豬流行性腹瀉病毒的流行現(xiàn)狀、檢測(cè)方法及防控技術(shù)

豬流行性腹瀉（porcineepidemicdiarrhea，PED）是由豬流行性腹瀉病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病，發(fā)病豬以腹瀉、嘔吐、脫水為主要臨床特征，病理變化為剖檢可見小腸擴(kuò)張，腸壁變薄，腸系膜淋巴結(jié)水腫，小腸絨毛變短等。PED冬季多發(fā)，各年齡的豬均易感，其中哺乳仔豬發(fā)病最重，發(fā)病率可達(dá) 100% ，7日齡以內(nèi)仔豬感染PED，死亡率可達(dá) 50%～10% 。2010年以來，PED在我國(guó)的主要流行毒株從經(jīng)典毒株轉(zhuǎn)變?yōu)樽儺惗局辏儺惗局臧l(fā)病率高、病死率高、傳播性強(qiáng)、流行范圍廣，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大威脅。本文對(duì)PEDV基因組及結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行概括，對(duì)近年來我國(guó)PED流行現(xiàn)狀、檢測(cè)方法及防控技術(shù)進(jìn)行總結(jié)，以期為我國(guó)PED的防控及促進(jìn)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展提供參考。

1基因組及結(jié)構(gòu)蛋白

PEDV是一種直徑在 95～190nm 的單股正鏈RNA病毒，屬于冠狀病毒科。基因組由7個(gè)開放閱讀框（openreadingframes，ORFs）ORFla、ORF1b和ORF2-6組成，共編碼21種蛋白，長(zhǎng)度約為28kb[1]，見圖1。其中ORF1a和ORF1b編碼包括nspl-nspl6在內(nèi)的16種非結(jié)構(gòu)蛋白，ORF2和ORF4-6編碼外膜蛋白（S蛋白）、包膜蛋白（E蛋白）、膜蛋白（M蛋白）和核衣殼蛋白（N蛋白）的4種結(jié)構(gòu)蛋白；ORF3編碼輔助蛋白ORF3[1]。這些蛋白在PEDV存活和逃避宿主免疫中起著至關(guān)重要的作用[2]。

S蛋白的S1結(jié)構(gòu)域與受體結(jié)合影響PEDV的人侵和釋放，S2結(jié)構(gòu)域參與病毒融合宿主細(xì)胞膜的過程。M蛋白、N蛋白在病毒顆粒的組裝和釋放中發(fā)揮作用，N蛋白同時(shí)還能夠通過下調(diào)IFN-β和干擾素刺激基因的表達(dá)從而參與PEDV逃避宿主天然免疫機(jī)制，ORF3輔助參與PEDV與宿主細(xì)胞的相互作用。E蛋白、非結(jié)構(gòu)蛋白nsp1能夠抑制IFN的產(chǎn)生，非結(jié)構(gòu)蛋白nsp1也會(huì)與多種IFN調(diào)控因子的其他成員相互作用，從而逃避宿主的先天免疫應(yīng)答2，見圖1。

圖1PEDV基因組結(jié)構(gòu)（A）和顆粒結(jié)構(gòu)（B）示意圖注：圖片來自參考文獻(xiàn)[1]。

2 流行現(xiàn)狀

2010年以前PEDV主要呈散發(fā)性流行趨勢(shì)，2010年以后PEDV毒株發(fā)生變異，以G2型毒株為主的高致病性PEDV流行毒株開始在全球范圍內(nèi)流行。程亞豪等3對(duì)2015—2021年我國(guó)東部地區(qū)PEDVS1基因的遺傳進(jìn)化分析表明，目前東部地區(qū)PEDV流行株的主要基因型為G2-b亞型。齊海濤等4在2017—2020年期間，于我國(guó)華北地區(qū)對(duì)218個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行采樣，對(duì)4030份腹瀉仔豬病料樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，2017—2020年，樣品PEDV核酸陽(yáng)性率分別為20.21% 、 15.28% 、 10.88% 、 18.80% ，PEDV流行毒株均為G2基因型。樊毛迪等[5采集了2022年江蘇省不同豬場(chǎng)的病豬腹瀉病料36份，結(jié)果表明，2022年江蘇PEDV流行毒株為G2-b亞群，且PEDV流行毒株S1蛋白區(qū)域存在氨基酸的突變、插入及缺失。

3 檢測(cè)方法

3.1PCR

PCR方法因其具有高特異性、高靈敏的特性，在動(dòng)物病原檢測(cè)中被廣泛應(yīng)用。隨著PCR檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，多重RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR（RT-qPCR）、納米R(shí)T-PCR等也逐漸應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。其中RTqPCR為世界動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的病原體檢測(cè)方法。多重RT-PCR可同時(shí)進(jìn)行多種病原微生物的鑒定。曹洪志等針對(duì)PEDVE基因，結(jié)合微芯片技術(shù)，建立了PEDV微芯片熒光定量RT-qPCR檢測(cè)方法。

3.2LAMP

新型等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)主要有環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）、重組酶聚合酶等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（RPA）滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)（RCA）、鏈置換擴(kuò)增技術(shù)（SDA）、解旋酶依賴性擴(kuò)增技術(shù)（HDA）。LAMP和RPA因其操作簡(jiǎn)便快速，在即時(shí)檢測(cè)中應(yīng)用最多，尤其適用于現(xiàn)場(chǎng)或資源有限環(huán)境。與PCR等病原核酸檢測(cè)技術(shù)相比，LAMP具有操作簡(jiǎn)單、快速靈敏、無(wú)需精密儀器、結(jié)果可視化等優(yōu)點(diǎn)，適用于基層或現(xiàn)場(chǎng)病原的快速檢測(cè)。李林岳等根據(jù)PEDVORF1a/b基因的保守序列設(shè)計(jì)特異性引物，加入甲酚紅使結(jié)果可視化，初步建立了PEDV可視化RT-LAMP檢測(cè)方法，見表1。

表15種等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)的對(duì)比

3.3ELISA

ELISA方法是通過抗原抗體特異性識(shí)別特性建立的一種快速檢測(cè)方法，目前市面上已有多種商品化PEDVELISA試劑盒，主要包括間接ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA、阻斷ELISA和雙抗體夾心ELISA。間接、競(jìng)爭(zhēng)性和阻斷性ELISA可用于檢測(cè)血清、乳品等樣品中的PEDV免疫球蛋白G（IgG）或免疫球蛋白A（IgA）。雙抗體夾心ELISA可用于檢測(cè)感染后1～3d的糞便排泄物中的抗原。王婉瑩等以PEDV重組S蛋白作為包被抗原，辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗豬IgA單克隆抗體為檢測(cè)抗體，建立并優(yōu)化了PEDVIgA抗體的ELISA檢測(cè)方法，既可以檢測(cè)血清中的IgA，也可以檢測(cè)分泌液中的SIgA。

3.4其他檢測(cè)方法

間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）是先將PEDV抗原包被于玻片上，加入待檢血清，通過熒光顯微鏡觀察是否產(chǎn)生熒光并判斷出待檢血清中是否含有PEDV抗體。病毒中和試驗(yàn)（VNT）則是把待檢血清與PEDV混合孵育后，接種到非洲綠猴腎（Vero）細(xì)胞中，通過觀察PEDV對(duì)Vero細(xì)胞的病變效應(yīng)，來判定血清中中和抗體是否存在及效價(jià)。熒光免疫層析技術(shù)（LFIA）是以硝酸纖維素膜為載體，包被病毒抗原或抗體，待檢樣本借助毛細(xì)管作用在膜上移動(dòng)，若樣本含病毒抗原或?qū)?yīng)抗體時(shí)，就會(huì)與標(biāo)記熒光物的抗體或抗原結(jié)合，在檢測(cè)線處形成熒光標(biāo)記的免疫復(fù)合物，再通過熒光讀數(shù)儀檢測(cè)熒光信號(hào)以判定其結(jié)果。此外，CRISPR/Cas核酸檢測(cè)技術(shù)、基因芯片技術(shù)、熒光微珠免疫試驗(yàn)（FMIA）、橫向流量測(cè)試（ICA）、均相光激化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（AlphaLISA）等技術(shù)在PEDV檢測(cè)中都具有巨大的臨床應(yīng)用潛力[1]。

4 防控技術(shù)

4.1疫苗免疫

疫苗接種是PED防控中最為有效的手段。當(dāng)前我國(guó)市面上PEDV商品化疫苗種類豐富，涵蓋滅活疫苗、活疫苗、二聯(lián)活疫苗、三聯(lián)活疫苗、二聯(lián)滅活疫苗、三聯(lián)滅活疫苗、基因工程亞單位疫苗等。2018—2023年已獲臨床批件的PED商品疫苗主要包括豬傳染性胃腸炎（transmissiblegastroenteritisvirus，TGEV）、PEDV、豬德爾塔冠狀病毒（porcinedeltacortonavirus，PDCoV）三聯(lián)滅活疫苗，PEDV、豬輪狀病毒（porcinerotavirus，PoRV）二聯(lián)滅活疫苗，PDCoV、PEDV二聯(lián)滅活疫苗，TGEV、PEDV二聯(lián)活疫苗，PEDV滅活疫苗，PEDV基因工程亞單位疫苗。采用的毒株包括ZJ/15株、CHO-3G12株、J01株、HB17株、FJ-2013株、HuN16株、HX115株在內(nèi)的PEDV流行變異毒株，這與當(dāng)前豬場(chǎng)病毒性腹瀉流行情況相吻合。2024年在簽批發(fā)的PED商品疫苗主要圍繞豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)疫苗進(jìn)行研發(fā)，采用的毒株主要包括CV777株、ZJ-08株、LW/L株、SCSZ-1株、AJ1102-R株，其中CV777株、ZJ-08株為PEDV經(jīng)典毒株，LW/L株、SCSZ-1株、AJ1102-R株為變異毒株]。

4.2中藥及植物提取物

研究發(fā)現(xiàn)，多種中藥成分及植物提取物如甘草、穿心蓮、單寧酸等對(duì)PEDV有顯著抑制作用，其作用機(jī)制主要是直接抑制病毒復(fù)制、吸附和進(jìn)入，抑制病毒在復(fù)制過程中關(guān)鍵酶和蛋白的活性，調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞抗病毒免疫應(yīng)答和腸黏膜免疫，以及調(diào)控細(xì)胞信號(hào)通路或抑制細(xì)胞因子等。

4.3益生菌

腸道菌群（GM）的改變將影響PEDV的感染，如普氏桿菌、擬桿菌和副球菌等優(yōu)勢(shì)細(xì)菌比例降低可能會(huì)導(dǎo)致仔豬更易感染PEDV，仔豬感染PEDV后體內(nèi)有益細(xì)菌數(shù)量下降，而腸炎魏氏梭菌數(shù)量顯著增加[1]。益生菌不僅可以維持腸道菌群結(jié)構(gòu)平衡，還對(duì)致病菌的生長(zhǎng)和繁殖起到抑制作用，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已借助益生菌抗PEDV感染進(jìn)行了多項(xiàng)研究。研究發(fā)現(xiàn)，1：16的乳酸菌上清液（LAB-CFS）可顯著下調(diào)PEDV活性；地衣芽孢桿菌及其地衣芽孢桿菌粗提物（BLFP）具有明顯的抗PED作用；腸膜明串珠菌通過上調(diào)Vero細(xì)胞干擾素刺激基因15kDa蛋白（ISG15）和黏液病毒抗性蛋白1（MX1）表達(dá)來預(yù)防PEDV[10]

4.4綜合防控措施

豬場(chǎng)需做好生物安全管理，以防止PED感染。加強(qiáng)人員生物安全意識(shí)，凡進(jìn)出豬場(chǎng)辦公區(qū)、生活區(qū)，進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)、豬舍的人員都必須進(jìn)行隔離和消毒；豬場(chǎng)運(yùn)豬車輛需在專門的車輛洗消中心進(jìn)行徹底的清潔、消毒以及烘干等處理；食材需經(jīng)兩級(jí)消毒后再轉(zhuǎn)入豬場(chǎng)廚房；生產(chǎn)區(qū)物資和生活區(qū)物資經(jīng)熏蒸消毒和靜置后才能轉(zhuǎn)入物料倉(cāng)庫(kù)；飼料卸至飼料中轉(zhuǎn)倉(cāng)前，外部料車需進(jìn)行第一輪洗消，再由場(chǎng)外飼料中轉(zhuǎn)車將飼料轉(zhuǎn)入中轉(zhuǎn)料塔。其次，做好分娩舍日常管理，分娩舍白天溫度不得低于 24^°C ，夜晚溫度不得低于20℃，濕度在 75% 以下為宜；飲水中添加電解多維、口服補(bǔ)液鹽等，以增強(qiáng)仔豬免疫力；密切關(guān)注豬的健康狀況，豬場(chǎng)一旦發(fā)生PED，需立即隔離病豬并進(jìn)行全面消毒和緊急免疫，對(duì)死亡豬進(jìn)行無(wú)害化處理。

結(jié)語(yǔ)

近年來PEDV在我國(guó)豬場(chǎng)較為活躍，流行毒株以G2型毒株為主，呈高陽(yáng)性率和遺傳多樣性特點(diǎn)，這給PEDV感染的監(jiān)測(cè)和防控構(gòu)成了挑戰(zhàn)。隨著生物信息學(xué)分析和基因組測(cè)序的精度和速度不斷提高，基于新技術(shù)的PEDV檢測(cè)方法也逐漸朝著更加高效、靈敏和便捷的方向發(fā)展，使得對(duì)PEDV流行株變異情況的實(shí)時(shí)檢測(cè)成為可能。疫苗接種在防控PED過程中發(fā)揮了極其重要的作用，對(duì)中藥及植物提取物、益生菌制劑的研究也為PED的防控提供新路徑，未來可深人探索低聚木糖等中藥及植物提取物抑制PEDV的作用機(jī)制、提取工藝、療效與安全性，同時(shí)篩選抗PEDV的新型、有效且穩(wěn)定的新型菌株。生產(chǎn)中更要從“人車物料”各方面做好生物安全防控措施。總之，PED的防控是一項(xiàng)系統(tǒng)性的工作，需要結(jié)合豬場(chǎng)的具體情況因場(chǎng)施策，才能有效防控和凈化PED。

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收稿日期：2025-08-14

作者簡(jiǎn)介：謝旖（1991—），女，漢族，湖南省益陽(yáng)市，碩士，副教授。研究方向：獸醫(yī)內(nèi)科學(xué)。*通訊作者：代佳娣（1991—），女，土家族，貴州省遵義市，碩士，講師。研究方向：獸醫(yī)內(nèi)科學(xué)。