆轉(zhuǎn)Hp感染對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移能力和炎癥反應(yīng)的影響。

［關(guān)鍵詞］" miR-1184；幽門螺桿菌；胃癌；細(xì)胞周期；遷移；NF-κB

［中圖分類號(hào)］" R735.2" ［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］" A" ［文章編號(hào)］" 1671-7783（2025）02-0125-08

DOI： 10.13312/j.issn.1671-7783.y240198

［引用格式］蔣顏材， 姚鎮(zhèn)東， 王秀平， 等. miR-1184對(duì)幽門螺桿菌感染胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響［J］. 江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2025， 35（2）： 125-132.

［基金項(xiàng)目］國(guó)家資助博士后研究人員計(jì)劃（GZC20230992）；江蘇省卓越博士后計(jì)劃（2023ZB180）；無錫市衛(wèi)生健康委員會(huì)青年基金資助項(xiàng)目（Q202062）；宜興市衛(wèi)生健康委員會(huì)重大項(xiàng)目（YXKY202209）；江蘇大學(xué)醫(yī)教協(xié)同重點(diǎn)項(xiàng)目（JDY2023013）

［作者簡(jiǎn)介］蔣顏材（1988—），男，主治醫(yī)師，主要從事胃癌的基礎(chǔ)研究；紀(jì)筠（通訊作者），副主任護(hù)師，E-mail： staff6076@yxph.com

Effect of miR-1184 on biological behavior of gastric cancer cells infected by Helicobacter pylori

JIANG Yancai1， YAO Zhendong2， WANG Xiuping3， LIU Yun2， SHAO Shihe2， JI Yun4

（1. Department of General Surgery， Yixing Hospital Affiliated to Jiangsu University， Yixing Jiangsu 214206; 2. Department of Gastroenterology， Yixing Hospital Affiliated to Jiangsu University， Yixing Jiangsu 214206; 3. Department of Clinical Laboratory， Kunshan Hospital Affiliated to Jiangsu University， Kunshan Jiangsu 215301; 4. Endoscopy Center， Yixing Hospital Affiliated to Jiangsu University， Yixing Jiangsu 214206， China）

［Abstract］" Objective： To investigate the expression of microRNA-1184 （miR-1184） in MGC-803 cells infected by Helicobacter pylori （Hp）， and its effects on the proliferation， metastasis and inflammation of MGC-803 cells infected by Hp. Methods： Fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of miR-1184 in Hp-infected MGC-803 cells. MGC-803 cells were divided into control group （miR-NC group）， miR-1184 mimics group （miR-1184 group）， Hp infection group （miR-NC+Hp group）， miR-1184 mimics combined with Hp infection group （miR-1184+Hp group）， inhibitor control group （In-NC group） and miR-1184 inhibitor group （anti-miR-1184 group）. The effects of miR-1184 and Hp infection on the proliferation， cell cycle， metastasis and expression levels of related proteins of gastric cancer cells were detected by CCK-8 assay， colony formation assay， cell cycle assay， Transwell assay， wound healing assay and Western blotting assay. Results： Compared to the uninfected group， Hp infected MGC-803 cells produced cytopathic effect， and decreased the expression of miR-1184 （Plt;0.01）. After transfection of miR-1184 mimics in MGC-803 cells， miR-1184 expression increased， cell activity decreased， colony formation ability decreased， G1 phase cells increased， S phase and G2 phase decreased， and wound healing ability decreased. In addition， miR-1184 mimics up-regulated the expression level of E-cadherin， decreased the expression level of N-cadherin and Vimentin， inhibited the process of epithelial-mesenchymal transformation （EMT） （Plt;0.05 or Plt;0.01）. Compared with miR-NC+Hp group， miR-1184+Hp group inhibited MGC-803 cell proliferation， cell cycle， migration ability and EMT effects （Plt;0.05 or Plt;0.01）. Compared with miR-NC+Hp group， miR-1184+Hp group decreased the mRNA expression of TNF-α， IL-1β， IL-6 and IL-8 in MGC-803 cells， and inhibited the proportion of NF-κB p-p65/NF-κB p65 protein expression （Plt;0.05）. Furthermore， miR-1184 inhibitors promoted the proliferation， cell cycle， cell transfer and EMT process of MGC-803 cells （Plt;0.05 or Plt;0.01）. Conclusion： The expression of miR-1184 is decreased in Hp-infected gastric cancer cells， and the high expression of miR-1184 reversed the effects of Hp infection on the proliferation， migration and inflammatory response of gastric cancer cells.

［Key words］" miR-1184; Helicobacter pylori; gastric cancer; cell cycle; migration; NF-κB

胃癌是常見的惡性腫瘤，發(fā)病率居全球癌癥第5位，致死率居第4位［1］。幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）經(jīng)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)認(rèn)定為I類致癌物，Hp感染與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2-3］。研究表明，Hp感染可導(dǎo)致TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8、NF-κB等炎癥因子增加，在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用［4-5］。

微小RNA（miRNA）是一類內(nèi)源性、單鏈、短而高度保守的非編碼RNA。大量研究表明，miR-155、miR-124-3p、miR-146a和miR-509-3p等miRNA均在Hp感染相關(guān)胃癌進(jìn)展中發(fā)揮重要作用［6-9］。已有研究發(fā)現(xiàn)miR-1184在胃癌組織和細(xì)胞系中低表達(dá)，影響胃癌細(xì)胞增殖和遷移［10］，但其在Hp感染相關(guān)胃癌進(jìn)展過程中的作用尚不明確。本研究檢測(cè)Hp感染對(duì)胃癌細(xì)胞中miR-1184表達(dá)的影響，探討miR-1184在Hp感染胃癌中潛在的生物學(xué)作用。

1" 材料和方法

1.1 "細(xì)胞系和菌株

人胃癌細(xì)胞系MGC-803購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。幽門螺桿菌ATCC 26695菌株由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心的張建中教授饋贈(zèng)，保存于江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究所。

1.2" 主要試劑和儀器

DMEM、胎牛血清（美國(guó)Hyclone公司）；胰蛋白酶消化液、Trizol、轉(zhuǎn)染試劑和Transwell小室（美國(guó)Thermo Fisher公司）；哥倫比亞血瓊脂平板（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）；微需氧產(chǎn)氣袋（日本三菱GAS化學(xué)公司）；miR-1184模擬物和陰性對(duì)照，miR-1184抑制劑和陰性對(duì)照（吉瑪制藥技術(shù)公司）。兔抗人E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白、波形蛋白、NF-κB p65抗體和HRP標(biāo)記羊抗兔IgG單克隆抗體（美國(guó)CST公司）；NF-κB p-p65抗體和Annexin-V/PI周期試劑盒（萬(wàn)類生物公司）；GAPDH抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）；逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）試劑盒、CCK-8細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒（南京諾唯贊生物科技有限公司）；RIPA和PMSF（碧云天公司）。倒置顯微鏡（日本Nikon公司），CO2培養(yǎng)箱（德國(guó)Eppendorf公司），qRT-PCR儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司），生物安全柜（新加坡ESCO公司），蛋白質(zhì)印跡垂直蛋白電泳儀（美國(guó)Bio-Rad公司），化學(xué)發(fā)光成像儀（美國(guó)通用電氣醫(yī)療集團(tuán)），F(xiàn)Lx800熒光發(fā)光酶聯(lián)儀（美國(guó)Biotek公司）。

1.3" 細(xì)胞和Hp培養(yǎng)

DMEM中加入10%胎牛血清和1%青霉素鏈霉素培養(yǎng)人胃癌MGC-803細(xì)胞，置于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。ATCC 26695菌株接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，置于含微需氧產(chǎn)氣袋（5% O2、10% CO2、85% N2）的培養(yǎng)罐中，37 ℃培養(yǎng)3 d，傳代培養(yǎng)。

1.4" 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及與Hp共培養(yǎng)

分別將miR-1184模擬物和抑制劑轉(zhuǎn)染入MGC-803細(xì)胞，過表達(dá)和抑制miR-1184，以感染復(fù)數(shù)為100感染Hp 8 h，將MGC-803細(xì)胞分為模擬物對(duì)照組（miR-NC組）、miR-1184模擬物組（miR-1184組）、Hp感染組（miR-NC+Hp組）、miR-1184模擬物聯(lián)合Hp感染組（miR-1184+Hp組）、抑制劑對(duì)照組（In-NC組）和miR-1184抑制劑組（anti-miR-1184組）。轉(zhuǎn)染和Hp感染后，應(yīng)用qRT-PCR檢測(cè)miR-1184表達(dá)水平，確認(rèn)轉(zhuǎn)染成功后將細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5" RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及qRT-PCR

用Trizol裂解、氯仿異丙醇提取各組細(xì)胞總RNA。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑說明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，樣本置于-20 ℃保存。qRT-PCR反應(yīng)體系：cDNA模板0.5 μg，上、下游引物（10 μmol/L）各0.3 μL，SYBR Green Master Mix 5 μL，雙蒸水補(bǔ)足至10 μL；qRT-PCR反應(yīng)程序：95 ℃ 5 min，95 ℃ 5 s、60 ℃ 20 s、72 ℃ 10 s，共45個(gè)循環(huán)。每組樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)對(duì)照。miR-1184以U6作為內(nèi)參基因（miR-1184/U6），TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8以GAPDH作為內(nèi)參基因（目的基因/GAPDH）對(duì)結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，以2-ΔΔCt法進(jìn)行分析。應(yīng)用NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)查詢?nèi)嗽磎iR-1184、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和U6、GAPDH序列，所有引物均由上海生工公司合成（表1）。

1.6" CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)能力

取轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞（1×103/孔）接種于96孔板，分別在第1、2、3天向每孔加入100 μL 10% CCK-8完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)1 h。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450 nm處測(cè)定各孔的光密度（D）值，繪制生長(zhǎng)曲線圖。

1.7" 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌MGC-803細(xì)胞克隆能力

轉(zhuǎn)染細(xì)胞用胰酶消化后完全培養(yǎng)基重懸，制成細(xì)胞懸液并計(jì)數(shù)；將1×103個(gè)/孔細(xì)胞接種于6孔板中，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10～14 d，直至形成肉眼可見的細(xì)胞集落；棄去培養(yǎng)基，PBS洗滌2次；4%多聚甲醛固定30 min；PBS洗滌2次；0.1%結(jié)晶紫染色15 min，洗去結(jié)晶紫后晾干。拍照并計(jì)算克隆形成數(shù)。

1.8" Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌MGC-803細(xì)胞遷移能力

取轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞，胰酶消化后用無血清培養(yǎng)基重懸并計(jì)數(shù)后備用；Transwell小室放置在24孔上，下室加入600 μL完全培養(yǎng)基，上室加入約5×104個(gè)細(xì)胞重懸在無血清培養(yǎng)基中，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)24 h后取出小室，用棉簽輕輕擦去上室未遷移細(xì)胞；4%多聚甲醛固定30 min；PBS洗滌2次，結(jié)晶紫染色30 mim；PBS洗滌后室溫干燥。顯微鏡隨機(jī)選擇5個(gè)視野拍照，用Image J計(jì)數(shù)各組細(xì)胞。

1.9" 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌MGC-803細(xì)胞遷移速度

取轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞，用10 μL槍頭沿著直尺在6孔板中垂直劃痕；PBS洗滌3次，加入2 mL無血清培養(yǎng)基，分別于0、24 h在相同位置用光學(xué)顯微鏡拍照，根據(jù)細(xì)胞劃痕愈合率計(jì)算細(xì)胞遷移速度。

1.10" 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胃癌MGC-803細(xì)胞周期變化

轉(zhuǎn)染后細(xì)胞用胰酶消化后1 000 r/min離心5 min，PBS重懸調(diào)整細(xì)胞密度為1×106個(gè)/mL，收集細(xì)胞，加入1 mL 70%預(yù)冷乙醇固定過夜。離心后用預(yù)冷PBS洗去固定液，重復(fù)2次，PBS重懸后加入100 μL RNA酶A，37 ℃水浴30 min，加入500 μL PI染色液混勻，4 ℃避光染色30 min后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

1.11" 蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌MGC-803細(xì)胞中相關(guān)蛋白表達(dá)水平

轉(zhuǎn)染后細(xì)胞加入100 μL含1% PMSF的RIPA裂解各組細(xì)胞，冰上裂解30～40 min后13 000 r/min離心30 min；收集上清液加入蛋白上樣緩沖液，100 ℃煮沸10 min。應(yīng)用SDS-PAGE分離蛋白，60 V電泳30 min，100 V電泳90 min；350 mA轉(zhuǎn)膜120 min。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后用5%脫脂奶粉室溫封閉1～2 h；分別用兔抗人E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白、波形蛋白和NF-κB p65抗體（1∶500稀釋）、NF-κB p-p65抗體（1∶500稀釋）以及兔抗人GAPDH抗體（1∶12 000稀釋）4 ℃搖床孵育過夜。TBST洗膜3次，加入HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體（1∶1 000稀釋）室溫孵育1 h。TBST洗膜3次，ECL顯色后保存圖像。Image J軟件分析條帶灰度值，計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)量，目的蛋白相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白掃描值/GAPDH蛋白掃描值。

1.12" 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料均符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差分析比較多組之間的差異性，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1" Hp感染對(duì)胃黏膜細(xì)胞形態(tài)和miR-1184表達(dá)水平的影響

Hp感染MGC-803細(xì)胞后，隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞逐漸變圓、邊緣模糊，具有明顯的病變效應(yīng)。qRT-PCR結(jié)果顯示，與未感染組相比，Hp感染MGC-803細(xì)胞8 h后miR-1184表達(dá)水平明顯降低（Plt;0.01）。見圖1。

2.2" miR-1184對(duì)Hp感染胃癌細(xì)胞增殖能力的影響

與In-NC組相比，anti-miR-1184組miR-1184表達(dá)水平降低（Plt;0.05）；與miR-NC組相比，miR-1184組中miR-1184表達(dá)水平明顯上調(diào)，miR-NC+Hp組miR-1184表達(dá)水平降低（P均lt;0.01）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組miR-1184表達(dá)水平上調(diào)（Plt;0.01）。見圖2。

CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與In-NC組相比，anti-miR-1184組MGC-803細(xì)胞活力第3天明顯增強(qiáng)（Plt;0.05）；與miR-NC組相比，miR-1184組MGC-803細(xì)胞活力明顯減弱（Plt;0.01）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組中MGC-803細(xì)胞活力明顯減弱（Plt;0.01）。見圖3。

平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與In-NC組相比，anti-miR-1184組細(xì)胞克隆形成率明顯升高（Plt;0.05）；與miR-NC組相比，miR-1184組MGC-803細(xì)胞克隆形成率顯明降低，miR-NC+Hp組細(xì)胞克隆形成率明顯升高、體積較大（P均lt;0.01）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組MGC-803細(xì)胞克隆形成率明顯降低（Plt;0.01）。見圖4。

2.3" miR-1184和Hp對(duì)MGC-803細(xì)胞周期的影響

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與In-NC組相比，anti-miR-1184組細(xì)胞G1期比例明顯降低（Plt;0.01）、S期和G2期比例明顯升高（Plt;0.05，Plt;0.01）。與miR-NC組比，miR-1184組G1期比例明顯升高、S期和G2比例明顯降低（P均lt;0.05），miR-NC+Hp組細(xì)胞G1期比例明顯降低（Plt;0.01）、S期和G2比例明顯升高（Plt;0.01，Plt;0.05）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組細(xì)胞G1期比例明顯升高，S期和G2比例明顯降低（P均lt;0.05）。見圖5。

2.4" miR-1184對(duì)Hp感染胃癌細(xì)胞遷移的影響

劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與In-NC組相比，anti-miR-1184組促進(jìn)細(xì)胞的劃痕愈合能力（Plt;0.05）；與miR-NC組相比，miR-1184組MGC-803細(xì)胞劃痕愈合能力減弱，miR-NC+Hp組細(xì)胞劃痕愈合能力增強(qiáng)（P均lt;0.05）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組細(xì)胞劃痕愈合能力減弱（Plt;0.05）。見圖6。

Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與In-NC組相比，anti-miR-1184組細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)（Plt;0.05）；與miR-NC組相比，miR-1184組細(xì)胞遷移能力減弱（Plt;0.01），miR-NC+Hp組細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)（Plt;0.05）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組細(xì)胞遷移能力減弱（Plt;0.01）。見圖7。

蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，與In-NC組相比，anti-miR-1184組E-鈣黏蛋白表達(dá)水平降低，N-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)水平升高（P均lt;0.01）。與miR-NC組相比，miR-1184組MGC-803細(xì)胞中E-鈣黏蛋白表達(dá)水平升高、N-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)水平降低，EMT進(jìn)程抑制（P均lt;0.01），miR-NC+Hp組促進(jìn)EMT進(jìn)程（Plt;0.05）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組細(xì)胞N-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)水平降低（P均lt;0.01）。見圖8。

2.5" miR-1184對(duì)Hp感染細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響

與miR-NC組相比，miR-1184組MGC-803細(xì)胞中IL-1β mRNA水平降低（Plt;0.05），miR-NC+Hp組TNF-α和IL-1β的mRNA表達(dá)量上調(diào)（Plt;0.05）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組MGC-803細(xì)胞中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA水平明顯降低（Plt;0.05或Plt;0.01）。見圖9。

蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，與In-NC組相比，anti-miR-1184組MGC-803細(xì)胞中NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白表達(dá)比例升高（Plt;0.01）；與miR-NC組相比，miR-1184+Hp組NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白表達(dá)比例升高（Plt;0.05）；與miR-NC+Hp組相比，miR-1184+Hp組Hp感染MGC-803細(xì)胞中NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白表達(dá)比例明顯降低（Plt;0.01）。見圖10。

3" 討論

miRNA是一類高度保守的功能性非編碼RNA，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)［11］。研究發(fā)現(xiàn)，miR-1184在膀胱癌細(xì)胞、結(jié)直腸癌細(xì)胞和腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲過程［12-13］。本研究結(jié)果提示，miR-1184在Hp感染MGC-803細(xì)胞中表達(dá)明顯下調(diào);MGC-803細(xì)胞中過表達(dá)miR-1184，能夠逆轉(zhuǎn)Hp感染對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖和遷移作用。

細(xì)胞周期是細(xì)胞生命活動(dòng)的基本過程，分為分裂期和分裂間期，分裂間期主要包括G1期、S期和G2期［14］。miRNA的異常表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞周期的異常啟動(dòng)、轉(zhuǎn)換和終止，最終使腫瘤細(xì)胞異常增殖。本研究結(jié)果顯示，抑制MGC-803細(xì)胞中miR-1184表達(dá)可使S期和G2期細(xì)胞增多，過表達(dá)miR-1184能夠逆轉(zhuǎn)Hp感染引起的S期和G2期細(xì)胞比例上調(diào)。細(xì)胞的遷移在腫瘤轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)過程中發(fā)揮重要作用，而EMT過程的改變調(diào)控腫瘤細(xì)胞的遷移能力。本研究結(jié)果表明，過表達(dá)miR-1184能夠上調(diào)E-鈣黏蛋白表達(dá)水平，降低N-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)水平，抑制EMT進(jìn)程，從而進(jìn)一步抑制胃癌細(xì)胞的遷移過程。

胃上皮細(xì)胞中NF-κB的激活及IL-8表達(dá)上調(diào)可能是Hp誘導(dǎo)慢性炎癥和胃癌發(fā)生的重要因素之一［15-16］。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌細(xì)胞中過表達(dá)miR-1184對(duì)炎癥因子影響較小，但在Hp感染胃癌細(xì)胞中過表達(dá)miR-1184可明顯抑制炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表達(dá)。此外，miR-184過表達(dá)可降低Hp感染胃癌細(xì)胞中NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白比值。除此之外，可進(jìn)一步收集Hp感染胃炎組織標(biāo)本，分析miR-1184在Hp胃炎標(biāo)本中的表達(dá)情況，還可通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分析miR-1184對(duì)Hp感染炎癥和胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖的影響，為miR-1184在Hp感染胃部疾病中的作用提供更有力的證據(jù)。

綜上所述，miR-1184在Hp感染的胃癌細(xì)胞中低表達(dá)，其可能通過調(diào)控EMT、細(xì)胞周期和細(xì)胞炎性反應(yīng)影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)功能，具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探索。

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［收稿日期］" 2024-12-11" ［編輯］" 郭" 欣