廣藿香Trihelix家族基因PatGT-Ia的克隆、生物信息學(xué)及表達(dá)分析

關(guān)鍵詞：廣藿香；Trihelix基因家族；GT-1；基因克?。槐磉_(dá)模式； PatGT-Ia 基因中圖分類號(hào)： S567.23Σ⁺9.01 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-1302（2025）12-0033-08

轉(zhuǎn)錄因子可以通過(guò)直接結(jié)合基因啟動(dòng)子上的順式作用元件并促進(jìn)或抑制其轉(zhuǎn)錄活性，從而影響靶基因的表達(dá)，控制各種生物過(guò)程[1]。目前，植物中已有超過(guò)60個(gè)轉(zhuǎn)錄因子家族被鑒定出，作為一類重要的調(diào)控因子，轉(zhuǎn)錄因子在植物的生長(zhǎng)發(fā)育、次生代謝及脅迫應(yīng)答等方面發(fā)揮著不可或缺的作用，如研究比較透徹的有MYB、WRKY、NAC及AP2/ERF等轉(zhuǎn)錄因子家族。與植物的其他轉(zhuǎn)錄因子家族相比，Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族是其中比較小且研究相對(duì)較少的一個(gè)家族，又被稱為GT家族，因?yàn)槠浼易宄蓡T可以特異性地與DNA序列上的GT元件結(jié)合[2]。Trihelix 家族成員最明顯的特征是在DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域含有3個(gè)串聯(lián)的螺旋結(jié)構(gòu)（螺旋－環(huán)－螺旋-環(huán)-螺旋），此結(jié)構(gòu)域在Trihelix家族的不同成員中高度保守并且含有較多的堿性和酸性氨基酸、脯氨酸和谷氨酰胺[3]。根據(jù)Trihelix保守結(jié)構(gòu)域的特征，又可將此家族劃分為5個(gè)亞家族，包括GT-1，GT-2，GTγ，SH4 和 SIP1^[2] 。目前，Trihelix 家族越來(lái)越吸引研究者的興趣，不同植物的Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族特征也逐漸被報(bào)道，如水稻、藜麥、菠蘿、番茄、玉米、人參、石斛、甜瓜等[4-1]

廣藿香［Pogostemoncablin（Blanco）Benth.]為唇形科刺蕊草屬的多年生草本植物，其干燥地上部分為中藥廣藿香，為嶺南道地藥材，具有芳香化濁、開胃止嘔、發(fā)表解暑的功能，臨床應(yīng)用廣泛[12]。廣藿香醇是廣藿香主要的藥效活性成分，也是廣藿香油的主要組成部分，化學(xué)結(jié)構(gòu)上屬于倍半萜化合物。廣藿香醇的生物合成通路起源于植物細(xì)胞質(zhì)中的甲羥戊酸（MVA）途徑和質(zhì)體中的甲基赤蘚糖醇磷酸（MEP）途徑而合成所有萜類化合物的共同前體物質(zhì)：異戊烯焦磷酸（IPP）和其同分異構(gòu)體二甲烯丙基焦磷酸（DMAPP）;IPP和DMAPP在法尼基焦磷酸酶（FPS）的催化下生成倍半萜化合物的共同前體法尼基焦磷酸（FPP），F(xiàn)PP隨后在廣藿香醇合酶（PatPTS）的催化下生成廣藿香醇[13]。隨著廣藿香醇生物合成途徑的闡明，關(guān)于轉(zhuǎn)錄因子對(duì)途徑上酶基因的調(diào)控研究也日漸吸引研究者的興趣。目前，廣藿香轉(zhuǎn)錄因子PatSWC4、PatDREB、PcWRKY44及PcbZIP44已被證實(shí)可通過(guò)結(jié)合并調(diào)控廣藿香醇合成途徑基因的表達(dá)從而控制廣藿香醇的生物合成[14-17]。在前期研究中，表達(dá)譜數(shù)據(jù)分析和酵母單雜交文庫(kù)篩選試驗(yàn)初步提示廣藿香Trihelix轉(zhuǎn)錄因子 PatGT-Ia 可能參與廣藿香醇的合成調(diào)控，因此，本研究擬對(duì) PatGT-Ia 基因進(jìn)行克隆及生物信息學(xué)分析，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析PatGT-Ia 在廣藿香的組織特異性表達(dá)水平及其在激素處理下的表達(dá)模式，分析 PatGT-Ia 的亞細(xì)胞定位和轉(zhuǎn)錄自激活活性；本研究一方面可豐富廣藿香Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族的研究，另一方面又可為后續(xù) PatGT-Ia 功能的研究奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

廣藿香植物采自廣州中醫(yī)藥大學(xué)時(shí)珍山并經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)詹若挺研究員鑒定為唇形科刺蕊草屬?gòu)V藿香，移栽并培育于仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院植物培養(yǎng)室。于2023年5月選取生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)一致（具有3對(duì)真葉）的廣藿香苗進(jìn)行本試驗(yàn)，試驗(yàn)地點(diǎn)主要在仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院。

OminiPlantRNAKit（DNaseI）試劑盒購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司;pLB零背景快速克隆試劑盒購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司； 2×Taq Plus Master Mix II （Dye Plus）、Phanta Max Super -Fidelity DNA Polymerase、ClonExpress II One StepCloningKit、FastPure Gel DNA Extraction Mini Kit、HiScript RT SuperMix for qPCR（ + gDNAwiper）、ChamQUniversalSYBRqPCRMasterMix、大腸桿菌 DH5α ，以上試劑盒及感受態(tài)細(xì)胞購(gòu)自南京諾唯贊生物科技股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1植物處理采用qRT-PCR測(cè)定PatGT-?_Ia 基因的相對(duì)表達(dá)量，隨機(jī)選取生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)一致（具有3對(duì)真葉）的廣藿香苗進(jìn)行如下處理。

1.2.2組織采集采集廣藿香的葉、莖、根，每個(gè)組織采集3個(gè)生物學(xué)重復(fù)樣品，液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80^°C 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3MeJA處理配制 100μmol/L MeJA溶液并噴施于廣藿香葉片，在處理后的 0.4，8，12，24h 時(shí)分別采集第2對(duì)真葉，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集3個(gè)生物學(xué)重復(fù)樣品，液氮速凍后轉(zhuǎn)移至 -80^°C 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4廣藿香總RNA提取及cDNA合成按照試劑盒說(shuō)明書方法，利用OminiPlantRNAKit（DNaseI）試劑盒提取廣藿香總RNA。取定量的RNA，按照HiScript II Q RT SuperMix for qPCR （+gDNA wiper）試劑盒的方法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成第1鏈cDNA，于 -20^°C 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5 PatGT-Ia 基因克隆與測(cè)序從前期建立的廣藿香全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組中挖掘 PatGT-Ia 基因的ORF序列并設(shè)計(jì)特異性引物 PatGT-Ia-F/R（ F：5^′ -ATGTACATGTCCGATAAACCCC -3^′ 5 R：5^′ -TTTACAAGCACGATTCTCACCG -3^′ ），依據(jù)PhantaMaxSuper-FidelityDNAPolymerase說(shuō)明書方法以合成的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。利用瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證PCR產(chǎn)物，將檢驗(yàn)合格的目標(biāo)條帶純化回收，隨后構(gòu)建到pLB載體并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌 DH5α ，經(jīng)菌液PCR驗(yàn)證后送至公司測(cè)序。廣州天一輝遠(yuǎn)基因科技有限公司負(fù)責(zé)本研究的引物合成及常規(guī)測(cè)序。

1.2.6 PatGT-Ia 的生物信息學(xué)分析使用表1的在線軟件對(duì) PatGT-Ia 進(jìn)行相應(yīng)的生物信息學(xué)分析。系統(tǒng)進(jìn)化樹使用本地軟件MEGA－X構(gòu)建，建樹方法為鄰-接（neighbor－joining，簡(jiǎn)稱NJ）法，Bootstrap設(shè)置為1000，其余參數(shù)默認(rèn)。

1.2.7 PatGT-Ia 基因的qRT-PCR分析根據(jù)克隆的 PatGT-Ia 基因序列設(shè)計(jì)qRT-PCR引物q-PatGT-Ia-F/R（F_：S^′-AGTCACAATTCAGCTC ACCC-3^′ ;R：5'-TTTGCGGAGAAGGATGAGTG-3^′ ），以廣藿香cDNA為模板，依據(jù)ChamQUniversalSYBRqPCRMasterMix試劑盒說(shuō)明書步驟進(jìn)行qRT-PCR分析。內(nèi)參基因?yàn)閺V藿香Pat18S基因（引物 q-PatIamp;S-F/R，F(xiàn)ξ 5'-TCGCCGTTCGGACCAAATAA- -3^′ ： R：5^′ -CGATGGTTCACVGGGATTCTGC-3^′） ，每組試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)和2個(gè)技術(shù)重復(fù)，使用 法處理數(shù)據(jù)。

1.2.8PatGT-1a的亞細(xì)胞定位分析將PatGT-1a的ORF克隆至pAN580載體，構(gòu)建EGFP-PatGT-1a融合蛋白表達(dá)載體。以Yoo等報(bào)道的方法，將對(duì)照pAN580空載體和pAN580-EGFP-PatGT-1a質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì)體，使用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)對(duì)照pAN580、EGFP-PatGT-1a融合蛋白及葉綠體自發(fā)熒光的表達(dá)情況[18] 。

表1生物信息學(xué)分析軟件及用途

1.2.9 PatGT-Ia 的轉(zhuǎn)錄自激活活性分析構(gòu)建pGBKT7 -PatGT-Ia 質(zhì)粒，并將其和pGBKT7空載體質(zhì)粒依據(jù)說(shuō)明書方法轉(zhuǎn)化至酵母Y2HGold。將轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布在 SD/-Trp 固體培養(yǎng)基上，于 28^°C 培養(yǎng)4d，挑取單菌落利用PCR驗(yàn)證陽(yáng)性單克隆。驗(yàn)證成功后，將陽(yáng)性克隆子置于 SD/-Trp 液體培養(yǎng)基中，在 28^°C 搖菌培養(yǎng)后將酵母液稀釋10倍后分別在 SD/-Trp.SD/-Trp+50μg/mLX-∝-Gal. ABA固體培養(yǎng)基上進(jìn)行點(diǎn)斑驗(yàn)證，陽(yáng)性對(duì)照為pGBKT7-53/pGADT7-T 質(zhì)粒，陰性對(duì)照為pGBKT7空載體質(zhì)粒。

2 結(jié)果與分析

2.1廣藿香 PatGT-Ia 基因的克隆與序列分析

克隆得到ORF長(zhǎng)度為 1179bp 的基因片段（圖1），Swiss-Prot注釋結(jié)果顯示，基因序列與擬南芥Trihelix轉(zhuǎn)錄因子GT-1（AT1G13450.1）同源，故命名為 PatGT-Ia 。將 PatGT-1a 和擬南芥Trihelix家族的氨基酸序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，可見 PatGT-Ia 與AT1G13450.1-3聚為一支，親緣性近；根據(jù)擬南芥Trihelix家族的亞家族分類， PatGT-Ia 可劃分至GT-1亞家族（圖2）。

PatGT-Ia 序列分析顯示其編碼392個(gè)氨基酸，終止密碼子為TGA。根據(jù)BLAST比對(duì)結(jié)果，從NCBI上下載擬南芥（Arabidopsisthaliana）、松蒿（Phtheirospermum japonicum）、一串紅（Salviasplendens）的同源蛋白進(jìn)行多序列比對(duì)，結(jié)果表明，和其他植物的GT-1一樣， PatGT-Ia 也含有1個(gè)GT1保守結(jié)構(gòu)域（圖3）。

圖1廣藿香PatGT-1a基因的PCR擴(kuò)增電泳條帶

2.2 PatGT-1a蛋白的理化性質(zhì)分析

Expasy工具分析結(jié)果顯示， PatGT-Ia 共編碼392個(gè)氨基酸，分子式為 C₁₉₂₇H₂₉₉₁N₅₅₇O₆₂₂S₁₃ ，原子總數(shù)為6110個(gè)，分子質(zhì)量約為 44.33ku 。含帶正、負(fù)電荷的殘基數(shù)目分別為51、60個(gè)，理論等電點(diǎn)和不穩(wěn)定指數(shù)分別為5.67、42.97；因不穩(wěn)定指數(shù)值 gt; 40，提示PatGT-1a為不穩(wěn)定蛋白質(zhì)。親水性平均系數(shù)、脂溶指數(shù)分別為-0.896、59.74。ProtScale軟件預(yù)測(cè)PatGT-1a在一級(jí)氨基酸結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)為親水性（圖4-A）。

2.3PatGT-1a蛋白的信號(hào)肽、蛋白結(jié)構(gòu)域及跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

SignalP-4.1在線軟件預(yù)測(cè)結(jié)果如圖4-B所示，原始剪切位點(diǎn)分值、信號(hào)肽剪切位點(diǎn)分值及綜合剪切位點(diǎn)分值均小于閾值0.5，說(shuō)明PatGT-1a蛋白不存在切割位點(diǎn)，不具有信號(hào)肽結(jié)構(gòu)，為非分泌蛋白。保守結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果顯示，PatGT-1a含有1個(gè)GT1保守結(jié)構(gòu)域，屬于GT1超家族（圖4-C）?？缒そY(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果表明，PatGT-1a肽鏈不存在跨膜結(jié)構(gòu)域，提示PatGT-1a蛋白為非跨膜蛋白（圖4-D）。

圖2廣藿香PatGT-1a和擬南芥Trihelix家族的系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.4PatGT-1a蛋白的磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)

NetPhos-3.1在線軟件預(yù)測(cè)提示，PatGT-1a蛋白可能的磷酸化位點(diǎn)有43個(gè)，其中絲氨酸位點(diǎn)數(shù)量最多（20個(gè)），其次為蘇氨酸位點(diǎn)（17個(gè)）和酪氨酸位點(diǎn)（6個(gè)）（圖4-E）。

2.5PatGT-1a蛋白的二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

SOPMA軟件的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果表明，PatGT-1a蛋白由 ∝ -螺旋、β-轉(zhuǎn)角、延伸鏈及無(wú)規(guī)則卷曲4種二級(jí)結(jié)構(gòu)組成，占比分別為 29.59% ！4.85% ， .14.03% 及 51.53% （圖5-A）。SWISS-MODEL在線軟件的蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)也顯示，PatGT-1a蛋白的結(jié)構(gòu)主要是無(wú)規(guī)則卷曲和 ∝ -螺旋，與二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果相符（圖5-B）。

圖4PatGT-1a的蛋白親水性/疏水性（A）、蛋白信號(hào)肽（B）、蛋白保守結(jié)構(gòu)域（C）、蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域（D）、蛋白磷酸化位點(diǎn)（E）預(yù)測(cè)

圖5PatGT-1a蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)（A）和三級(jí)結(jié)構(gòu)（B）預(yù)測(cè)

2.6 PatGT-1a蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化分析

從NCBI下載其他植物物種的GT-1氨基酸序列，并通過(guò)MEGA-X軟件的鄰-接法構(gòu)建與PatGT-Ia 的系統(tǒng)進(jìn)化樹，可見 PatGT-Ia 氨基酸序列與同為唇形科一串紅SsGT-1的同源性最高，兩者聚為一個(gè)類群，具有較近的親緣關(guān)系（圖6）。

2.7 PatGT-Ia 基因的表達(dá)分析

利用qRT-PCR測(cè)定 PatGT-Ia 基因在廣藿香不同組織及MeJA處理后的相對(duì)表達(dá)量。由圖7-A可知， PatGT-Ia 在廣藿香的根、莖及葉中均有表達(dá)，以在根中的表達(dá)量最高，其次為莖、葉。經(jīng)過(guò)外源MeJA噴施處理后， PatGT-Ia 基因的表達(dá)量與對(duì)照組 （0h） 比較顯著提高，在處理時(shí)間 4～24h 內(nèi)PatGT-Ia 基因表達(dá)量呈上升趨勢(shì);其中 24h 時(shí)的表達(dá)量最高，是 ^0h 的1.99倍（圖7-B）。

2.8 PatGT-1a的亞細(xì)胞定位分析

將構(gòu)建成功的 pAN580-EGFP-PatGT-Ia 表達(dá) 載體和空載體pAN580-EGFR分別轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì) 體，激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示，EGFR對(duì)照在葉

綠體和細(xì)胞核中均有綠色熒光，而EGFP-PatGT-1a僅在細(xì)胞核中有綠色熒光，表明PatGT-1a定位到細(xì)胞核，與WoLFPSORT在線預(yù)測(cè)結(jié)果一致（圖8）。

圖8PatGT-1a的亞細(xì)胞定位

2.9 PatGT-Ia 的轉(zhuǎn)錄自激活活性分析

轉(zhuǎn)錄自激活活性試驗(yàn)結(jié)果表明，轉(zhuǎn)陽(yáng)性對(duì)照 pGBKT7-53/pGADT7-T、pGBKT7空載體質(zhì)粒、pGBKT7/PatGT-1a的酵母都可以在SD-Trp和SD-Trp+50μg/mLX-α-Gal 固體培養(yǎng)基上正常生長(zhǎng)；轉(zhuǎn)陽(yáng)性對(duì)照pGBKT7-53/pGADT7-T和pGBKT7/PatGT-Ia 的酵母在 SD-Trp+50μg/mL ABA固體培養(yǎng)基上均可正常生長(zhǎng)且顯藍(lán)斑，而轉(zhuǎn)陰性對(duì)照pGBKT7空載體的不能生長(zhǎng)，表明 PatGT-Ia 有轉(zhuǎn)錄自激活活性（圖9）。

圖9PatGT-1a的轉(zhuǎn)錄自激活活性分析

3討論與結(jié)論

有研究表明，Trihelix家族成員參與了植物的次生代謝調(diào)控，如在擬南芥中，AtGT-3b可分別結(jié)合并調(diào)控膽堿單加氧酶（CMO）基因和甜菜堿醛脫氫酶（BADH）基因的表達(dá)，從而促進(jìn)甜菜堿的合成，提高擬南芥的耐鹽脅迫能力[19]。長(zhǎng)春花的GT－1轉(zhuǎn)錄因子可與CPR基因的啟動(dòng)子結(jié)合并調(diào)控基因的表達(dá)，最終調(diào)節(jié)萜類吲哚堿的生物合成[20]。在二穗短柄草中，BdCSLF6和BdXTH8基因的表達(dá)受到Trihelix轉(zhuǎn)錄因子BdTHX1的調(diào)控，從而調(diào)控混聯(lián)葡聚糖的合成[21]。GTL1可結(jié)合水楊酸代謝途徑上基因的啟動(dòng)子并調(diào)控基因表達(dá)，最終促進(jìn)水楊酸的代謝[22]。Liu 等研究發(fā)現(xiàn)，蘋果Trihelix 轉(zhuǎn)錄因子MdSIP1-2可通過(guò)與MdNIR1基因的啟動(dòng)子結(jié)合，抑制其轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而調(diào)控硝酸鹽的合成及代謝[23]。Zhu 等利用RNAi技術(shù)沉默人參 04后發(fā)現(xiàn)單體皂苷Rg1、Rd、PPT和PPD的含量均提高，表明Trihelix轉(zhuǎn)錄因子 PgGT25-04 是人參皂苷生物合成的負(fù)調(diào)控子[24]

目前，關(guān)于廣藿香Trihelix轉(zhuǎn)錄因子的研究鮮有報(bào)道。本研究成功克隆了1個(gè)廣藿香Trihelix家族基因 PatGT-Ia ，該基因編碼392個(gè)氨基酸；分析發(fā)現(xiàn)PatGT-1a蛋白為不穩(wěn)定的親水性蛋白，無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽，并含有20個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn)；保守結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn)其含有1個(gè)GT1結(jié)構(gòu)域。Trihelix家族根據(jù)保守結(jié)構(gòu)域的氨基酸和DNA結(jié)合域的數(shù)量，可細(xì)分為5個(gè)亞家族GT-1、GT-2、GTγ，SH4 和 SIP1^[2] 。在本研究中，根據(jù)擬南芥Trihelix家族的分類， PatGT-Ia 可歸類到Trihelix家族的GT-1亞家族。GT-1轉(zhuǎn)錄因子是首個(gè)在豌豆中被發(fā)現(xiàn)的Trihelix家族成員，其可以特異性結(jié)合rbcS－3A基因啟動(dòng)子上的光響應(yīng)GT元件Box II/GT1box（5^′-GTGTGGTTAATATG-3^′） ，GT-1亞家族也因其而得名[25]。同時(shí)，PatGT－1a與其他物種GT-1蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示，PatGT-1a氨基酸序列與同為唇形科的一串紅SsGT-1的同源性最高，具有較近的親緣關(guān)系。亞細(xì)胞定位試驗(yàn)顯示，PatGT-1a為細(xì)胞核定位蛋白，與擬南芥AtGT-1的結(jié)果[26]一致。轉(zhuǎn)錄自激活活性試驗(yàn)亦顯示， PatGT-Ia 具有轉(zhuǎn)錄自激活活性。

前人研究發(fā)現(xiàn)，GT-1在植物不同的組織器官和不同生長(zhǎng)時(shí)期中均有轉(zhuǎn)錄表達(dá)[26-27]。同樣的，本研究結(jié)果亦顯示， PatGT-Ia 在廣藿香的根、莖及葉中均有表達(dá)，這與煙草 GT-Ia 基因和番茄 GT-I 基因的表達(dá)情況相似；不同的是 PatGT-Ia 在根中的表達(dá)量最高，煙草 GT-Ia 主要在莖中表達(dá)，番茄GT-1 則在根、莖、葉中的表達(dá)無(wú)明顯差異[27-28] 。崔保祿等克隆了番GT-1亞家族的3個(gè) GT-I 基因，噴施外源茉莉酸甲酯后發(fā)現(xiàn)它們的表達(dá)均被抑制[28]；而在本研究中，在MeJA處理下， onumberPatGT- Ia 的表達(dá)量顯著升高，提示 PatGT-Ia 為茉莉素響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子，可能參與茉莉素信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)。Green等研究證明，GT-1可以激活 rbcS-3A 基因的轉(zhuǎn)錄活性，擬南芥 AtGT-I 也被證明可通過(guò)與TFIIA-TBP-TATA復(fù)合體互作從而激活基因的轉(zhuǎn)錄;然而Le等則發(fā)現(xiàn)， AtGT-I 通過(guò)結(jié)合光調(diào)控基因RBCS- 和RPL21的啟動(dòng)子并抑制它們的轉(zhuǎn)錄活性[29-31]。至于 PatGT-Ia 是否影響廣藿香醇合成通路上基因的轉(zhuǎn)錄活性，是否影響廣藿香醇的生物合成，后續(xù)還需要進(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。

綜上所述，本研究克隆得到1個(gè)廣藿香Trihelix轉(zhuǎn)錄因子家族基因 PatGT-Ia ，對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析并考察了基因表達(dá)模式、亞細(xì)胞定位及轉(zhuǎn)錄自激活活性，研究結(jié)果有助于加深對(duì)廣藿香Trihelix家族的認(rèn)識(shí)，并為后續(xù)深人探討 PatGT-Ia 的功能提供參考。

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［２９］ＧｒｅｅｎＰＪ，ＹｏｎｇＭ Ｈ，ＣｕｏｚｚｏＭ，ｅｔａｌ．Ｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒｐｅａｎｕｃｌｅａｒｐｒｏｔｅｉｎｆａｃｔｏｒＧＴ－１ｃｏｒｒｅｌａｔｅｗｉｔｈｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｌｉｇｈｔ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｒｂｃＳ－３Ａｇｅｎｅ［Ｊ］．ＴｈｅＥＭＢＯ ｊｏｕｒｎａｌ，１９８８，７（１３）：４０３５－ ４０４４．

［３０］ＬｅＧｏｕｒｒｉｅｒｅｃＪ，ＬｉＹＦ，ＺｈｏｕＤＸ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｂｙ ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＧＴ－１ｍａｙｂｅｔｈｒｏｕｇｈｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＴＦＩＩＡ－ＴＢＰ－ ＴＡＴＡｃｏｍｐｌｅｘ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，１９９９，１８（６）：６６３－６６８．

［３１］ＬｅＧｏｕｒｒｉｅｒｅｃＪ，ＤｅｌａｐｏｒｔｅＶ，ＡｙａｄｉＭ，ｅｔａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆ ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＧＴ－１ｉｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｌｉｇｈｔ－ ｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ［Ｊ］．ＧｅｎｏｍｅＬｅｔｔｅｒｓ，２００２，１（２）：７７－８２．