植物MPKs及其與底物相互作用的研究進展

中圖分類號：Q945.18 文獻標識碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006—6500.2025.07.001

Abstract：Mitogenactivatedproteininases（MPKs）arekeysignalregulatorsinplants，nvolediniticalphysiologicalpro suchasgrowthanddevelopment，stressresponses，andhormonesignal transduction.AsdownstreameffctorsintheMPKcascade， MPKsregulatedspecificsubstratesroughphosphorylation，preciselycontrolingvariousphysiologicalprocesseswithntell， enabling plants toapidlyrespondtoenvironmentalchangesandenhanceadaptability.Thisreviewsummarizedrecentresearchon plant MPKsandtheir interactions with substrates，analyzedtheactionmechanismsofrepresentativeMPKsandtheirimpactoplant physiologicalprocesss.DuetoteigconservationofMPKscrossdiferentplantspeies，thisresearchprovdesvuablerfereces for studies on other plants and offers new perspectives for further research on plant MPK signaling.

Key Words： plant; MPKs; MPK substrates; interactions; growth and development; stress response

絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated proteinkinases，MPKs）級聯(lián)是細胞信號轉導中的一個重要途徑，在植物中廣泛參與調節(jié)多種生物學過程，包括生長發(fā)育、免疫反應以及環(huán)境脅迫等。MAPK通路由三類激酶組成：絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶（MPKKKs）絲裂原活化蛋白激酶激酶（MPKKs）和絲裂原活化蛋白激酶（MPKs），其激活過程通過磷酸化逐級傳遞信息，最終引發(fā)細胞的生理反應[2-3]。MPK級聯(lián)通路通過激活下游激酶和底物，進一步傳遞信號并調控細胞內(nèi)的多種生物學過程，從而使植物能夠迅速響應外界環(huán)境變化，調整自身的生理狀態(tài)，并提高適應能力。

近年來，MPK信號通路下游激酶與底物之間的相互作用逐漸成為研究的熱點。許多底物通過MPKs的磷酸化作用在植物的生長發(fā)育、免疫及應激反應中發(fā)揮重要作用。深人了解MPKs與特定底物的相互作用機制，對于揭示植物在應激反應和發(fā)育過程中的分子機制具有重要意義。特別是在農(nóng)業(yè)領域，研究MPK信號通路及其底物相互作用的機制，以期為提高植物抗逆性和改良作物性能提供新的思路和技術支持。本文旨在總結植物MPKs及其與底物相互作用的研究進展，并探討未來研究的方向。鑒于MPKs在不同植物物種中具有高度的保守性，這為其他植物的相關研究提供了重要的理論依據(jù)，同時也為植物信號傳導領域的深人探索提供了新思路。

1植物MPKs的組成與分類

植物MPKs包含11個蛋白激酶亞結構域（I～

XI），其中結構域 VII 和VIII 的保守性尤為顯著。MPKs的激活依賴于上游激酶MPKKs對其活化環(huán)（T環(huán)）中的Thr-X-Tyr（TXY）基序的磷酸化作用，該基序位于催化亞結構域VII和VIII之間。進一步研究表明，MPKKs的活性受MPKKKs調控，后者通過磷酸化MPKKs中的絲氨酸/蘇氨酸殘基激活MPKKs，從而形成MPKKKs-MPKKs-MPKs級聯(lián)信號通路。

根據(jù)磷酸化基序類型及系統(tǒng)發(fā)育分析，植物MPKs可分為 A，B，C，D 四個亞家族。其中，A、B、C亞家族成員均含有TEY（Thr-Glu-Tyr）磷酸化基序，而D亞家族則具有植物特有的TDY（Thr-Asp-Tyr）基序，且其C末端序列較長，與哺乳動物和酵母p38MPK同源性較高（如AtMPK8、AtMPK9）l6-8。擬南芥

20個MPK基因依據(jù)系統(tǒng)發(fā)育關系被劃分為4個亞家族：A亞型（AtMPK3/6/10）B亞型（AtMPK4/5/11/12/13）C亞型（AtMPK1/2/7/14）和D亞型（AtMPK8/9/15/16/17/18/19/20） Xin 等研究表明，A亞家族MPKs（如AtMPK3和AtMPK6）不僅參與植物免疫應答和非生物脅迫響應，還在生長發(fā)育調控中發(fā)揮重要作用[。Nagy等指出D亞家族成員AtMPK9表現(xiàn)出自激活特性，能夠通過自主磷酸化其TDY基序中的Thr和Tyr殘基實現(xiàn)不需要上游MPKK的激活。

Ichimura等和Mohanta等分別通過多物種比較和大規(guī)模序列分析建立了植物MPKs的分類體系，為相關研究提供了重要參考。表1列出了不同植物物種中MPKs基因的亞家族分類情況。

表1部分植物MPKs的分類和數(shù)量

Tab.1 Classification of MPKs in some plant species

2 MPKs與底物的相互作用

2.1MPKs—底物模塊在植物生長發(fā)育中的作用

在植物的生長發(fā)育過程中，MPKs與轉錄因子之間的相互作用已被證明是調節(jié)氣孔發(fā)育及花粉發(fā)育等過程的重要機制。以氣孔發(fā)育為例，MPK3/6已被證實能夠與SPCH和SCRM相互作用，從而調節(jié)氣孔的發(fā)育。其中SPCH是一種bHLH轉錄因子，在氣孔發(fā)育的起始階段發(fā)揮關鍵作用[28]。SCRM通過其雙分部位結構直接與MPK3/6結合，招募并調控

SPCH的磷酸化及降解，從而啟動氣孔分化過程2。此外，MPK3/6還通過磷酸化WRKY2/34轉錄因子，調控成熟花粉中脂質體的積累，進而影響花粉發(fā)育[30。最近有研究進一步揭示了MPK3/6與CPK5/CPK6的協(xié)同作用，兩者分別通過磷酸化WRKY33的不同位點，增強其轉錄活性和DNA的結合能力，共同調控花青素合成3，這在植物生長調節(jié)中起到重要作用。其中，MPK3/6磷酸化WRKY33的N端Ser位點對其功能具有重要影響。

除轉錄因子外，MPKs通過特異性磷酸化不同功能蛋白精確調控多個關鍵發(fā)育環(huán)節(jié)。研究表明，

MPK6通過雙重機制參與發(fā)育調控：一方面磷酸化生長素轉運蛋白PIN1蛋白的 Ser337 位點調控植株的分枝模式32，另一方面在生殖發(fā)育中通過磷酸化抑制磷脂酰肌醇激酶PIP5K6活性，降低PIP2水平，破壞花粉管頂端的膜轉運和膨壓調節(jié)，最終導致花粉管極性生長缺陷，影響生殖過程[33]。同時，MPK3/6能通過磷酸化細胞極性蛋白BASL和信號支架蛋白MASS，建立氣孔譜系細胞的不對稱分裂模式，精確控制氣孔發(fā)育過程4。此外，MPK4不僅通過磷酸化微管結合蛋白 MAP65-1 維持細胞骨架動態(tài)平衡[35，還在保衛(wèi)細胞中通過其激酶活性參與氣孔免疫防御3，展現(xiàn)了該激酶的多效性調控特征。這些研究揭示了MPKs信號網(wǎng)絡通過差異化的磷酸化策略在植物發(fā)育中的多層次調控作用，如表2所示，系統(tǒng)地展示了MPKs與底物在植物各個發(fā)育階段中的具體功能。

表2MPKs與底物在植物生長發(fā)育中的作用 Tab.2Reported interactions between MPKs and Substrates in plant growth and development

2.2MPKs—底物模塊在植物生物脅迫中的作用

植物在生物脅迫條件下的防御機制也依賴于MPKs與轉錄因子的相互作用，不僅包括對免疫基因的調控，還涉及氣孔開閉、抗病性等多方面的免疫機制。例如，擬南芥CAMTA3作為植物免疫負調節(jié)劑的轉錄因子，在經(jīng)過MPK3/6磷酸化 flg22 處理后，會產(chǎn)生雙重作用：一方面使CAMTA3蛋白不穩(wěn)定，另一方面促進其從核到細胞質的轉運[42]。這表明CAMTA3在面對不同類型的脅迫時可能通過不同分子途徑調節(jié)植物的免疫反應。此外，MYB44通過與MPK3/6的啟動子結合，促進其表達，而激活后的MPK3/6可磷酸化MYB44并增強其轉錄活性，從而形成正反饋機制，增強植物對病原的免疫反應[43]。研究發(fā)現(xiàn)，棉花中的Raf樣激酶GhRAF39_1能夠輔助調控GhMPK9磷酸化GhWRKY4Oa，被激活的GhWRKY40a可促進防御基因表達，并調節(jié)氣孔開閉，從而增強棉花對枯萎病的抗性[44]。在蘋果中，MdMPK3通過直接與MdWRKY17相互作用并磷酸化其特定殘基來調節(jié)MdWRKY17的活性，從而調控MdDMR6基因的表達，促進水楊酸（SA）的降解，降低對葉斑病的抗性[45]。

此外，MPK3和MPK6還能與多種功能性蛋白相互作用，通過多層次的調控網(wǎng)絡增強植物防御能力。研究表明，MPK3/6不僅磷酸化免疫反應相關蛋白 SGT1a/b 直接激活防御反應，從而顯著提高植物對青枯病的抗性4;還能通過正反饋調節(jié)磷酸化上游MPKKK5，放大防御信號47。MPK3通過特異性識別膜蛋白Exo70B2并調控其與自噬標記蛋白ATG8的相互作用，促進Exo70B2的自噬途徑降解[48，而MPK6則通過磷酸化修飾免疫調控蛋白AHL13的穩(wěn)定性，從而顯著提升植物免疫應答能力[4]。值得注意的是，水稻OsMPK6通過磷酸化OsEDR1的S861位點，促使其不穩(wěn)定化，從而解除對OsMPKK10.2的抑制作用，最終顯著增強對細菌性條斑病的抗性[50。這些發(fā)現(xiàn)揭示了MPK3/6通過多重分子機制協(xié)同增強植物抗病性的調控模式，為理解植物環(huán)境適應機制提供了新視角。

2.3MPKs—底物模塊在植物非生物脅迫中的作用

植物在非生物脅迫下的反應同樣與MPKs及其底物的相互作用密切相關。研究表明，MPK3/6作為該網(wǎng)絡的核心組分，通過特異性磷酸化不同底物來協(xié)調植物的脅迫響應。在鹽脅迫條件下，MPK3通過磷酸化修飾脂質轉運蛋白AZI1，調節(jié)其在細胞中的定位和穩(wěn)定性，從而影響植物對鹽脅迫的響應5]。同時，Yan等[52研究發(fā)現(xiàn)MPK3/6還通過負向調控轉錄因子ARR1/10/12的磷酸化水平并促進其降解，進而增強植物的耐鹽性。在干旱脅迫響應中，MPK3/6展現(xiàn)出多層次的調控功能。該激酶通過磷酸化轉錄抑制因子IAA15來調控側根發(fā)育動態(tài)，使植物能夠優(yōu)化其根系構型以適應水分脅迫環(huán)境[53]。Wang等[54進一步研究表明，MPK3/6對IAA8/9的磷酸化修飾能夠增強這些蛋白的穩(wěn)定性，進而抑制生長素信號通路的活性，最終調節(jié)植物的干旱響應。這些發(fā)現(xiàn)不僅揭示了MPK3/6在不同非生物脅迫響應中的核心作用，更展現(xiàn)了植物MPKs與底物互作網(wǎng)絡實現(xiàn)環(huán)境適應的分子機制。

無論是在生物脅迫還是非生物脅迫的條件下，MPKs與底物的相互作用均通過適應性調控發(fā)揮關鍵作用。如表3所示，展示了MPKs與底物在植物生物脅迫和非生物脅迫中的作用，深入解析這些蛋白互作的結構基礎與功能效應，將為作物抗逆性改良提供新的分子靶點。

表3MPKs與底物在植物生物脅迫和非生物脅迫中的作用

Tab.3Reported interactions between MPKs and Substrates in plant responses to biotic and abiotic stress

2.4MPKs—底物模塊在植物激素信號傳導中的作用MPKs與底物的相互作用也在植物激素信號傳

導中發(fā)揮著關鍵作用。例如，在擬南芥中，MKK4/5激活MPK1/2，MPK1通過磷酸化NPR1，促進其單體

化，調節(jié)水楊酸（salicylicacid，SA）信號傳導與葉片衰老過程75。研究表明，MPK6能通過多重機制參與植物激素網(wǎng)絡調控：一方面，MPK6直接磷酸化PIN1蛋白以調控生長素極性運輸；另一方面，MPK3/6通過修飾ACS2/6活性影響乙烯生物合成。MPKs與底物的相互作用在激素信號傳導上展現(xiàn)出廣泛的交叉調控能力。

在水稻中，OsMPK6磷酸化OsWRKY53可增強其DNA結合和轉錄激活活性，這對其調節(jié)谷粒大小以及油菜素內(nèi)酯（brassinosteroids，BR）信號傳導至關重要78。此外，OsMPK6還可通過磷酸化其另一底物DST來增強其轉錄活性，刺激OsCKX2的表達，導致生殖分生組織中細胞分裂素積累減少，進而使每穗粒數(shù)減少[79]。在玉米中，ZmMPK6則通過磷酸化ZmWRKY104，調控脫落酸（abscisicacid，ABA）誘導的抗氧化防御功能，從而增強玉米的抗旱性，減輕干旱引起的氧化損傷[80。這些研究展示了MPKs在植物激素信號傳導中的多重作用，突顯了其在調節(jié)植物生長和應激反應中的復雜性。

表4MPKs與底物在植物激素信號傳導中的作用

Tab.4Reported interactions between MPKs and Substrates in plant hormone signaling pathways

3MPKs與底物的識別與鑒定

3.1MPKs識別底物的分子機制

MPKs與底物形成復合物時，必須依賴于特異性對接相互作用[82。MPKs底物的識別主要通過其結構上的特定氨基酸序列，以及磷酸化作用對底物功能的調節(jié)。作為脯氨酸引導的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，MPKs通過短小的MPK停泊位點與底物的結合83。MPKs的CD結構域位于催化結構域外的C末端，包含一簇帶負電荷的氨基酸殘基，有助于與底物N末端的D位點（含有堿性氨基酸殘基）結合[84。D位點是底物識別的關鍵，通常由一簇堿性殘基（如賴氨酸和精氨酸）以及一個疏水基序（如亮氨酸、異亮氨酸或纈氨酸）組成，這些氨基酸特征通過靜電和疏水相互作用增強底物與MPKs的結合親和力，并穩(wěn)定底物的結合5。Jiang等提出具有相似D位點結構的蛋白質可作為候選MPKs底物。這一特性不僅促進了MPK的底物特異性識別，也為底物的篩選和鑒定提供了重要的線索。

3.2MPKs底物的鑒定方法

篩選并鑒定MPKs底物是理解MPK信號功能和潛在機制的關鍵。當前，常用的技術包括酵母篩庫[87]、高通量蛋白質陳列[88]磷酸化蛋白質組學[89] .ATP-γ- S標記法親和純化與質譜聯(lián)用（AP-MS）鄰近標記與質譜結合（PL-MS）92I、MPK級聯(lián)特異性抑制劑 U0126^[64] 等，這些技術通過檢測蛋白質相互作用、磷酸化水平或直接標記底物來識別MPKs的潛在底物，側重于大規(guī)模檢測和初步篩選。磷酸化蛋白質組學能夠廣泛捕捉磷酸化事件，但其操作較為復雜，且需要精密設備和大量時間。AP-MS和PL-MS方法也在捕捉底物篩選方面效果顯著，但它們無法直接提供底物的磷酸化位點信息，因此需要額外的磷酸化富集步驟進行進一步分析。

經(jīng)過大規(guī)模篩選方法能夠識別潛在的底物并確定其磷酸化位點，但無法提供對特定底物和MPKs相互作用的直接驗證。因此，在篩選之后，通常采用更為精確的驗證與功能確認方法進一步確認和細化MPKs與底物之間的相互作用。常見的方法包括酵母雙雜交（Y2H）、免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）尺寸排阻色譜（SEC）和雙分子熒光互補（BiFC）等技術[91-93]

隨著技術的不斷發(fā)展，新的方法如激酶客戶測定法（KiC）被提出，以提高底物識別的效率和準確性。KiC法結合了利用體外磷酸化反應和高分辨率質譜，能夠高效識別MPK激酶的底物，尤其適合進行大規(guī)模、高通量的底物篩選工作，從而顯著提高了篩選的速度和準確性，為底物篩選提供了有效的途徑。Bahk等成功應用此方法，識別了MPK3和MPK6的多個新底物。此外，磷酸化一抗壞血酸過氧化物酶鄰近標記技術（pAPEX）結合了鄰近標記和磷酸化富集，能夠在細胞內(nèi)空間特異性地標記MPKs的直接底物，并通過質譜分析精準確定磷酸化位點。pAPEX技術不僅提高了底物識別的特異性和準確性，而且操作較為簡便，具有更高的靈敏度和效率，為深入探討MPKs與底物的相互作用提供了新的方法和視角。Zhang等9通過結合pAPEX技術，成功識別了MAPK1和PKA的候選底物，并發(fā)現(xiàn)了C15orf39作為MAPK1的一個新底物。MPKs與底物的相互作用鑒定方法是一個多層次的過程，既包括大規(guī)模篩選，也需要細致的點對點驗證。隨著這些方法的不斷發(fā)展，未來我們將能更精準地揭示MPKs與其底物的復雜關系，推動植物信號傳導研究進入新階段。

4展望

盡管目前已有學者在擬南芥等模式植物中鑒定出部分MPK底物，未來的研究需要進一步關注不同植物種類間MPKs信號通路的異同與多樣性。隨著全基因組測序和磷酸化蛋白質組學技術的進步，這些方法將為更多MPK底物的鑒定提供有力支持。然而，該領域仍存在幾個關鍵挑戰(zhàn)：首先，如何建立準確高效的MPK底物篩選體系以適應不同植物物種；其次，MPKs信號通路的復雜性和交叉調控仍然有待深入解析。此外，雖然已有研究揭示了部分MPK底物在植物生長發(fā)育和逆境響應中的作用，但對于不同植物中MPK底物功能差異的研究仍顯不足。未來需要開展跨物種比較研究，闡明植物MPK通路的物種特異性及其生物學意義。

MPK信號通路的研究不僅具有重要的理論價值，更具有廣闊的農(nóng)業(yè)應用前景。深入理解MPKs與底物的相互作用機制，將有助于開發(fā)新型植物抗逆調控策略，進而提高作物抗逆性和產(chǎn)量。因此，未來研究既要注重基礎理論的突破，也要重視成果轉化，推動農(nóng)業(yè)生物技術的發(fā)展。

參考文獻：

[1]FUSF，CHOUWC，HUANGDD，etal.Transcriptional regulation of arice mitogen-activated protein kinase gene， OsMAPK4，in response to environmental stresses[J].Plant

and Cell Physiology，2002，43（8）：958-963.

[2] CHEONGYH，KIMKN，PANDEYGK，et al.CBL1， a calcium sensor that differentially regulates salt，drought， and cold responses in Arabidopsis [J].The Plant Cell，2003， 15（8）： 1833-1845.

[3] RODRIGUEZ M C S，PETERSEN M， MUNDY J. Mitogen-activated protein kinase signaling in plants [J]. Annual Review of Plant Biology，2010，61： 621-649.

[4] HIRT H. Multiple roles of MAP kinases in plant signal transduction[J]. Trends in Plant Science，1997，2（1）：11-15.

[5] TENA G，ASAI T， CHIU WL， et al. Plant mitogen-activated protein kinase signaling cascades[J].Current Opinion in Plant Biology，2001，4（5）： 392-400.

[6]MORRISON D K.MAP kinase pathways[J]. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology，2012，4（11）： a011254.

[7] ZHANG M M，ZHANG SQ.Mitogen-activated protein kinase cascades in plant signaling[J]. Journal of Integrative Plant Biology，2022， 64（2）： 301-341.

[8] Ichimura K，Shinozaki K，Tena G，et al. MAPK Group. Mitogen-activated protein kinase cascades in plants：a new nomenclature [J]. Trendsin Plant Science，2O02，7（7）： 301-308.

[9] MOHANTA T K，ARORA P K，MOHANTA N，et al. Identification of new members of the MAPK gene familyin plants shows diverse conserved domains and novel activation loop variants[J]. BMC Genomics，2015，16（1）： 58.

[10] XIN J，LI C L，NING K X，et al．AtPFA-DSP3，an atypical dual -specificity protein tyrosine phosphatase， affects salt stress response by modulating MPK3 and MPK6 activity[J].Plant，Cellamp; Environment，2021，44 （5）： 1534-1548.

[11] NAGY S K， DARULA Z， K？LLAI B M， et al. Activation of AtMPK9 through autophosphorylation that makes it Independent of the canonical MAPK cascades [J]. Biochemical Journal，2015，467（1）： 167-175.

[12] CHEN L H，HU W，TAN SL，et al.Genome-wide identification and analysis of MAPK and MAPKK gene families in Brachypodium distachyon[J].PLoS One，2012， 7（10）： e46744.

[13]LIANGWW，YANGB，YUBJ，etal.Identification and analysis of MKK and MPK gene families in canola （Brassica napus L.）[J]. BMC Genomics， 2013，14： 392.

[14]WANGJ，PAN CT，WANGY，etal.Genome-wide identification of MAPK，MAPKK，and MAPKKK gene familiesand transcriptional profilinganalysisduring development and stress response in cucumber[J].BMC Genomics，2015，16（1）： 386.

[15]WFIWCHAI77YIFVC talRininfor

identificationand transcriptprofileanalysisofthe mitogen -activated protein kinase gene family in the diploid woodland strawberry Fragaria vesca[J]. PLoS One， 2017，12（5）：e0178596.

[16] YIN ZJ，ZHU WD，ZHANG X P，et al.Molecular characterization，expression and interaction of MAPK， MAPKK and MAPKKK genes in upland cotton [J]. Genomics，2021，113（1 Part 2）： 1071-1086.

[17] MCNEECE BT， SHARMA K， LAWRENCE G W，et al. The mitogen activated protein kinase （MAPK） gene family functions as a cohort during the Glycine max defense response to Heterodera glycines[J].Plant Physiology and Biochemistry，2019，137：25-41.

[18] ZHANG XY，WANGL M，XU XY，et al.Genome-wide identification of mitogen-activated protein kinase gene familyin Gossypium raimondii and the function of their corresponding orthologs in tetraploid cultivated cotton[J]. BMC Plant Biology，2014，14： 345.

[19] ZHANG S Z，XU RR，LUO XC，et al.Genome-wide identification and expression analysis of MAPKand MAPKK gene family in Malus domestica[J]. Gene，2013， 531（2）： 377-387.

[20] LIUH，LIXY，HEF，etal.Genome-wideidentification and analysisof abiotic stress responsivenessof the mitogen-activated protein kinase gene family in Medicago sativaL.[J].BMC Plant Biology，2024，24（1）： 800.

[21] ZHANG X T，CHENG T C，WANG G H， et al. Cloning and evolutionary analysis of tobacco MAPK gene family [J].Molecular Biology Reports，2013，40（2）： 1407-1415.

[22] ROHILA J S，YANG Y N. Rice mitogen -activated protein kinase gene family and its role in biotic and abiotic stress response [J]. Journal of Integrative Plant Biology，2007， 49（6）： 751-759.

[23] NICOLE M C，HAMEL L P，MORENCY MJ，et al. MAP -ping genomic organization and organ -specific expression profiles of poplar MAP kinases and MAP kinase kinases[J]. BMC Genomics，2006，7（1）：223.

[24]KONG FL，WANGJ，CHENG L，et al.Genome-wide analysis of the mitogen -activated protein kinase gene family in Solanum lycopersicum [J]. Gene，2012，499（1）： 108-120.

[25] LIAN W W， TANG Y M， GAO S Q， et al. Phylogenetic analysis and expression pattrns of the MAPK gene family inwheat （Triticum aestivumL.）[J].Journal of Integrative Agriculture，2012，11（8）：1227-1235.

[26] CAKIR B，KILICKAYA O. Mitogen -activated protein kinase cascades in Vitis vinifera[J].Frontiers in Plant Science，2015，6：556. []L analysis of mitogen-activated protein kinase gene family in maize[J].Plant Molecular Biology Reporter，2013，31 （6）： 1446-1460.

[28] LAMPARDGR，MACALISTERCA，BERGMANNDC. Arabidopsis stomatal initiation is controlled by MAPKmediated regulation of the bHLH SPEECHLESS [J]. Science，2008，322（5904）： 1113-1116.

[29] PUTARJUNAN A，RUBLE J， SRIVASTAVA A，et al. Bipartiteanchoring ofSCREAMenforcesstomatal initiation by coupling MAP kinases to SPEECHLESS [J]. Nature Plants，2019，5（7）： 742-754.

[30] ZHENGY P，DENG XX，QUAL，et al.Regulation of pollen lipid body biogenesis by MAPkinases and downstream WRKY transcription factors in Arabidopsis [J].PLoS Genetics，2018，14（12）：e1007880.

[31]ZHOUJG，WANG XY，HEYX，et al.Differential phosphorylation of the transcription factor WRKY33 by theprotein kinasesCPK5/CPK6 andMPK3/MPK6 cooperativelyregulatescamalexinbiosynthesisin Arabidopsis[J]. Plant Cell，2020，32（8）： 2621-2638.

[32] DORY M， HATZIMASOURA E，KALLAI B M，et al. Coevolving MAPK and PID phosphosites indicate an ancient environmental control of PIN auxin transporters in land plants[J]. FEBS Letters，2018，592（1）：89-102.

[33]MENZEL W， STENZEL I，HELBIGL M，et al.A PAMPtriggeredMAPK cascadeinhibitsphosphatidylinositol 4，5-bisphosphate production by PIP5K6 in Arabidopsis thaliana [J].The New Phytologist，2019，224 （2）：833- 847.

[34] XUE X Y，BIAN C，GUO X Y，et al. The MAPK substrate MASS proteins regulate stomatal development in Arabidopsis[J]. PLoS Genetics，2020，16（4）： e1008706.

[35] ZHOU S，CHEN Q H，LI X Y，et al. MAP65 -1 is required for the depolymerization and reorganizationof cortical microtubules in the response to salt stress in Arabidopsis[J].Plant Science，2017，264：112-121.

[36] LIN CW，DAIDW，ZHAO GM， et al.Identification of MPK4 interacting proteins in guard cells[J]. Journal of Proteomics，2023，281：104903.

[37] ZHANG Y，GUO X Y，DONG J. Phosphorylation of the polarity protein BASL differentiates asymmetric cell fate through MAPKs and SPCH[J]. Current Biology，2016，26 （21）： 2957-2965.

[38] ZHAO F，ZHENG Y F， ZENG T， et al.Phosphorylation of SPOROCYTELESS/NOZZLE by the MPK3/6 kinase is required foranther development[J]. PlantPhysiology， 2017 17374）： 2265-2277

[39]BECK M，KOMISG，MULLERJ，et al．Arabidopsis homologs of nucleus- and phragmoplast-localized kinase 2and3 and mitogen -activated protein kinase 4 are essential for microtubule organization [J]. The Plant Cell， 2010，22（3）： 755-771.

[40]LI S N，WANG W Y，GAO JL，et al. MYB75 phosphorylation by MPK4 is required for light-induced anthocyanin accumulation in Arabidopsis [J].The Plant Cell，2016， 28（11）： 2866-2883.

[41] SASABE M，SOYANO T，TAKAHASHI Y，et al. Phosphorylation of NtMAP65-1 by a MAP kinase downregulatesitsactivityofmicrotubulebundlingand stimulates progression of cytokinesis of tobacco cells [J]. Genes amp; Development，2006，20（8）： 1004-1014.

[42]JIANGXY，HOEHENWARTERW，SCHEELD，etal. Phosphorylation of the CAMTA3 transcription factor triggers its destabilization and nuclear export [J].Plant Physiology，2020，184（2）： 1056-1071.

[43] WANG FH， YANG F， ZHU D F，et al.MYB44 plays key roles in regulating plant responses to abiotic and biotic stress，metabolism，and development [J]. Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology，2024，33（4）：462- 473.

[44]MI X Y，LI W X，CHEN C，et al.GhMPK9 - GhRAF39_1-GhWRKY4Oa regulates the GhERF1b- and GhABF2 -mediated pathways to increase cotton disease resistance[J]. Advanced Science，2024， 11（29）： 2404400.

[45] SHAN D Q，WANG C Y，ZHENG X D，et al. MKK4- MPK3-WRKY17-mediated salicylic acid degradation increases susceptibility to Glomerella leaf spot in apple [J].Plant Physiology，2021，186（2）：1202-1219.

[46]YU G，XIAN L，XUE H，et al．A bacterial effector protein prevents MAPK -mediated phosphorylation of SGT1 to suppress plant immunity [J].PLoS Pathogens， 2020，16（9）： e1008933.

[47]WANG W， CHEN SL， ZHONG G T， et al. MITOGENACTIVATED PROTEINKINASE3enhances disease resistance of edrl mutants by phosphorylating MAPKKK5 [J].Plant Physiology，2024，194（1）： 578-591.

[48] BRILLADA C， TEH O K，DITENGOU FA， et al.Exocyst subunit Exo7oB2 is linked to immune signaling and autophagy[J]. The Plant Cell，2021，33（2）： 404-419.

[49]RAYAPURAM N， JARAD M，ALHORAIBI H M，et al. Chromatin phosphoproteomics unravels a function for AThook motif nuclear localized protein AHL13 in PAMPtriggeredimmunity[J].Proceedingsof the National Academy of Sciences of the United States of America， 2021，118（3）： e2004670118.

[50]MA H G，LIJ，MA L，et al.Pathogen-inducible OsMPKK10.2-OsMPK6 cascade phosphorylates the Raflike kinase OsEDR1 and inhibits its scaffold function to promote rice disease resistance[J]. Molecular Plant， 2021， 14（4）： 620-632.

[51] PITZSCHKE A，DATTA S，PERSAK H. Mitogen - activated protein kinase -regulated AZI1 -an atractive candidate for genetic engineering [J]. Plant Signaling amp; Behavior，2014， 9（2）： e27764.

[52]YANZW，WANGJX，WANGFX，etal.MPK3/6- induced degradation of ARR1/1O/12 promotessalt tolerance in Arabidopsis [J].EMBO Reports，2021，22 （10）： e52457.

[53]KIM SH，BAHK S，NGUYEN N T，etal. Phosphorylation of the auxin signaling transcriptional repressor IAA15 by MPKs is required for the suppression of root development under drought stress in Arabidopsis [J].Nucleic Acids Research，2022，50 （18）：10544- 10561.

[54] WANG C Y，LI X X， ZHAO H， et al. Mitogen activated protein kinases 3/6 reduce auxin signaling via stabilizing indoleacetic acid -induced proteins 8/9 in plant abiotic stressadaptation [J]. International Journal of Molecular Sciences，2025，26（5）： 1964.

[55] LATRASSE D， JeGU T，LI H C，et al. MAPK-triggered chromatin reprogramming by histone deacetylase in plant innate immunity[J]. Genome Biology，2017，18（1）： 131.

[56] FURLAN G， NAKAGAMI H， ESCHEN -LIPPOLD L， et al.Changes in PUB22 ubiquitination modes triggered by MITOGEN -ACTIVATED PROTEIN KINASE3 dampen the immune response [J]. The Plant Cell，2017，29（4）： 726-745.

[57] DJAMEI A，PITZSCHKE A， NAKAGAMI H， et al. Trojan horse strategy in Agrobacterium transformation：abusing MAPK defense signaling [J]. Science，2007，318（5849）： 453-456.

[58] SHEIKH A H， ESCHEN-LIPPOLD L， PECHER P， et al. Regulation of WRKY46 transcription factor function by Mitogen-Activated protein kinases in Arabidopsisthaliana [J].Frontiers in Plant Science，2016，7： 61.

[59] GUO HL，F(xiàn)ENGPQ，CHI W，et al.Plastid-nucleus communication involvescalcium -modulated MAPK signalling[J]. Nature Communications，2016，7（1）：12173.

[60] LI FJ，CHENG C，CUI FH，et al.Modulation of RNA polymerase II phosphorylation downstream of pathogen perception orchestrates plant immunity [J]. Cell Host amp; Microbe，2014，16（6）： 748-758.

[61] MENC X 7 XII I HF Y Xet al. Phnsnhorvlation of an ERF transcription factor by Arabidopsis MPK3/MPK6 regulates plant defense gene induction and fungal resistance[J]. The Plant Cell，2013，25（3）：1126-1142.

[62] WANG F，SHANG YF，F(xiàn)AN BF，et al.Arabidopsis LIP5，apositiveregulatorofmultivesicularbody biogenesis，isa critical target of pathogen-responsive MAPK cascade inplant basal defense[J]. PLoS Pathogens，2014，10（7）： e1004243.

[63] PECHER P， ESCHEN-LIPPOLD L，HERKLOTZ S， et al. TheArabidopsisthaliana mitogen -activated protein kinases MPK3 and MPK6 target a subclass of VQmotif'-containing proteins to regulate immune responses [J].New Phytologist，2014，203（2）： 592-606.

[64] LIB，JIANG S，YU X，etal.Phosphorylation of trihelix transcriptional repressor ASR3byMAPKINASE4 negatively regulates Arabidopsis immunity [J]. The Plant Cell， 2015，27（3）： 839-856.

[65] WANG D，CHAI G H，XU L，et al.Phosphorylation - mediated inactivation ofC3H14 by MPK4 enhances bacterial-triggered immunity in Arabidopsis [J].Plant Physiology，2022，190（3）： 1941-1959.

[66] ZHANG ZB，LIU Y N，HUANG H，et al.The NLR protein SUMM2 senses the disruption of an immune signaling MAP kinase cascade via CRCK3 [J].EMBO Reports，2017，18（2）：292-302.

[67]QIUJL，F(xiàn)IIL BK，PETERSENK，etal.Arabidopsis MAP kinase4 regulatesgene expressionthrough transcription factor release in the nucleus [J]. The EMBO Jourmal，2008，27（16）： 2214-2221.

[68] ROUX M E， RASMUSSEN M W，PALMA K， et al. The mRNA decay factor PAT1 functions in apathway including MAP kinase 4 and immune receptor SUMM2[J]. The EMBO Journal，2015，34（5）： 593-608.

[69] KANGS N，YANG F，LIL，et al.The Arabidopsis transcription factor BRASSINOSTEROID INSENSITIVE1- ETHYL METHANESULFONATE -SUPPRESSOR1 isa direct substrate of MITOGEN-ACTIVATED PROTEIN KINASE6 and regulates immunity [J]. Plant Physiology， 2015，167（3）： 1076-1086.

[70]BETHKEG，UNTHANT，UHRIGJF，et al.Flg22 regulates the release ofan ethylene response factor substrate from MAP kinase6in Arabidopsis thaliana via ethylenesignaling[J].Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America， 2009，106（19）： 8067-8072.

[71] VOLZ R，KIM S K，MI JN，et al. INDETERMINATEDOMAIN 4（IDD4） coordinates immune responses with plant-growth in Arabidopsis thaliana[J]. PLoS Pathogens， 2019， 15（1）： e1007499.

[72] CHUJO T， MIYAMOTO K，OGAWA S，et al. Overexpression of phosphomimic mutated OsWRKY53 leads to enhanced blast resistance in rice [J].PLoS One， 2014， 9（6）： e98737.

[73] LI N，YANG Z Y，LI J，et al.Two VQ proteins are substrates of the OsMPKK6 -OsMPK4 cascade inrice defense against bacterial blight[J].Rice，2021，14（1）：39.

[74] JALMI S K，SINHA A K. Functional involvement of a mitogen activated protein kinase module，OsMKK3- OsMPK7-OsWRK30 in mediating resistance against Xanthomonas oryzae in rice[J]. Scientific Reports，2016，6 （1）： 37974.

[75] ZHANG JJ， GAO J， ZHU Z， et al. MKK4/MKK5-MPK1/ MPK2 cascade mediates SA-activated leaf senescence via phosphorylation ofNPR1 in Arabidopsis[J].Plant Molecular Biology，2020，102（4/5）： 463-475.

[76]RAVELO-ORTEGA G，LOPEZ -BUCIO J S，RUIZ - HERRERA L F， et al. The growth of Arabidopsis primary root isrepressed by severaland diverse amino acids through auxin -dependent and Independent mechanisms and MPK6 kinase activity [J].Plant Science，2O21，302： 110717.

[77]LI GJ，MENG X Z，WANG RG，et al.Dual -level regulation of ACC synthase activity by MPK3/MPK6 cascade and itsdownstream WRKY transcription factor during ethylene induction in Arabidopsis[J].PLoS Genetics，2012， 8（6）： e1002767.

[78] TIANXJ，HE ML，MEI EY， et al.WRKY53 integrates classic brassinosteroid signaling and the mitogen-activated protein kinase pathway to regulate rice architecture and seed size[J]. The Plant Cell， 2021， 33（8）： 2753-2775.

[79] GUO T，LU Z Q，SHAN J X，et al. ERECTA1 Acts upstream of the OsMKKK10-OsMKK4-OsMPK6 cascade tocontrolspikeletnumberby regulating cytokinin metabolism in rice [J].Plant Cell，2020，32 （9）：2763- 2779.

[80] ZHAOLL，YANJW，XIANG Y，et al.ZmWRKY104 transcriptionfactorphosphorylatedbyZmMPK6 functioning in ABA -Induced antioxidant defense and enhance drought tolerance in maize [J].Biology，2021，10 （9）： 893.

[81]WANG C，HE X W，LIY Z，et al.The cotton MAPK kinase GhMPK2O negativelyregulatesresistanceto Fusarium oxysporum by mediating the MKK4-MPK20- WRKY40 cascade[J]. Molecular Plant Pathology，2018， 19（7）： 1624-1638.

[82]TANOUET，ADACHI M，MORIGUCHI T，et al．A conserved docking motif in MAP kinases common to substrates，activators and regulators[J].Nature Cell Biology， 2000，2（2）： 110-116.

[83]DOCZI R，BOGRE L. The quest for MAP kinase substrates：gaining momentum[J].Trendsin Plant Science， 2018，23（10）： 918-932.

[84]ALEXA A，EMBERO，SZABOI，etal.Peptide based inhibitors of protein binding to the mitogen -activated protein kinase docking groove[J]. Frontiers in Molecular Biosciences，2021，8：690429.

[85]BARDWELLL，SHAHK.Analysis ofmitogen-activated protein kinase activation and interactionswith regulators and substrates[J].Methods，2006，40（3）：213-223.

[86] JIANGM，ZHANGYZ，LIP，etal.Mitogen-activated protein kinase and substrate identification in plant growth and development [J]. International Journal of Molecular Sciences，2022，23（5）：2744.

[87]BAI FW.The roles of the small pMEKK subfamily comprisingMAPKKK19，20 and 21 in Arabidopsis thaliana[D]. Montréal： Universitéde Montréal，2018.

[88]TRINHTB，XIAOQ，PEIDH.Profilingthesubstrate specificity of protein kinases by on-bead screening of peptide libraries[J].Biochemistry，2013，52（33）：5645- 5655.

[89]KAUR P，ANAND A，BHAT A，et al.Comparative phosphoproteomic analysis unravelsMAPK1 regulated phosphoproteins in Leishmania donovani[J].Journal of Proteomics，2021，240：104189.

[90] CHI Y，CLURMAN B E. Mass spectrometry -based identificationofprotein kinasesubstratesutilizing engineered kinases and thiophosphate labeling[J].Current Protocols in Chemical Biology，2010，2（4）：219-234.

[91]LEISSING F，MISCH N V，WANG X R，etal. Purification of MAP-kinase protein complexesand identification of candidate components by XL-TAP-MS [J].Plant Physiology，2021，187（4）：2381-2392.

[92] KIMDI，BIRENDRA KC，ZHU WH，et al.Probing nuclearpore complex architecture with proximity dependentbiotinylation[J].Proceedingsofthe National Academy of Sciences of the United States of America， 2014，111（24）：E2453-E2461.

[93]STRUKS，JACOBSA，SANCHEZ MARTIN-FONTECHA E，et al.Exploring the protein -protein interaction landscape in plants[J]. Plant，Cell amp; Environment，2019， 42（2）：387-409.

[94]BAHK S，AHSAN N，ANJ，et al.Identificationof mitogen-activated protein kinases substrates in Arabidopsis usingkinaseclientassay[J].PlantSignalingamp;Behavior， 2024，19（1）： 2326238.

[95] ZHANG T，F(xiàn)ASSL A，VAITES L P，et al. Interrogating kinase-substrate relationshipswith proximity labeling and phosphorylation enrichment [J].Journal ofProteome Research，2022，21（2）：494-506.