胸腹水細(xì)胞蠟塊制備與性能測試以及診斷技術(shù)應(yīng)用

中圖分類號：TQ317 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1001-5922（2025）10-0129-04

Preparation and performance test of pleural effusion cell wax block and application of diagnostic technology

WANG Jing1，2 （1.Gong County Traditional Chinese Medicine Hospital， Yibin 6446Oo，Sichuan China; 2. North Sichuan Medical College，Nanchong 6371Oo，Sichuan China）

Abstract：Inorder to explore the accuracyand applicationvalueof pleural and ascites cell waxblock in pathological diagnosis，by comparing the effects of 95% ethanol， 10% neutral buffered formalin and ethanol/formalin mixtureon the qualityof wax block，the preparation method of pleural and ascites cellwax block wasoptimized，and then the clinical application efectof pleural and ascites cell waxblock was explored.Theresults showed that when the cell fixation solution was a mixture of ethanol/formalin，the cell block yield was 100% ，the cell morphology integrity ratewas 72% ，and the diagnostic accuracy rate was 94.44% ，which was significantly higher than the clinical effectof conventional cytological diagnosis.In summary，this pleural effusioncellwax blockcan clearly presenthe cellstructure incases such as lungadenocarcinoma，and accuratelylocate the immunohistochemistry，which can improve the pathological diagnosis efficiency and has a good clinical application prospect.

Key words：Pleural effusion cellwax block;clinical technology application;cellblock yield;diagnostic accuracy

在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移、自身免疫性疾病的鑒別和診斷中，胸腹水病理診斷是主要的診斷手段。然而，傳統(tǒng)細(xì)胞涂片通常存在細(xì)胞分散、背景干擾大的問題，導(dǎo)致胸腹水病理診斷的準(zhǔn)確性受限。胸腹水細(xì)胞蠟塊技術(shù)能夠凝聚細(xì)胞、形成組織樣結(jié)構(gòu)，提高病理形態(tài)觀察與免疫組化檢測效果，對胸腹水病理診斷意義重大。對此，王勤等通過4種固定方式制作胸腹水細(xì)胞蠟塊，結(jié)果表明，當(dāng)采用 95% 乙醇和 4% 甲醛等比例同時固定時，蠟塊的效果最佳。鄭海燕等2則對胸腹水細(xì)胞蠟塊的制作方法進(jìn)行了改良，結(jié)果表明，使用甲醛固定，然后使用 95% 乙醇塑性的效果最好，染色效果較佳。錢潔等3采用細(xì)胞蠟塊和免疫組化結(jié)合的方式對胸腹水進(jìn)行診斷，結(jié)果表明，這種診斷方案可以提高疾病的檢出準(zhǔn)確率。

以上學(xué)者的研究為胸腹水病理診斷的研究提供了思路參考。為進(jìn)一步優(yōu)化胸腹水細(xì)胞蠟塊的臨床應(yīng)用效果，本試驗探討了3種不同細(xì)胞固定液對胸腹水細(xì)胞蠟塊的影響，并研究其臨床應(yīng)用效果，為提升胸腹水病理診斷精準(zhǔn)度提供技術(shù)參考。

1試驗部分

1.1 材料與設(shè)備

主要材料：瓊脂（分析純，上海伊酶生物科技有限公司）；乙醇（分析純，山東瑞港化工有限公司）；甲醛（分析純，江陰金古特化工有限公司）；石蠟（分析純，濰坊成陽化工有限公司）。

主要設(shè)備：YT-KH20R型高速冷凍離心機(jī)（山東藍(lán)虹光電科技有限公司）；VX-Ⅱ型渦旋振蕩器（北京安簡科技有限公司）；Axioscope5型（蔡司顯統(tǒng)鏡）。

1.2 胸腹水細(xì)胞蠟塊的制備

采用3組不同的細(xì)胞固定液進(jìn)行胸腹水細(xì)胞蠟塊的制備。第一組細(xì)胞固定液為 95% 乙醇；第二組細(xì)胞固定液為 10% 中性緩沖福爾馬林，其中主要成分為 4% 甲醛；第三組細(xì)胞固定液為乙醇和福爾馬林的混合液，其中乙醇、甲醛、水的體積比為 89：6：5^[4-5] 基于以上的細(xì)胞固定液，胸腹水細(xì)胞蠟塊的具體的制備過程如下[6-8]：

（1）取適量胸腹水標(biāo)本，靜置 45min ，然后去除上清液，保留沉淀，同時振蕩混合均勻；

（2）將胸腹水標(biāo)本的沉淀平均分為3份，并分別裝人離心管中，以 3500r/min 的離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行處理15min 然后，適當(dāng)去除上清液，使每個離心管中剩余沉淀物質(zhì)加上少量上清液的體積為 5mL ，然后振蕩混合均勻;

（3）按照沉淀物體積的5倍，將沉淀物與適量細(xì)胞固定液混合，振蕩 1min ，然后，靜置 45min

（4）通過離心機(jī)，以 3500r/min 的離心轉(zhuǎn)速對步驟（3）中的混合物進(jìn)行處理， 15min 后保留沉淀物；

（5）在包埋盒中添加一滴溫度為 60^qC 的 3% 瓊脂 滴，讓瓊脂均勻地在包埋盒小槽內(nèi)鋪滿，然后在恒溫 60% 環(huán)境中靜置 3min

（6將適量步驟（4）中的沉淀物添加到包埋盒中，繼續(xù)在恒溫 60°C 環(huán)境中靜置 5min_o 當(dāng)細(xì)胞沉淀物的凸面逐漸轉(zhuǎn)為凹面時，向包埋盒中繼續(xù)添加一滴溫度為 60^°C 的 3% 瓊脂滴，將細(xì)胞沉淀物的的表面覆蓋。然后，繼續(xù)在恒溫 60^cC 環(huán)境中靜置 3min ·

（7）將包埋盒冷凍處理 5min ，然后將瓊脂塊取出，放到包埋紙上包好，繼續(xù)放入包埋盒。之后，通過脫水機(jī)進(jìn)行脫水處理，再用石蠟進(jìn)行包埋；

（8）將細(xì)胞蠟塊切片，然后染色，封片，即可顯微鏡下閱片。

1.3 性能測試

1.3.1 細(xì)胞塊得率

以不同的細(xì)胞固定液制備胸腹水標(biāo)本。根據(jù)最終成功制備出可供切片、染色并包含足夠診斷性細(xì)胞成分細(xì)胞的蠟塊數(shù)量，分析細(xì)胞塊得率。

1.3.2 細(xì)胞形態(tài)完整率

通過常規(guī)蘇木精-伊紅對每組成功制備的細(xì)胞蠟塊進(jìn)行染色，然后用顯微鏡觀察各蠟塊中的細(xì)胞形態(tài)完整性，并分析細(xì)胞形態(tài)完整率。

1.3.3 診斷準(zhǔn)確率

根據(jù)胸腹水患者病理學(xué)診斷結(jié)果，分析在不同細(xì)胞固定條件下胸腹水細(xì)胞蠟塊的診斷準(zhǔn)確率。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)胞固定液的選擇

2.1.1 細(xì)胞塊得率分析

在不同的細(xì)胞固定液條件下制備胸腹水細(xì)胞蠟塊，分析細(xì)胞塊得率，結(jié)果如圖1所示。

圖1不同細(xì)胞固定液的細(xì)胞塊得率Fig.1Cellblockyieldofdifferentcellfixatives

由圖1可知，當(dāng)使用第一組和第三組細(xì)胞固定液時，細(xì)胞得塊率均較高，達(dá)到 100% 。當(dāng)使用第二組細(xì)胞固定液時，細(xì)胞得快率也超過 95% ，達(dá)到 96% 這表明，第一組和第三組細(xì)胞固定液在促進(jìn)細(xì)胞充分沉降、有效固定并形成足夠體積和凝聚力的細(xì)胞團(tuán)塊方面表現(xiàn)出色，使其能順利包埋于瓊脂和石蠟中[9-10]。第二組細(xì)胞固定液未達(dá)到 100% ，可能與福爾馬林固定速度相對較慢有關(guān)。

2.1.2 細(xì)胞形態(tài)完整率分析

對不同細(xì)胞固定液制備的胸腹水細(xì)胞蠟塊進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)完整率分析，結(jié)果如圖2所示。

由圖2可知，當(dāng)采用 95% 乙醇作為細(xì)胞固定液時，細(xì)胞形態(tài)完整率良好，為 62‰ 當(dāng)采用 10% 中性緩沖福爾馬林作為細(xì)胞固定液時，細(xì)胞形態(tài)完整率較低，為 56% 當(dāng)采用乙醇和福爾馬林的混合液時，細(xì)胞形態(tài)完整率最高，達(dá)到 72% 。可以看到，這3種細(xì)胞固定液的細(xì)胞形態(tài)完整率表現(xiàn)出明顯差異。在保障細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)完整性方面，第三組乙醇福爾馬林混合固定液較好。

2.1.3 診斷準(zhǔn)確率分析

分析不同細(xì)胞固定液胸腹水細(xì)胞蠟塊的診斷準(zhǔn)確率，結(jié)果如圖3所示。

由圖3可知，使用第一組 95% 乙醇時，診斷準(zhǔn)確率適中，為 88% 。當(dāng)使用第二組 10% 中性緩沖福爾馬林作為細(xì)胞固定液時，診斷準(zhǔn)確率偏低，為 80% 當(dāng)使用第三組乙醇和福爾馬林的混合液時，診斷準(zhǔn)確率最高，達(dá)到 94% 。這些差異主要是因為，不同固定液的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)保存質(zhì)量不同。當(dāng)使用 95% 乙醇固定時，細(xì)胞收縮變形、染色質(zhì)過度凝聚等問題會使診斷難度增加，增大診斷誤差。當(dāng)使用 10% 中性緩沖福爾馬林時，固定過程比較緩慢，這會導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，影響核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的清晰程度，進(jìn)而影響細(xì)胞形態(tài)細(xì)節(jié)的清晰度，導(dǎo)致診斷準(zhǔn)確率較低。當(dāng)使用乙醇福爾馬林混合液作為細(xì)胞固定液時，細(xì)胞核和胞漿的細(xì)微結(jié)構(gòu)能夠更真實、更完整地保存，因此惡性腫瘤細(xì)胞識別和分類診斷的準(zhǔn)確性提高，診斷準(zhǔn)確率較高[12]。綜上，在保障胸腹水細(xì)胞蠟塊診斷可靠性方面，第三組乙醇福爾馬林混合固定液的具有最佳優(yōu)勢。

3胸腹水細(xì)胞蠟塊的臨床應(yīng)用

基于2.1節(jié)中的試驗結(jié)果，以第三組細(xì)胞固定液乙醇和福爾馬林的混合液來制備胸腹水細(xì)胞蠟塊，探討該胸腹水細(xì)胞蠟塊的臨床應(yīng)用效果。在第三組細(xì)胞固定液乙醇和福爾馬林的混合液中，乙醇、甲醛、水的體積比為89：6：5。

3.1一般資料

在2023年3月～2025年3月期間，選擇本院收治的54例胸腹水患者為本研究的研究對象。在這54例胸腹水患者中，男性患者34例，女性患者20例。納入標(biāo)準(zhǔn)為： ① 新鮮胸腹水的標(biāo)本量充足，超過 50mL ，可以進(jìn)行細(xì)胞蠟塊的制作； ② 臨床疑診惡性腫瘤、結(jié)核、間皮瘤等需病理診斷者； ③ 患者的臨床資料完整； ④ 患者自愿參與并積極配合本次診斷研究。排除標(biāo)準(zhǔn)為： ① 患者的胸腹水標(biāo)本量不足或者不合格，不能夠制作細(xì)胞蠟塊； ② 患者的胸腹水標(biāo)本采集前2周內(nèi)接受過抗腫瘤治療； ③ 患者合并有兩種或者以上的腫瘤疾病，或者患有嚴(yán)重器官功能疾病； ④ 患者存在認(rèn)知障礙，或者患有精神疾病，不能正常交流溝通； ⑤ 患者的依從性較差，不配合本次診斷研究[13-15]。各患者的胸腹水標(biāo)本均在采集2h內(nèi)送檢，對于延遲送檢的胸腹水標(biāo)本則以恒溫4℃保存。本次診斷研究以獲醫(yī)院委員會批準(zhǔn)。

3.2 應(yīng)用方法及觀察指標(biāo)

對照組采用常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查，試驗組采用胸腹水細(xì)胞蠟塊進(jìn)行檢測。在對照組的試驗中，先將胸腹水引流、離心并涂片，然后進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢測。在試驗組的試驗中，通過乙醇和福爾馬林的混合液作為細(xì)胞固定液，按照1.2.1節(jié)中的方法制備胸腹水細(xì)胞蠟塊并測試。

診斷結(jié)果：分析各組患者的診斷結(jié)果。

診斷效能：分析各組患者的診斷靈敏度、特異性和準(zhǔn)確率。

免疫組化：通過顯微鏡觀察胸水細(xì)胞蠟塊免疫組化的實際效果。

3.3 應(yīng)用結(jié)果比較分析

3.3.1 診斷結(jié)果分析

常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查和胸腹水細(xì)胞蠟塊的診斷結(jié)果比較，如表1所示。

表1診斷結(jié)果比較

Tab.1 Comparison of diagnostic results

例

由表1可知，采用常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查的檢查結(jié)果與病理學(xué)檢查結(jié)果一致的患者例數(shù)為41例，采用胸腹水細(xì)胞蠟塊的檢查結(jié)果與病理學(xué)檢查結(jié)果一致的患者例數(shù)為51例。這表明，與常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查相比，這種胸腹水細(xì)胞蠟塊方案的診斷結(jié)果更加準(zhǔn)確，準(zhǔn)確率為 94.44% 。

3.3.2 診斷效能分析

常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查和胸腹水細(xì)胞蠟塊的靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確率結(jié)果比較，如表2所示。

表2診斷效能結(jié)果比較

Tab.2Comparison of diagnostic efficacy results %（n）

由表2可知，當(dāng)常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查時，靈敏度為80.85% ，特異性為 42.86% ，準(zhǔn)確率為 80.39% 。當(dāng)采用胸腹水細(xì)胞蠟塊進(jìn)行診斷時，靈敏度為 97.87% ，特異性為 71.43% ，準(zhǔn)確率為 94.44% 。這表明，這種胸腹水細(xì)胞蠟塊的診斷方式的診斷效能更好。

3.3.3 免疫組化比較

胸腹水細(xì)胞蠟塊免疫組化證實肺腺癌、卵巢癌種 植轉(zhuǎn)移及證實惡性間皮瘤的顯微鏡圖，如圖4所示。

（a）胸水細(xì)胞蠟塊免疫組化證實肺腺癌 （b）胸水細(xì)胞蠟塊免疫組化證實惡性間皮瘤

（c）腹水細(xì)胞蠟塊免疫組化證實卵巢癌種植轉(zhuǎn)移

圖4胸水細(xì)胞蠟塊免疫組化圖 Fig.4 Immunohistochemical map of pleural effusioncell wax block

由圖4可知，在肺腺癌病例中，腫瘤細(xì)胞核呈清晰的TTF-1陽性著色，定位準(zhǔn)確，與非腫瘤細(xì)胞形成鮮明對比。在卵巢癌術(shù)后復(fù)查病例中，腫瘤細(xì)胞顯示出強(qiáng)烈的PAX8核陽性反應(yīng)，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)保存良好。在證實惡性間皮瘤的病例中，腫瘤細(xì)胞膜和胞漿表達(dá)陽性，可有效支持診斷。這些圖像清晰顯示，這種胸腹水細(xì)胞蠟塊的細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整、形態(tài)清晰，可為腫瘤細(xì)胞的診斷提供技術(shù)支持，臨床應(yīng)用價值良好。

4結(jié)語

（1）當(dāng)使用乙醇和福爾馬林的混合液時，胸腹水細(xì)胞蠟塊的細(xì)胞塊得率、細(xì)胞形態(tài)完整率以及診斷準(zhǔn)確率更高。在混合液中，乙醇、甲醛、水的體積比為89：6：5;（2）與常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查相比，這種胸腹水細(xì)胞蠟塊可以有效提高診斷準(zhǔn)確率，達(dá)到 94.44% ，且具有較高的靈敏度和特異性；（3）這種胸腹水細(xì)胞蠟塊在肺腺癌、卵巢癌、惡性間皮瘤等病例中細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，圖像清晰，可有效支持診斷，臨床應(yīng)用效果良好。

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