柚皮多糖的提取及其對蛋雛雞生長性能、抗氧化性能和血液生化指標的影響

柚子屬于蕓香科植物柚的成熟果實，含有多種營養物質，具有很高的藥用價值，是人們鐘愛的水果之一。柚皮具有消食化痰、止咳平喘和調節氣虛胸悶的功效，還可以緩解腹部冷痛和哮喘病癥。雖然柚皮有很多優點，但是每年依舊會產生大量廢棄的柚子皮渣。與其忽視柚皮，不如回收利用和開發其價值，將資源實現合理化利用?，F代研究發現，柚皮因富含黃酮類化合物、多糖和果膠等有效成分而被廣泛使用。例如，柚皮苷能夠降低血膽固醇和治療非典型性肺炎等，被應用于臨床研究中4。多糖作為柚皮主要的活性成分之一，不僅擁有抗氧化、抗炎、降血糖和改善腸道菌群等功能5-，還能夠防病、促生長和提高機體免疫力，被應用于醫藥行業。目前常用的多糖提取方法包括熱水浸提法、微波法、超聲波提取法等。張荔菲等采用超聲波輔助酶法提取多糖，提取率較高，但提取效率較低、成本較高。微波法節省提取時間，工藝流程簡化，但是僅用于提取熱穩定性物質。水提醇沉法操作簡單、提取率高，但提取水溶性化合物含量較低的原料時，會影響提取物的活性-2。

當今，抗生素濫用導致藥物殘留和細菌耐藥性等問題已對食品安全和生命健康構成威脅。因此，如何提升家禽免疫機能和抗病力成為畜牧業關注的焦點[13-15]。

本研究旨在制備柚皮多糖并研究其對蛋雛雞生長性能、抗氧化性能和血液生化指標的影響，以期提高柚皮的經濟價值，將柚皮多糖作為飼料添加劑應用于蛋雛雞養殖方面。目前尚沒有柚皮多糖應用于蛋雛雞的報道。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗樣品：平和蜜柚皮，購自市場。

試驗對象：1日齡海蘭褐蛋雛雞32只，購自市鈞洪養雞專業合作社。

藥品與試劑：硫酸，分析純，購自利安隆博華醫藥化學有限公司；苯酚，分析純，購自上海麥克林生化科技有限公司；無水乙醇，分析純，購自朝陽赫成學動劑有限公司。超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、過氧化氫酶（CAT）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒、尿素氮（BUN）試劑盒、總膽固醇（T-CHO）試劑盒、甘油三酯（TG）試劑盒，購自南京建成生物技術有限公司。

試驗儀器：酶標儀，CMaxPro，購自美谷分子儀器有限公司；離心機，L3660D，購自上海知信實驗儀器技術有限公司；恒溫水浴箱，ZSBB-712，購自上海智城分析儀器制造有限公司；超聲波清洗機，XM-600UVF，購自小美超聲儀器有限公司；真空泵，SHZ-DⅢ，購自鞏義市予華儀器有限責任公司；鼓風干燥箱，BXH-13505，購自上海博迅實業有限公司醫療設備廠；粉碎機，1000C，購自永康市紅太陽機電有限公司；紫外可見分光光度計，725型，購自上海舜宇恒平科學儀器有限公司。

1.2試驗方法

1.2.1試驗分組將32只1日齡海蘭褐蛋雛雞隨機分成4組，分別為對照組200mg·kg-1組 "mg·kg-1組 1200mg·kg-1組，每組8只。對照組只飼喂基礎日糧，200mg·kg-1組 組、1200mg·kg-1組蛋雛雞分別飼喂含 柚皮多糖的基礎日糧。試驗期間，蛋雛雞自由采食和飲水，試驗周期為36d（含7d預試驗）。

1.2.2柚皮多糖的制備柚皮多糖的提取：柚子皮烘干粉碎，得到柚子皮粉末；取柚子皮粉末 5g ，加入150mL 純水， 水浴加熱 4.5h ；抽濾取濾液，濾液超聲 5min 后冷卻，旋轉蒸發至適量（1/5），加入3倍體積無水乙醇，攪拌混勻，在室溫下過夜；抽濾，三層濾紙，抽干至濾餅出現裂隙，取濾渣，烘箱65＼～70 真空干燥得到柚子皮水溶性多糖粗提物。

制作標準曲線：稱取 葡萄糖（ 烘干至恒質量）至 100mL 容量瓶，蒸餾水溶解并定容，得到 標準液；取6支 5mL 具塞刻度試管，采用倍比稀釋法，使葡萄糖濃度分別為 0.0.02 、 ；按照苯酚-硫酸法，加人 0.5mL6% 苯酚溶液和 2.5mL 濃硫酸，震蕩搖勻，遮光冷卻 30min ，用紫外分光光度計于 490nm 波長下測定吸光值A；以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，進行回歸分析，得到葡萄糖標準曲線。

測定柚皮多糖含糖量：稀釋柚皮多糖粗提物至一定濃度（在標準曲線濃度范圍內），按照苯酚-硫酸法加入 0.5mL6% 苯酚溶液和 2.5mL 濃硫酸，震蕩搖勻，遮光冷卻 30min ，于 490nm 波長下測定吸光值B，代入葡萄糖標準曲線，計算柚皮多糖的含糖量。1.2.3生長性能指標的測定試驗雞于1、15、22、28、35日齡，分別稱質量并記錄采食量。平均采食量、平均日增質量、料質比公式如下：

平均采食量 耗料量/試驗雞數

平均日增質量 總末質量-（初始總質量-初始均質量 × 死淘數）/試驗天數 （試驗雞數-死淘數）料質比 ： 平均日采食量/平均日增質量 （3）1.2.4抗氧化性能指標的測定試驗第22天、第30天和第36天，分別進行采樣。采樣前禁食 12h 保證飲水，每組隨機抽取2只雞，靜脈采血 2mL ，靜置析出血清后， 離心，取上層血清分裝于EP管中，冷凍保存。按照試劑盒操作步驟進行操作，測定蛋雛雞血清中MDA濃度、CAT活性、SOD活性和GSH-PX活性。

1.2.5血液生化指標的測定試驗第22天、第30天和第36天，分別進行采樣。采樣前禁食 12h ，保證飲水，每組隨機抽取2只雞，靜脈采血 2mL ，靜置析出血清后， 離心，取上層血清分裝于EP管中，冷凍保存。按照試劑盒操作步驟進行操作，測定BUN、T-CHO和TG等生化指標。

1.3數據統計與分析

本研究采用SPSS27.0統計軟件對試驗數據進行單因素方差分析，以 Plt;0.05 作為差異顯著性判斷標準，試驗數據以平均值 ± 標準差表示。

2結果與分析

2.1柚皮多糖的提取結果

本研究采用微波輔助水提醇沉法提取柚皮多糖，采用苯酚硫酸法測定其多糖含量。以葡萄糖為對照制作標準曲線，回歸方程為 A=9.455x+0.1127中 ）。同時，將柚子皮多糖粗提物吸光度值B代入葡萄糖標準曲線，計算得到柚子皮多糖粗提物平均含糖量。

2.2柚皮多糖對生長性能的影響

由表1可知，經過36d體質量統計，對照組與柚皮多糖添加組之間差異不顯著（ Pgt;0.05 ），各組的體質量比初始體質量分別提高 54.92%.52.44% 、53.79%.54.76% 。

由表2可知，柚皮多糖添加組的蛋雛雞平均采食量比對照組提高 6.05%.4.13%.4.13% ，但差異不顯著（ Pgt;0.05 ；試驗組的料質比和日增質量與對照組差異不顯著（ Pgt;0.05 ）。

2.3柚皮多糖對抗氧化性能的影響

由表3可知，試驗第30天和第36天，200mg·kg-1組 組和1200mg·kg-1組的蛋維雞血清中MDA含量顯著低于對照組（ Plt;0.05 ）。試驗第22天， 600mg·kg-1組的蛋雛雞血清中CAT活性顯著高于對照組 Plt;0.05 。

試驗第22天和第30天，1200mg·kg-1組的蛋雛雞血清中CAT活性顯著高于對照組 。試驗第36天，""組和1200mg·kg-1組的蛋雛雞血清中GSH-PX活性顯著高于對照組 （Plt;0.05 ）。

整個試驗周期內，柚皮多糖對蛋雛雞血清中SOD活性的影響差異不顯著（ ）。

2.4柚皮多糖對血液生化指標的影響

由表4可知，試驗第22天和第36天，200mg·kg-1組和 組的蛋雛雞血清中BUN含量顯著低于對照組（ Plt;0.05. ；整個試驗周期， 組的蛋雛雞血清中BUN含量顯著低于對照組 （Plt;0.05 ）。整個試驗周期， 200mg·kg-1組、 組和1200mg·kg-1組的蛋雛雞血清中T-CHO含量顯著低于對照組（ Plt;0.05 ）。整個試驗周期， 200mg·kg-1組 600mg·kg-1組和 組的蛋雛雞血清中TG含量顯著低于對照組（ Plt;0.05 ）。

3討論與結論

3.1 討論

3.1.1柚皮多糖對蛋雛雞生長性能的影響目前，植物多糖在動物生長發育方面的影響結論不一。研究表明，植物多糖具有天然、無副作用和安全高效的特點，可以促進動物生長性能和增強消化代謝[7-20]。但也有研究發現，多糖類活性物質對動物生長性能無顯著促進作用[2I-22]。本研究中，飼料中添加柚皮多糖對蛋雛雞體質量和平均采食量方面有促進作用，但與對照組相比差異不顯著。原因可能是蛋雛雞較肉雛雞生長慢，導致柚皮多糖對雛雞生長性能的影響較小，也可能是柚皮多糖的添加量不是蛋雛雞生長所需劑量，具體影響因素有待于進一步研究。

3.1.2柚皮多糖對蛋雛雞抗氧化性能的影響MDA能反映組織中細胞的氧化損傷程度[23]， 具有一定的抗氧化效果，二者都是反映抗氧化性能的重要指標[24-25]。研究發現，香菇多糖、桑黃多糖和酵母細胞壁多糖皆能降低動物血清中MDA含量，同時還能提高其血清中 SOD、CAT、GSH- ？Px 活性[26-28]，這與本研究結果一致。本研究中，日糧中添加柚皮多糖可使蛋雛雞血清中MDA含量于試驗第30天顯著降低，CAT活性與GSH-PX活性分別于試驗第22天和第36天顯著升高。自由基是引發機體病變的根源，SOD是體內唯一能清除 自由基的酶類[2。江飛鳳等[30和陳文娟等3研究表明，原料及提取方法的不同會改變柚皮多糖對自由基的清除能力，從而影響其抗氧化性能32。綜上所述，日糧中添加柚皮多糖在一定程度上可以提高蛋雛雞的抗氧化能力。

3.1.3柚皮多糖對蛋雛雞血液生化指標的影響血清BUN不僅能反映蛋白質的代謝情況，還是評價腎功能的重要指標，若BUN濃度升高，其腎功能可能伴有異常33]。王霄等[34研究發現，中、高劑量丹參多糖可以改善肉雞的腎臟功能；同時，動物日常飼料添加不同含量的黃芪多糖可以不同程度地降低動物血清中TG和TC含量，調節動物血脂水平[35-3，這與本研究結果一致。本研究發現，飼料中添加不同含量柚皮多糖可以降低蛋雛雞血清中BUN、T-CHO和TG含量，其中柚皮多糖添加量為 最適宜。

3.2 結論

日糧中添加柚皮多糖可以提高蛋雛雞的抗氧化性能，降低血脂，并且對腎臟無副作用。因此，柚皮多糖可作為天然的抗氧化物質，用于蛋雛雞的飼料添加劑。

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