酶解羊毛粉代魚粉補雙蛋氨酸對大口黑鱸肝臟指標的影響

關鍵詞：大口黑鱸（Micropterussalmoides）；包膜蛋氨酸；氧化應激；脂質代謝中圖分類號：X954；F326.4 文獻標志碼：A 文章編號：1004—6755（2025）08-0075—04

Abstract：To investigate the effects of supplementing crystalline methionine or coated methionine in diets where enzymatically hydrolyzed wool powder replaces fishmeal on hepatic biochemical parameters in Micropterus salmoides ，three experimental groups were established： the control groups （Do） contained 49% fishmeal，the second group （Dl） partial replacement of fishmeal with enzymatically hydrolyzed wool powder+crystalline methionine ，and the third group （D5） partial replacement of fishmeal with enzymatically hydrolyzed wool powder + coated methionine. Results showed ：compared to Do， the Dl group exhibited significantly reduced hepatic levels of total protein（TP），total antioxidant capacity（T-AOC），superoxide dismutase（SOD），and catalase（CAT）（ Plt;0. 001 ），alongside significantly elevated triglyceride（TG）and malondialdehyde（MDA）levels（ Plt;0， 01 ）.Nosignificant differences were observed in total cholesterol（T-CHO），glucose（GLU），alkaline phosphatase（AKP）， or acid phosphatase（ACP）（ Pgt;0.05 .Compared to D1，the D5 group demonstrates significantly increased TP，T-AOC，SOD，and CAT levels （ Plt;0.001 ）with significantly decreased TG and MDA levels（ Plt;0 . 01）. Similarly，T- CHO，GLU，AKP，and ACP showed no significant changes （ Pgt;0.05 . Conclusion，supplementation with coated methionine effectively alleviated oxidative stress and lipid metabolism disorders in Micropterus salmoides induced by partial replacement of fishmeal with enzymatically hydrolyzed wool powder.

Key words： Micropterus salmoides ; coated methionine; oxidative stress; lipid metabolism

大口黑鱸（Micropterussalmoides）對飲食蛋白有很高的要求（主要來自魚肉），因為魚類更喜歡利用氨基酸（AAS），而不是葡萄糖和脂肪酸，作為主要的代謝燃料[1]。魚粉（FM）是水產飼料中最重要的飼料蛋白來源之一[2]。國際上超過2/3的FM被用作水產飼料，在中國約占 60%^[3] 0我國是畜禽大國，每年都會因為屠宰產生大量畜禽毛發，而家禽羽毛中粗蛋白含量非常高，僅有部分水產養殖動物必需氨基酸的含量較低，而在其他生物體活動不可或缺的氨基酸種類及其含量上均高于魚粉[4]，羽毛粉雖難消化但可少量應用于配合飼料，但部分魚類對不同方法處理后的羽毛粉利用與消化吸收能力存在明顯的差異性，比如水解和酶解[5]。不良的飲食易導致大口黑鱸發生氧化應激和代謝紊亂，進而影響經濟效益。

在FM替代方案中，往往因替代蛋白的氨基酸不平衡而導致養殖動物生長率較低，在魚類營養的視角下，只有在飲食中補充必不可少的氨基酸時，這種替代方案才有效。蛋氨酸是替代蛋白的第一限制性氨基酸，相較于晶體蛋氨酸，包膜蛋氨酸具有良好的緩釋效果，可持續維持氨基酸的供應。因此，本研究旨在探究酶解羊毛粉替代魚粉的配合飼料中補充晶體和包膜兩種形式蛋氨酸對大口黑鱸肝臟生化指標的影響，以期通過尋找飼料替代物及添加蛋氨酸等來提高大口黑鱸的產能及經濟效益。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

大口黑鱸購自天津市某養殖場。酶解羊毛粉為實驗室自制，蛋氨酸購自贏創特種化學公司，酶活試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗設計與飼養管理

本試驗是以魚粉、酶解羊毛粉、豆粕以及不同形態的蛋氨酸為主要蛋白來源，制備了3種不同的飼料，主要的飼料成分見表1。設置3個處理組，對照組含 49% 魚粉（命名為DO），第二組使用酶解羊毛粉替代部分魚粉 + 晶體蛋氨酸（命名為D1），第三組使用酶解羊毛粉替代部分魚粉 + 包膜蛋氨酸（命名為D5）。

選取60尾初始體質量 （10，27±0.02）g 均質健康的個體，隨機分為3組（20尾/組），養殖周期10周。嚴格構建符合大口黑鱸生理需求的養殖環境。

表1飼料組成 （%）

注：其他*，包括面粉、維生素預混料、礦物質預混料等含量一致成分。

1.3樣品采集和肝臟生化指標測定

試驗全程遵循標準化生物樣本制備流程：無菌采集肝臟組織進行相關酶活測定，所有操作步驟均嚴格按照試劑盒的說明書進行，以確保結果的準確性和可靠性。

1.4 統計分析

使用SSPS22.0軟件對試驗數據進行單因素方差分析，以評估不同組別之間的差異。結果以平均值 ± 標準誤差表示， Plt;0.05 表示組間差異具有統計學意義。

2結果

2.1補充兩種形式蛋氨酸的飼料對大口黑鱸肝臟血脂生化指標的影響

為探究酶解羊毛粉替代魚粉且補充兩種不同形式蛋氨酸的飼料對大口黑鱸肝臟血脂生化指標的影響，檢測各組大口黑鱸肝臟研磨液的總蛋白（TP）、總膽固醇（T一CHO）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、堿性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）的表達情況。結果如圖1所示，與D0組相比，D1組大口黑鱸肝臟中TP含量顯著降低（ Plt;0.01? ，TG含量極顯著升高 （Plt;0. 001） ，T-CHO、GLU、AKP和ACP含量未見顯著差異 Rgt;0.05） ；與D1組相比，D5組大口黑鱸肝臟中TP含量極顯著升高 （Plt;0.05） ，TG含量極顯著降低（ Plt;0. 001 ，T-CHO、GLU、AKP和ACP含量未見顯著差異（ Pgt;0.05 。

圖1各組大口黑鱸肝臟血脂生化指標的檢測結果

注：a.總蛋白 TP/（U?L^-1 ）；b.總膽固醇 T-CHO/（mmol ：L^-1 ）；c.甘油三酯 TG/（mmol?L^-1） ；d.葡萄糖GLU/（U·L^-1 ）；e.堿性磷酸酶 AKP/（mmol?L^-1 ）；f.酸性磷酸酶ACP/[mmol?L^-1 。 ? 表示差異顯著（ Plt;0.05 ，**表示差異極顯著（ Plt;0.01） ，***表示差異極顯著（ Plt;0.001） °

2.2補充兩種形式蛋氨酸的飼料對大口黑鱸肝臟抗氧化指標的影響

為探究酶解羊毛粉替代魚粉且補充兩種不同形式蛋氨酸的飼料對大口黑鱸肝臟抗氧化指標的影響，檢測各組大口黑鱸肝臟研磨液的丙二醛MDA（U/L）、總抗氧化能力 T-AOC（mmol/L） 、超氧化物歧化酶 SOD（U/L） 和過氧化氫酶CAT1 U/L） 的表達情況。結果如圖2所示，與D0組相比，D1組大口黑鱸肝臟中MDA含量極顯著升高（ Plt;0 .01），T-AOC（ Plt;0， 01 ）、SOD（ Plt;0.01 和CAT（ Plt;0.001 ）含量極顯著降低；與D1組相比，D5組大口黑鱸肝臟中MDA含量極顯著降低（ ?Plt;0. 01 ，T-AOC（ Plt;0. 01 ）、SOD（ Plt;0.01 和CAT（ Plt;0. 001 含量極顯著升高。

3討論

魚類的肝臟生化指標與魚類自身的代謝、營養狀況以及魚體健康均有著密切的聯系[7-8]。TP、TG和CHO以及GLU是蛋白質、脂質和糖類三大營養物質消化吸收后在魚體血液內的最主要存在形式[9-10]。血清TP是機體蛋白的來源之一，可以用于修復組織并提供能量[11]。血清中TP的含量在一定程度上反映了機體蛋白質的消化、吸收和代謝程度。血清中CHO和TG的含量反映了動物體內的脂類代謝狀況[12]。在本研究中發現，添加兩種不同形式蛋氨酸的酶解羊毛粉飼喂的大口黑鱸肝臟和血清中的GLU、AKP、ACP等生化指標并無顯著差異。然而，酶解羊毛粉并添加晶體蛋氨酸部分代替魚粉后，肝臟和血清中的TP含量極顯著降低，TG含量極顯著升高，提示具有高脂蛋白血癥的風險，而添加包膜蛋氨酸的酶解羊毛粉可緩解上述現象，進一步說明包膜蛋氨酸更易維持蛋白質的代謝平衡，進而調節脂質代謝。以上結果表明與添加晶體蛋氨酸相比，酶解羊毛粉添加包膜蛋氨酸更適合替代魚粉，而不會影響大口黑鱸的機體代謝。

圖2各組大口黑鱸肝臟抗氧化指標的檢測結果

注：a.丙二醛MDA/ U?L^-1 ；b.總抗氧化能力 T- AOC/[mmol?L^-1 ；c.超氧化物歧化酶 SOD/（U?L^-1） ；d.過氧化氫酶 CAT/（U?L^-1）^* 表示差異顯著 （Plt;0.05） ，**表示差異極顯著（ Plt;0.01） ，***表示差異極顯著（ Plt;0.001? 。

抗氧化酶活性是魚類組織中抗氧化應激的主要保護機制，其活性與其表達水平和濃度密切相關。抗氧化酶，如SOD、T一AOC和CAT是對自由基產生干擾非常重要的氧化應激酶，能夠清除多余自由基，抵御氧化損傷[13]。SOD催化超氧化物自由基還原為過氧化氫，將它們從細胞系統中消除。MDA是脂質過氧化的天然生物標志物和主要終結產物，可與蛋白質的游離氨基發生作用，引起蛋白質分子內和分子間交聯而導致細胞損傷[14]。在本研究中，添加晶體蛋氨酸的酶解羊毛粉處理組顯著升高了MDA含量，降低了SOD、T一AOC、CAT的含量，導致肝臟的氧化應激。但有趣的是，在添加包膜蛋氨酸的酶解羊毛粉的飼喂組中，MDA含量下降，SOD、T一AOC和CAT上升，顯著緩解了氧化應激損傷。這些結果說明添加包膜蛋氨酸的酶解羊毛粉代替魚粉更能維護大口黑鱸的氧化還原穩態。在羅非魚的研究中，也比較了兩種不同形式的蛋氨酸添加劑對魚體的影響，結果顯示包膜蛋氨酸較晶體蛋氨酸具有更高的利用效率和更好的促生長效果，這與本研究中的包膜蛋氨酸更適合大口黑鱸的結論相似[15]。總之，添加蛋氨酸的酶解羊毛粉能夠代替大口黑鱸飼料中一定比例的魚粉，并且與添加晶體蛋氨酸相比，添加包膜蛋氨酸的酶解羊毛粉更有利于大口黑鱸的代謝穩態和氧化還原平衡。

5結論

隨著全球水產養殖的擴大和加強，魚類的營養獲取方式正從魚和魚粉向顆粒水產飼料過渡。研究發現，使用酶解羊毛粉代替魚粉后，相較于晶體蛋氨酸，通過補充包膜蛋氨酸可以有效改善羊毛粉替代物造成的氧化應激損傷和脂質代謝紊亂。由于魚粉產量供給不平衡以及價格成本高，更多的可持續資源旨在代替魚粉如酶解羊毛粉等新型蛋白源備受關注，利用多種蛋白質來源對水產飼料的經濟和可持續發展至關重要。

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