MiR-1677-5p對雞前脂肪細胞增殖分化的影響

摘要：目的本研究旨在探究 對雞前脂肪細胞增殖分化的影響。方法采用雙熒光素酶試驗驗證miR-1 6 7 7 - 5 p 與APOA1之間的靶向關系，在雞前脂肪細胞中過表達和抑制表達 ，應用CCK-8試驗、油紅O染色以及qRT-PCR方法探究 對雞前脂肪細胞增殖和分化的影響。結果 直接靶向A P O A I 基因并抑制 A P O A I 在前脂肪細胞中的表達， 對前脂肪細胞增殖有抑制作用。 在分化 后表達量顯著低于未誘導分化細胞組（ P lt; 0 . 0 5 ） A P O A I 在分化 7 2 ～ 1 2 0 h 后表達量顯著高于未誘導分化細胞組（ ，過表達 使得分化標志基因FABP4表達極顯著降低（ ，表明 對雞前脂肪細胞分化有抑制作用。結論為進一步闡明 m i R - 1 6 7 7 - 5 p 在雞脂肪生成中的生物學作用提供理論基礎。

關鍵詞：雞； ；前脂肪細胞； A P O A 1 ；細胞增殖；成脂分化中圖分類號：S831.2 文獻標志碼：A

Abstract：ObjectiveTheaimofthisstudywastoinvestigatetheefetofmiR-1677-5pontheproliferationanddiferentiationof chickenpreadipocytes.Methods TedualluciferaseexperimentwasusedtoverifythetargetingrelationshipbetweenmiR-1677-5p and A P O A I ， m i R -1 6 7 7 - 5 p wasoverexpressed or inhibitedinchickenpreadipocytes.CCK assay，oil red Ostainingand qRT-PCR wereused to explore the effects of ontheproliferation and differentiation of chicken preadipocytes.Results The results showed that miR-1677-5p directly targeted A P O A I gene and inhibited the expression of A P O A I in preadipocytes，and miR-1677-5p hadaninhibitoryefectontheproliferationofpreadipocytes.qRT-PCRresultsshowedthattheexpresionlevelofmiR-1677-5pwas significantly lower than that of the control group after 48 h of differentiation（ ），and the expression level of A P O A I was significantly higher than that of the control group after 72＼～12O h of differentiation （ ）.Overexpression of miR-1677-5p significantly reduced the expression of differentiation marker gene F A B P 4 ，indicating that miR-1677-5p had aninhibitory effect on the differentiationofchickenpreadipoytes.ConclusionThresultsofthisstudyprovideatheoreticalbasisforfurtherelucidatigthebiologicalrole of miR-1677-5p in chicken adipogenesis

Keywords：chicken;miR-1677-5p;preadipocyte; A P O A I ;cellproliferation;adipogenicdifferentiation

肌內脂肪（IMF）即沉積在肌肉內的脂肪，位于肌肉纖維束內，與肌肉中的膜蛋白結合緊密，均勻分布于肌肉組織中[1]。IMF的含量是由脂肪細胞的數量及其脂肪沉積能力決定[2-3]。脂肪生成是前脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞后形成大量脂滴的過程[4]。近年來，大量的miRNA被發現通過調節成脂轉錄因子及關鍵信號分子的表達水平來參與脂肪細胞的分化， 靶向Wnt5a和Mapk1抑制

3T3-L1前脂肪細胞增殖，促進其分化脂肪細胞[5] 可以通過靶向FBXO11促進成肌細胞的增殖分化并抑制肌細胞內脂質沉積[6]。miR-2 7 b- 3 p 可以靶向調控LPL基因的表達，抑制豬脂肪前體細胞的分化[7]。以上研究表明，miRNA在肌內脂肪生成中發揮關鍵作用，但關于miRNA參與調控雞前脂肪細胞增殖和分化的分子機制還要進一步探索。

前脂肪細胞向成脂細胞的分化是一個復雜過程，需要大量轉錄因子，激素和信號通路分子的協同調節共同完成。載脂蛋白A1（apolipoprotein A1，APOA1）位于血漿高密度脂蛋白表面，是其重要的組成部分之一，參與了膽固醇的逆轉運過程[8]。過表達APOAI基因可以使小鼠脂肪減少，代謝率提升[9]。秦文等人發現APOAI基因可能參與了耗牛脂肪酸代謝調控[10]。在家禽的研究中也有發現APOA1在鵝的脂肪組織及肝臟組織中表達量明顯高于其它部位[]

本課題組前期對雞胚胎期8d的胸肌組織進行轉錄組測序分析，篩選差異性表達的miRNA，通過功能富集分析及生物信息學分析預測到 - 5 p 的靶基因APOAI，推測 與胚胎期肌內脂肪形成密切相關[12]，但目前關于 m i R -1 6 7 7 - 5p對脂肪生成相關的研究未有報道。本研究采用雙熒光素酶報告基因實驗探索 m i R- 1 6 7 7 - 5 p 與APOA1之間的靶向關系，探究 對雞前脂肪細胞的增殖作用，采用過表達或抑制 - 5 p 驗證其對雞前體脂肪細胞分化的影響，初步探究 對雞前脂肪細胞增殖分化的調控作用。

1 材料與方法

1. 1 材料

1.1. 1 試驗細胞

雞前脂肪細胞系（ICP2）由東北農業大學動物科學技術學院惠贈。

1. 1.2 主要儀器

細胞培養箱、臺式高速離心機、微生物培養箱、NanoDrop2000紫外分光光度計、MultiskanTMGO全波長酶標儀（ThermoScientific公司），CyclerTMTher-malCyclerPCR儀、電泳凝膠成像系統（BIO-RAD公司），多功能酶標儀（Biotek公司），倒置熒光顯微鏡（Zeiss公司），恒溫水浴鍋、LightCycler？96實時熒光定量PCR儀（Roche公司）。

1. 1.3 主要試劑

Lipofectamine@20oo 購自 Invitrogen 公司；psi- Vector 購自Promega公司； D H5 α 感受態細胞、限制性內切酶（XhoI、NotI）、T4-DNA連接酶購自 TaKaRa 公司；Dual-Luciferase@ReporterAssayKit、miRNA模擬物、抑制物和陰性對照、抑制物陰性對照購自廣州銳博生物技術有限公司；瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒、無內毒素質粒大量提取試劑盒購自北京天根生化科技有限公司；Opti-MEM、DMEM購自Gibco公司；胎牛血清（FBS）購自Bio-logicalIndustries（BI）公司;油紅O染色液（細胞專用）購自北京Solarbio科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養和轉染

取凍存細胞立即放入 水浴鍋中，使其盡快溶解， 低速離心 5 m i n 后棄上清。加入1 m L 完全培養液重懸細胞后 離心5m i n ，重新加人 1 m L 完全培養液重懸細胞后接種培養瓶，放人細胞培養箱中培養 。將雞前脂肪細胞接種于12孔細胞培養板，加入不含雙抗的完全培養基培養 2 4 h 后待細胞狀態良好，密度達到 5 0 % ～ 7 0 % 時開始轉染。棄掉完全培養基，加入低糖培養基 過夜饑餓細胞，試驗分為四組處理： m i R- 1 6 7 7 - 5 p mimic mimicN C? m i R- 1 6 7 7 - 5 p inhibitor、 inhibitorNC，轉染 5 h 后，棄轉染液，加人不含雙抗的完全培養基或油酸分化培養基，放人培養箱中繼續培養。

1.2.2總RNA的提取及cDNA合成

使用Trizol提取細胞總RNA，常規定量用cDNA合成按照TakaracDNA第一鏈合成試劑盒進行，miRNA定量用cDNA第一鏈合成反應參照miRcute增強型miRNAcDNA第一鏈合成試劑盒說明書進行，最后將反應產物置于 冰箱保存，以備后續實驗。

1.2.3雙熒光素酶報告載體構建及實驗

以雞肌肉DNA樣品為模板，對預測靶基因 UTR區序列進行擴增，純化回收的目的產物后根據說明書用Xho 限制性內切酶對目的片段及載體psi-CHECK-2進行酶切、T4連接酶連接和轉化后，提取質粒并鑒定。以雞成纖維細胞為試驗工具細胞，將 APOAI-WT 或 APOAI-MUT 的psi-CHECK-2雙熒光素酶報告載體以及 m i R -1 6 7 7 - 5 p mimics或mimics-NC用Lipofectamine2ooo轉染至成纖維細胞中。根據Dual-Luciferase Reporter AssaySystem說明書對細胞熒光素酶活性進行檢測。

1.2.4 CCK-8試驗

將細胞接種于96孔板，接種細胞 2 4 h 后進行轉染，分為 m i R- 1 6 7 7 - 5 p mimic、 m i R- 1 6 7 7 - 5 p mimic N C， m i R -1 6 7 7 - 5 p inhibitor 和 inhibitorNC共4組，向每孔加入 1 0 μ l C C K- 8 試劑，放入細胞培養箱中培養。測定1、2、3、4、5d時細胞增殖情況，使用酶標儀測定各孔 A 4 5 0 n m 處吸光值，根據測定值繪制細胞天數增殖曲線。

1.2.5 油紅◎染色

待細胞融合度達到 6 0 % ～ 8 0 % 時，棄去培養基，加OROFixative固定液固定 。蒸餾水洗2次后加入 6 0 % 異丙醇浸洗 5 m i n 。棄去 6 0 % 異丙醇后加人現配的OROStain（OROStainA：OROStainB= 3 ： 2 ），浸染 1 0 ～ 2 0 m i n 。棄去染色液后蒸餾水洗2～5次，直到無多余染液。加入Mayer蘇木染色液，復染核 后棄去染液蒸餾水洗2～5次。加入ORO Buffer 1 m i n ，棄去。加入蒸餾水覆蓋細胞鏡檢拍照。

1.2.6 實時熒光定量PCR

使用SYBR PrimeScriptTMRT-PCR Kit進行qRT-PCR反應。反應程序為 預變性 5 m i n ，之后進行 變性 1 0 s ，最佳退火溫度 延伸 1 0 s ，共45個循環，最后通過 s用于溶解曲線分析。引物序列由上海生工生物公司合成，詳見表1。

1.2.7 數據分析

利用SPSS（26.0）軟件對數據進行分析，數據以“平均值 η（ M ） ± 標準誤（SE）\"表示，樣本間差異顯著性進行方差分析，利用獨立樣本T檢驗對數據進行差異性顯著分析，以 為差異顯著判斷標準。

2 結果

2.1 miR-1677-5p與APOA1基因關系的 驗證

psiCHECK-2-APOA1質粒使用雙酶切鑒定野生型雙熒光素酶報告質粒構建成功。以野生型雙熒光素酶報告質粒為模板，通過重疊PCR方法獲得突變型質粒，將野生型和突變型psiCHECK2-APOA1重組質粒與 mimic或mimicsNC共轉染后，通過BioTek酶標儀檢測發現在轉染野生型熒光素酶載體的細胞中， mimic組熒光素酶活性相對陰性對照極顯著下調 3 7 . 4 % （ P lt; 0.01），而在轉染突變型熒光素酶載體的組間差異不顯著（圖1B）。分別將 mimic、miR-1677-5pmimicNC、miR-1677-5pinhibitor、miR-1 6 7 7 - 5 p inhibitorNC轉染雞前脂肪細胞 2 4 h 后，檢測APOA1基因表達量（圖1C），結果表明轉染miR-1 6 7 7 - 5 p mimic組的APOA1表達量極顯著低于其陰性對照組（ Plt;0 . 0 1 ）， inhibitor組 m R NA 表達量極顯著高于陰性對照組（ P lt; 0 . 0 1））` 。

2.2 m i R -1 6 7 7 - 5 p 對雞前脂肪細胞增殖影響

CCK-8結果表明轉染不同處理后，雞前脂肪細胞的增殖能力都是先逐漸增加后逐漸降低。轉染48和 時， mimic組細胞增殖力極顯著低于 mimicNC組（ P lt; 0 . 0 1 ，其余時間點差異不顯著（ （圖2A）。而轉染miR-1677-5pinhibitor和 m i R- 1 6 7 7 - 5 p inhibitorNC組所有時間點差異都不顯著（ P gt; 0 . 0 5 ）（圖2B），表明過表達 可抑制雞前脂肪細胞的增殖，而抑制劑對雞前脂肪細胞的增殖沒有影響。

2.3誘導分化后不同時間點雞前脂肪細胞中脂肪代謝相關基因的表達

在分化雞前脂肪細胞24、48、72、96、120h后，分別在5個時間點檢測分化標志基因 C / E B P α 、FABP4、PPARG表達量。

結果顯示與NC組相比油酸誘導分化 2 4 h 后顯著提升了分化標志基因 C / E B P α 和FABP4表達量（ Plt;0 . 0 5 ） ，其余時間點 C / E B P α 和FABP4表達量相比NC組均極顯著升高（ ）（圖3A，圖3B），而PPARG表達量在分化 2 4 h 后極顯著低于NC組（ P lt; 0 . 0 1 ），分化 后顯著高于NC組（ P lt; 0.05），其余時間點相比NC組均極顯著提升（ P lt; 0.01）（圖3C）。FABP4表達量隨時間不斷提升，在分化 1 2 0 h 后表達量最高， C / E B P α 和PPARG在分化 后表達量達到最高峰后降低，分化 后再次回升。

2.4誘導分化后不同時間點miR-1677-5p及APOA1基因變化趨勢

雞前脂肪細胞誘導分化后，分別提取 2 4 - 1 2 0 h 的脂肪細胞總RNA，RT-PCR檢測結果表明，油酸處理組 的表達量 顯著低于空白對照組（ P lt; 0 . 0 5 ）， 和 極顯著低于空白組（ （圖3D）。其靶基因 A P O A I 油酸處理組的表達量均高于對照組， 顯著高于空白對照組（ P lt; 0 . 0 5 ）， 9 6 h 和 均極顯著的高于對照組（ （圖3E）。結果表明 及其靶基因APOA1對脂肪細胞分化過程有一定的影響。

2.5miR-1677-5p對雞前脂肪細胞分化的影響

油紅0結果顯示（圖4），轉染 m i R- 1 6 7 7 - 5 p mimics抑制雞前脂肪細胞脂滴聚集，而轉染miR-1 6 7 7 - 5 p inhibitor后促進了脂滴聚集。檢測分化標志基因表達量后結果顯示（圖5），轉染 模擬物使得FABP4基因表達量極顯著下降（ P lt; 0.01），C/EBPα、PPARG表達量相對NC組顯著降低（ ，干擾 表達量顯著下降， C / E B P α ， P P A R G 表達量無顯著變化。表明m i R-1 6 7 7 - 5 p 可能對雞前脂肪細胞分化有抑制作用。

3 討論

3.1 miRNA對雞前脂肪細胞的調控作用

雞肌內脂肪沉積是一個復雜的生理過程，受多種調控因子影響，這些調控因子之間相互作用，構成復雜的脂肪代謝調控網路[13]。研究證明miRNA在脂肪細胞發育中扮演著重要角色，參與了脂肪沉積等各項生物學調控，促進或抑制動物脂肪細胞增殖分化。目前已有許多研究證明了miRNA在不同物種間均是調控脂肪生成的重要因子之一。miR-130b可以通過抑制成脂關鍵基因的表達，抑制了前脂肪細胞成脂分化，使得脂質沉積降低[14]。miR-3 8 1 - 3 p 通過靶向FABP3抑制前脂肪細胞分化及脂肪沉積，同時該研究發現，有lncRNA-4798可以通過吸收 m i R- 3 8 1 - 3 p 使得靶基因FABP3表達量增加，形成ceRNA影響肌內脂肪沉積[15]。 在家禽研究中發現， m i R- 1 2 8 - 3 p 通過靶向FDPS基因抑制雞肌內脂肪細胞分化。付守藝等發現MiR-15a可能通過抑制ACAA1、ACOX1、SCP2等靶基因促進固始雞胸肌肌內脂肪沉積[13]。也有發現gga-miR-1 0 6-5 p 直接靶向 K L F 1 5 ，抑制 K L F 1 5 的轉錄后活性使得雞腹部前脂肪細胞的增殖和脂肪分化降低[17]

本試驗利用生物信息學分析預測APOA1基因的3'UTR區可能含有 種子序列的反向互補序列。利用雙熒光素酶報告實驗證實其靶標關系后，應用qRT-PCR檢測 m i R- 1 6 7 7 - 5 p 以及APOA1基因的表達模式。結果顯示：在雞前脂肪細胞分化 4 8 h 后兩者間呈相反的表達趨勢，且在雞前脂肪細胞中過表達 均會抑制APOA1基因的表達水平，而抑制 m i R- 1 6 7 7 - 5 p 會促進

APOA1基因的表達水平，這與本試驗先前所預測的研究結果所相符。結合結果，初步判斷miR-1677-5p可以通過靶向調節APOA1的表達來調控雞前脂肪細胞的分化。

3.2APOA1基因對雞前脂肪細胞的影響

APOA1主要合成于動物的肝臟和小腸內，具有抗炎、抗氧化、抗血栓和內皮保護的作用，是血漿高密度脂蛋白的主要組成成分之一[18]。雞的APOA1基因位于24號染色體[19]，有研究應用SNP檢測和基因型分析推測APOA1可能是控制雞腹脂性狀的主效基因[20]，Douaire等[21]發現APOA1在9周齡脂肪型及瘦肉型雞中的mRNA表達情況存在顯著差異，且APOA1基因的表達量與腹脂質量顯著相關，王福彬和趙佳福分別在大通耗牛與從江香豬中檢測APOA1基因在各器官的表達量，結果顯示，APOAI基因主要在動物的肝臟中發揮作用[22-23]。以上研究均表明APOA1基因在脂肪生成過程中發揮著重要地位。牟彥雙等人在誘導分化培養基中加入油酸在分化24、48、72、96h后檢測了AP0A1的mRNA表達量，結果顯示APOA1基因表達量在 2 4 ～ 7 2 h 均高于對照組[24]，這與本試驗的研究結果相類似，而在誘導分化 2 4 ～ 9 6 h 后檢測APOA1基因表達量均低于本試驗結果，經推測是因為本試驗所使用細胞為多代混合細胞所導致結果之間出現區別。在本試驗中，將雞前脂肪細胞分化 7 2 ， 9 6 ， 1 2 0 h 后，APOA1基因表達量顯著提升，推測該基因能夠促進雞前脂肪細胞分化，在雞的脂肪生成中擁有重要調控作用。這與先前研究的結果相符合，但APOA1基因在家雞前脂肪細胞的調控作機制還有待更進一步的探究。

4結論

本研究探究 對雞前脂肪細胞的調控作用，通過靶基因預測驗證及表達分析發現， 通過靶向APOA1基因，抑制雞前脂肪細胞的增殖和分化。本研究結果為闡明miR-1677-5p對家禽前脂肪細胞增殖分化的調控機制奠定了基礎。

參考文獻（References）

[1] 孫運梅.lncIMF1對豬肌內前體脂肪細胞脂質沉積的作用與機制研究[D].楊陵：西北農林科技大學，2021.

[2] 馬衍旋.肌內脂肪對豬肉品質的影響及肌內脂滴的成脂調控［D]．楊陵：西北農林科技大學，2018.

[3] 朱翠松，楊瑜，劉明斌，等．脂肪組織巨噬細胞在肥胖誘導的炎癥和胰島素抵抗中的作用[J]．復旦學報（醫學版），2019，46（5）：681-686.ZHU C S， YANG Y， LIU M B.The role of adipose tis-sue macrophages in obesity induced inflammation andinsulin resistance[J].Fudan Univ JMed Sei，2019，46（5）：681-686.

[4]CRISTANCHO A G，LAZAR M A. Forming functionalfat：A growing understanding of adipocyte differentiation[J].Nature Reviews Molecular Cell Biology，2011，12（11）： 722-734.

[5］辜浩，郭鑫宇，堵晶晶，等．MiR-186-5p對3T3-L1前脂肪細胞增殖分化的影響研究［J]．中國生物工程雜志，2020，40（3）：21-30.GU H，GUO X Y，DU JJ. The Effect of miR-186-5pon the proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadi-pocyte[J].China Biotechnology，2020，40（3）：21-30.

[6］焦瑩.ssc-miR-21-5p 靶向FBXO11對成肌細胞增殖、分化和肌內脂質沉積的影響［D]．長春：吉林大學，2023.

[7]趙佳福，游敏芳，諶穎蓮，等．miRNA-27b-3p 對豬脂肪前體細胞分化的影響［J]．貴州畜牧獸醫，2022，46（6）：38-43.ZHAO JF，YOU MF，CHEN Y L. Efect of miRNA-27b-3p on differentiation of porcine adipose precursorcells[J].GuizhouJournal ofAnimal Husbandryamp;Vet-erinary Medicine，2022，46（6）：38-43.

[ 8]WANG S， PENG D， YIY，et al. The unsolved mysteryof apoA-I recycling in adipocyte.[J].Lipids in Healthand Disease，2016，15（1）：35-35.

[9]RUAN X，LI Z，ZHANGY，et al.Apolipoprotein A-Ipossesses an anti-obesity effect associated with increaseof energy expenditure and up-regulation of UCP1 inbrown fat[J].Journal of Cellular and Molecular Medi-cine，2011，15（4） ：763-772.

[10］秦文．PPARα信號通路基因與耗牛肌內脂肪酸含量的相關性研究［D]．蘭州：甘肅農業大學，2014.

[11］麻延峰．填飼朗德鵝肝重與脂代謝相關基因、體尺性狀的相關性分析及應用[D]．南京：南京農業大學，2015.

[12]。ZHANG L，SONG R E N，HERONG L，et al. High-throughput sequencing analysis of miRNA expression inembryonicchickenbreastmuscle[J].KafkasUniversitesi Veteriner Fakultesi Dergisi，2021，27（2）：27-32.

［13］付守藝．固始雞胸肌肌內脂肪沉積相關miRNA鑒定及功能研究[D].鄭州：河南農業大學，2018.

[14］陳永芳．miR-130b 在豬和大鼠肌內脂肪前體細胞增殖和成脂分化中的調節作用及機制研究［D].揚州：揚州大學，2023.

[15]JIANGY，LIUJ，LIUH，et al.miR-381-3p inhibitsintramuscularfat depositionthrough targeting FABP3 byceRNA regulatory network［J]．Biology，2022，11（10）：1497.

[16] ZHUS，ZHANGB，ZHUT，etal.miR-128-3pinhib-itsintramuscular adipocytes differentiation inchickensbydownregulating FDPS[J]．BMC Genomics，2023，24（1）：540.

[17]TIANW，HAO X，NIER，et al. Integrative analysis ofmiRNA and mRNA profiles reveals that gga-miR-106-5pinhibits adipogenesisbytargetingthe KLF15 geneinchickens[J]. Journal of Animal Science and Biotechnol-ogy，2022，13（1）：1-19.

[18] YINR X，LIYY，LAI CQ.Apolipoprotein A1/C3/A5haplotypesand serumlipid levels[J].LipidsinHealthand Disease，2011，10（1）：1-16.

[19] SAZANOVAA，TRUKHINAAV，SMIRNOVAF，etal.Two chicken genes APOA1 and ETS1 are physicallyassigned to the same micro chromosome[J]. AnimalGenetics，2002，33（4）：321-322.

[20] 王啟貴，李輝，李寧，等．Apo-AI基因多態性與雞生長和體組成性狀的相關研究［J]．畜牧獸醫學報，2005（8）：751-754.WANGQ G，LI H，LI N.Polymorphisms of Apo-AIgene associated with growth and body composition traitsin chicken[J]．Acta Veterinariaet Zootechnica Sinica，2005（8）： 751-754.

[21] DOUAIRE M，LE FUR N，el. Identifying genes in-volved in the variabilityof genetic fatness in the growingchicken[J].PoultryScience，1992，71（11）：1911-1920.

[22] 王福彬，吳曉云，顧亞榮，等．大通牦牛APOA1基因克隆及生物信息學分析與組織表達譜分析[J].基因組學與應用生物學，2022，41（4）：752-761.WANGFB，WUXY，GUYR.Cloning，bioinformat-icsanalysisand tissue expression profile analysis ofApoA1 gene in bosgrunniens[J].Genomics and Applied Bi-ology，2022，41（4）：752-761.

[23] 趙佳福，楊遠青，段志強，等．從江香豬APOA1、ApoC3、ApoE基因在組織器官中表達差異分析[J].黑龍江畜牧獸醫，2018（3）：132-136，255.ZHAO JF，YANG YQ，DUAN ZQ. Differential ex-pression analysisof ApoA1，ApoC3 and ApoE genes intissues and organs of Congjiang Xiang pig[J]．Hei-longjiang Animal Science And veterinary Medicine，2018（3）：132-136，255.

[24] 牟彥雙，王宇祥，李輝．油酸對雞前脂肪細胞分化過程中基因表達的影響[J]．東北農業大學學報，2013，44（12）：46-51，2.MUYS，WANG Y X，LI H. Effect of oleate on geneexpression during differentiation of chicken preadipocyte[J]．Journal of Northeast Agricultural University，2013，44（12）：46-51，2.

（責任編輯：唐慧）