不同濃度黃體酮注射液抑制貓發(fā)情的效果評價(jià)

在家庭飼養(yǎng)環(huán)境中，寵物貓?jiān)跒槿祟愄峁┡惆榈耐瑫r(shí)，其發(fā)情期行為也常帶來困擾。成年雌貓?jiān)诎l(fā)情時(shí)表現(xiàn)出的持續(xù)嚎叫、焦慮及食欲減退等[]，常使飼養(yǎng)者寢食難安。此期間飼養(yǎng)者還需密切監(jiān)控其活動范圍，以避免因意外交配導(dǎo)致的非計(jì)劃性妊娠2。國外自20世紀(jì)60年代起已應(yīng)用合成孕激素調(diào)控動物發(fā)情。而國內(nèi)目前雌貓發(fā)情調(diào)控技術(shù)發(fā)展相對滯后，仍普遍采用卵巢切除術(shù)終止發(fā)情行為。為進(jìn)一步規(guī)避潛在子宮疾病風(fēng)險(xiǎn)，臨床常實(shí)施卵巢子宮切除術(shù)]。然而，該外科干預(yù)手段的不可逆性、并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)及高昂術(shù)后護(hù)理成本，致使眾多飼養(yǎng)者難以接受[4]

因此，開發(fā)安全、有效且可逆的藥物干預(yù)方案具有重要意義。樂寵寧（黃體酮注射液）作為一種外源性孕激素，可模擬妊娠期孕酮水平，通過負(fù)反饋抑制下丘腦一垂體一性腺軸，抑制促性腺激素釋放激素（GnRH）及促黃體生成素（LH）的分泌，進(jìn)而抑制卵泡發(fā)育與排卵，達(dá)到終正發(fā)情行為的目的[5]。與手術(shù)相比，激素干預(yù)具有可逆性，為有未來繁育計(jì)劃的飼養(yǎng)者提供了選擇。然而，目前國內(nèi)尚缺乏針對黃體酮制劑抑制貓發(fā)情的系統(tǒng)研究，特別是不同給藥濃度對抑制效果持續(xù)時(shí)間、激素水平變化及安全性的深入評估。本研究通過設(shè)計(jì)低、中、高三個(gè)濃度梯度，旨在明確樂寵寧抑制貓發(fā)情的最低有效濃度、最佳給藥方案及其效果的持續(xù)時(shí)間，為臨床提供一種安全、可控的替代管理方案，同時(shí)評估其長期應(yīng)用對動物生殖軸功能恢復(fù)的潛在影響。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

第一，試驗(yàn)動物。

本試驗(yàn)使用了18只成年混種雌貓（年齡12～14月齡，體重 2～4kg ），此外，還納入了一只3歲的健康公貓用于誘導(dǎo)發(fā)情。

第二，主要試劑。

樂寵寧（黃體酮注射液）購自四川省精科生化制品有限責(zé)任公司，貓雌二醇血清檢測試劑盒購自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。

第三，主要儀器。

離心機(jī)購自貝克曼庫爾特公司，離心管、酶標(biāo)儀（Infinite200PRO）等購自TECAN帝肯集團(tuán)。采血器、采血管、貓籠、食盆、保定用具等購自神獸寵物用品有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

第一，試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

所有雌貓均單獨(dú)或成對飼養(yǎng)于不銹鋼籠中，每日喂食普通貓糧并自由飲水。公貓單獨(dú)飼養(yǎng)喂食相同飼料。所有雌貓均飼養(yǎng)于環(huán)境可控的場所（房間尺寸為 3.5x4.6m ），采用人工白熾燈照明（ 14h/d 由五盞100瓦燈組成，距離貓群約 50cm ）。經(jīng)過45d適應(yīng)期后，雌貓被隨機(jī)分配至低、中、高濃度組三個(gè)處理組，用公貓誘導(dǎo)雌貓發(fā)情。各組雌貓發(fā)情后分別注射 10mg/mL （低濃度） 20mg/mL （中濃度）50mg/mL （高濃度）三種不同濃度的樂寵寧藥物。分別在貓發(fā)情前（間情期）進(jìn)行第一次采血，出現(xiàn)發(fā)情征兆時(shí)（發(fā)情期）進(jìn)行第二次采血，并給予藥物，待貓發(fā)情癥狀消失后（抑制發(fā)情后）進(jìn)行第三次采血。通過貓雌二醇血清檢測試劑盒分別檢測3次采血血清樣本中的雌激素（E2）水平。之后繼續(xù)觀察 120d ，記錄發(fā)情間隔天數(shù)，發(fā)情的貓?jiān)俅谓o藥并檢測發(fā)情后和抑制發(fā)情后的血清雌激素水平。

第二，血清雌激素濃度的測定。

采用貓雌二醇酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測血清樣本中雌二醇（E2）含量。依次向微孔板各孔中加入 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品溶液（用于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線），并標(biāo)記為相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)孔；依次向各孔中加入 50μI 經(jīng)處理的待測樣品，并標(biāo)記為相應(yīng)樣品孔（確保標(biāo)準(zhǔn)品孔與樣品孔分開設(shè)置）。除空白對照孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔及樣品孔中各加入 50μ L酶標(biāo)結(jié)合物，充分混勻。覆膜或加蓋封板后，置37 °C 恒溫孵育 60min 。孵育結(jié)束后，徹底棄去孔內(nèi)液體，使用預(yù)稀釋清洗液洗滌5次（每次洗滌間隔3～5s，最后一次洗滌后在吸水紙上吸干殘留液體）。向所有孔（含空白對照孔）加入50μL 底物I，隨后加入 50μL 底物 I ，充分混勻，室溫避光孵育 15min 。每孔加人 50μL 終止液終止反應(yīng)，充分混勻。于終止反應(yīng)后 30min 內(nèi)，使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測定吸光度值。

2結(jié)果與分析

2.1貓雌二醇酶聯(lián)免疫分析標(biāo)準(zhǔn)曲線

本試驗(yàn)所有吸光值均在波長 450nm 處測定，同時(shí)所有檢測樣品均進(jìn)行三次重復(fù)測定。標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值，見表1，標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1。結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y =0.000 9x+0.286 4 ，在 0～1000pg/ mL濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，見表1。

圖1貓雌二醇酶聯(lián)免疫分析標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2不同濃度組貓雌激素水平的變化

給予不同濃度樂寵寧后，各組貓?jiān)诓煌A段血清雌激素水平的變化數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，發(fā)情前三組實(shí)驗(yàn)貓雌激素水平處于正常狀態(tài)，發(fā)情后雌二醇激素水平均明顯上升，三組實(shí)驗(yàn)貓發(fā)情前后的雌二醇激素水平未見明顯差別，給予不同濃度的樂寵寧抑制發(fā)情后，三組實(shí)驗(yàn)貓的雌二醇激素水平均出現(xiàn)了明顯降低，其中低濃度組降低到未發(fā)情時(shí)的雌激素水平，中、高濃度組降到了正常水平之下，見表2。

2.3不同濃度組貓二次發(fā)情的時(shí)間間隔及再次給藥的影響

觀察到在下一個(gè)發(fā)情期，低濃度樂寵寧組有2只雌貓出現(xiàn)發(fā)情情況，中濃度組和高濃度組的雌貓均未發(fā)情。低濃度樂寵寧組發(fā)情的兩只雌貓?jiān)俅谓o藥后血清雌激素水平變化，見表3，再次給藥后發(fā)情貓的雌二醇激素水平均出現(xiàn)明顯降低。在整個(gè)試驗(yàn)周期里，可以觀察到貓發(fā)情后出現(xiàn)頻繁嚎叫、焦躁不安、食欲下降等表現(xiàn)，給予樂寵寧抑制發(fā)情后求偶叫聲次日停止，其他發(fā)情癥狀也逐漸消失。

3討論

本試驗(yàn)在性成熟且表現(xiàn)典型發(fā)情癥狀的雌貓中進(jìn)行，以確保受試個(gè)體具備正常發(fā)情能力。選用黃體酮注射液（屬孕激素類制劑）進(jìn)行干預(yù)后，受試雌貓外周血孕酮濃度顯著升高，通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制抑制下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）的合成與分泌，進(jìn)而降低垂體促性腺激素水平，最終抑制卵泡發(fā)育及排卵，模擬黃體期生理狀態(tài)，從而有效抑制發(fā)情行為。理論上，停藥后雌貓應(yīng)于后續(xù)發(fā)情周期恢復(fù)發(fā)情。然而本試驗(yàn)中，除低濃度組在第二個(gè)發(fā)情季節(jié)出現(xiàn)2例發(fā)情外，其余受試雌貓?jiān)诔掷m(xù)觀察期內(nèi)均未呈現(xiàn)發(fā)情行為特征，此現(xiàn)象可能與觀察周期不足有關(guān)，同時(shí)表明中高濃度樂寵寧維持發(fā)情抑制狀態(tài)的時(shí)間相對較長。本試驗(yàn)抑制雌貓發(fā)情的結(jié)果與文獻(xiàn)中黃體酮抑制母貓發(fā)情的研究結(jié)果一致[7-8]，并通過不同給藥濃度與雌激素水平的檢測，進(jìn)一步補(bǔ)充了量化研究的細(xì)節(jié)，進(jìn)一步印證了大劑量黃體酮對雌激素具有括抗作用并抑制發(fā)情。

表1標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值

表2給予不同濃度樂寵寧對貓雌激素（E2）水平的影響

表3第二次發(fā)情的貓給藥前后雌激素（E2）水平變化

本試驗(yàn)中低濃度組在首次給藥后雖能抑制發(fā)情，但效果持續(xù)時(shí)間顯著短于中、高濃度組，90d后即出現(xiàn)2例（占該組 33.3% ）復(fù)發(fā)。這可能與藥物劑量不足導(dǎo)致體內(nèi)維持的有效孕酮濃度下降較快有關(guān)。中、高濃度組在120d觀察期內(nèi)均未觀察到發(fā)情行為，表明 20mg/mL 及 50mg/mL 濃度的樂寵寧注射液能提供更持久的發(fā)情抑制作用，其有效抑制期至少可達(dá)4個(gè)月。低濃度組兩只再次發(fā)情的雌貓（B1、B2）經(jīng)二次給予相同濃度的樂寵寧后，其血清雌激素（E2）水平再次迅速下降至基礎(chǔ)水平以下，發(fā)情行為隨之消失，再次驗(yàn)證了該藥物抑制發(fā)情的有效性及可重復(fù)性，也證實(shí)了其作用機(jī)制的可逆性。

試驗(yàn)期間，所有受試貓均未觀察到注射部位炎癥、食欲異常、精神沉郁、體重顯著波動或其他臨床不良反應(yīng)（如多飲多尿、乳腺異常發(fā)育等），初步表明樂寵寧注射液在試驗(yàn)劑量范圍內(nèi)（ 10～50mg/mL ）具有較好的安全性。然而，鑒于孕激素長期應(yīng)用在犬貓中潛在的風(fēng)險(xiǎn)（如誘發(fā)糖尿病、子宮蓄膿風(fēng)險(xiǎn)增加等），本研究120d的觀察周期仍顯不足，未來需進(jìn)行更長期的跟蹤研究以全面評估其安全性。此外，本試驗(yàn)未檢測給藥后孕酮濃度的動態(tài)變化及其與抑制效果持續(xù)時(shí)間的相關(guān)性，后續(xù)研究可增加孕酮水平的監(jiān)測，以更精確地闡明藥效學(xué)特征。

結(jié)語

本研究結(jié)果證實(shí)了樂寵寧作為外源性孕激素制劑在短期至中期內(nèi)（3～4個(gè)月）安全、有效且可逆地抑制雌貓發(fā)情的臨床價(jià)值。相較于絕育手術(shù)，其為寵物主提供了一種靈活的非永久性選擇，尤其適用于暫不適合手術(shù)或計(jì)劃未來繁育的個(gè)體。低濃度組（ 10mg/mL ）雖有效，但抑制持續(xù)時(shí)間相對較短，可能需要更頻繁的給藥；而中濃度（ 20mg/mL ）與高濃度（ 50mg/mL ）組均能提供更持久的抑制效果，結(jié)合安全性觀察， 20mg/mL 濃度可能具有更佳的臨床應(yīng)用潛力與成本效益平衡點(diǎn)。臨床獸醫(yī)可依據(jù)貓的具體需求（期望的抑制時(shí)長）及個(gè)體反應(yīng)，選擇合適的給藥濃度。

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收稿日期：2025-08-18

作者簡介：梁群超（1989一），男，漢族，河南省鄭州市，碩士，獸醫(yī)師。研究方向：獸醫(yī)臨床。*通訊作者：曾旭杰（1996一），男，漢族，四川省成都市，本科，經(jīng)濟(jì)師。研究方向：畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣。