牦牛病毒性腹瀉的早期診斷與防控技術

昌都市牦牛存欄量占西藏自治區牦牛存欄總量的 15% ，牦牛養殖收入占昌都農牧民收入 60% ，是當地畜牧業的主導產業。

1牦牛病毒性腹瀉臨床癥狀

急性感染表現為初期體溫升高至 40～41.5°C 持續3～5d，伴有劇烈水樣腹瀉，日排便量為正常的3倍，糞便中可見黏液和血絲，腹瀉持續1～2周，隨后口腔黏膜出現廣泛潰瘍，特別是頰部、齒齦病變較為明顯，鼻腔流出漿液性分泌物，部分病例出現跛行，蹄部冠狀帶糜爛等癥狀。持續感染PI牛體型較同齡牛小 30%～40% ，體重增長速率降低 50% ，間歇性腹瀉，糞便呈黃綠色、酸臭，伴持續性脫毛和皮膚角化過度，胸腺萎縮，重量僅為正常牛的 60% 淋巴細胞減少（ CD4+/CD8+ 比值下降至0.8，正常為1.5～2.0 ，妊娠母牛受到病毒感染后，在妊娠早期可致其流產，中期感染致胎兒畸形，小腦發育不全、腦積水，晚期感染產弱犢，出生體重低 20% ，PI犢牛出生時體重正常，但攜帶病毒且終身排毒，成為牧場內主要傳染源。新生犢牛受到病毒感染后，往往在出生72h內出現高熱，體溫升高至41 C 以上，嚴重脫水，死亡率為 50%～70% ，哺乳困難，因口腔潰瘍拒絕吮乳，體重日增重僅為 50～100g 。

2病理學變化

解剖病死牛可以發現其空腸和回腸黏膜充血、水腫，腸壁變薄，部分區域可見直徑 2～3mm 的潰瘍灶，腸道內容物呈血水樣，腸系膜淋巴結腫大至正常的2～3倍，頰黏膜、舌面及食道黏膜多發性糜爛（“爛斑癥”），嚴重者融合成片狀壞死。全身淋巴結腫大，特別是腸系膜淋巴結重達 50～70g ，切面呈灰白色，髓質出血，胸腺萎縮，重量 lt;100g ；脾臟白髓面積減少 40% 。組織學觀察可以發現，空腸絨毛高度由正常 800～1000μm 縮短至 300～500μm ，隱窩深度增加，腸上皮細胞廣泛空泡變性，局部脫落，固有層有大量中性粒細胞浸潤，皮質淋巴細胞密度降低 50% ，哈氏小體結構破壞，白髓淋巴濾泡減少，動脈周圍淋巴鞘內T細胞數量下降60% 。繼發細菌感染時，肺泡腔內充滿纖維素性滲出物，肺泡壁增厚，妊娠母牛胎盤絨毛膜上皮細胞壞死，血管內皮水腫，胎兒肝細胞出現嗜酸性包涵體。

3早期診斷

3.1ELISA血清抗體檢測

ELISA血清抗體檢測目的是檢測牦牛血清中BVDV特異性IgG抗體，篩查感染群體。提前準備好BVDV抗體間接ELISA試劑盒，建議使用經OIE認證的商用試劑盒，如IDEXXBVDVTotalAbTest，采集牦牛血清，配置酶標儀、恒溫培養箱、微量移液器、洗板機，稀釋濃縮洗滌液至1：25稀釋，每孔加入100μL 待測血清，稀釋比為1：40，即2 μL 血清 +78μL 稀釋液，設置陰性對照和陽性對照各2孔，在37 C 條件下孵育 30min ，避免震動，自動洗板機洗5次，每次300μL/ 孔洗滌液，手動洗板需拍干殘留液體，每孔加入 100μ LHRP標記的抗牛IgG抗體，在37℃條件下孵育 30min ，重復步驟4，洗板5次，每孔加入 100μLTMB 顯色液，室溫避光靜置 15min ，每孔加入 50μI 終止液，酶標儀讀取 值（需 15min 內完成），緊接著計算S/P值，陽性標準是： S/P≥0.4 ，提示抗體為陽性，可能為既往感染或疫苗接種，可疑標準為 0.3≤S/ Plt;0.4 ，陰性是 S/Plt;0.3 。

3.2RT-PCR檢測

RT-PCR檢測的目標是檢測BVDV核酸，兩種方法適用于急性感染、PI牛篩查及病毒分型。提前準備好抗凝血、糞便或組織、RNA提取試劑盒、反轉錄酶、熒光定量PCR試劑。設備主要有實時熒光定量PCR儀、高速離心機、核酸電泳系統。RNA提取主要是 200μL 全血 +500μL 紅細胞裂解液， 2000rpm 離心5min，去血細胞、糞便或組織取 50mg 研磨后加1mLTRIzol裂解，TRIzol法提取RNA，操作時要求按氯仿一異丙醇分層（比例為 200μL . 50μL ）， 12 000R/min 離心15min （4^°C ），RNA溶于 20～50μL 無RNA酶水，在 -80°C 條件下保存備用。逆轉錄反應體系（ 20μL ）：RNA模板（ 5μL ） + 隨機引物（ 1μL ， 50μM ） +dNIP （ 2μL ， 10mM ） +M-MLV （ 1μL ）+Buffer（ 5μL ）+RNase-free水（ 6μL ），反應條件：在 25^°C 條件下反應 10min 在42 °C 條件下反應 50min 鐘 $$ 在 85^°C 條件下反應 5min 在4 °C 條件下保存。PCR擴增反應體系（ 25μL ）：cDNA（ 2μL ）+上下游引物（各 0.5μL 10μM ）+SYBRGreenMix（ 12.5μL ） +ddH₂O （9.5μL ），預變性在 94^°C 條件下 3min ，擴增在94 °C 條件下 30s? 在55 C 條件下 30s? 在72 C 條件下45s（35循環），終延伸至在72 C 條件下 10min ，設置熔解曲線分析（ 60～95^°C ，每 0.5°C 讀值），區分特異性擴增。

3.3膠體金檢測

取1g新鮮糞便，加 4～9mL 稀釋液振蕩混勻，靜置取上清待檢，試紙條及樣本需提前從冷藏取出，室溫平衡 15～30min ，吸取混勻樣本上清，垂直滴加80～100μL 于試紙條加樣孔S孔，水平放置試紙條于潔凈臺面。反應時間為 10～15min ，設置陽性與陰性對照，陽性對照C線 + T線顯色，陰性對照僅C線顯色（T線無），陽性判定依據為C線 ⁺¹ T線均顯紅色/紫色條帶（含弱陽性：T線淺但肉眼可辨），陰性判定依據為僅C線顯色，T線無條帶，C線未顯色（無論T線是否顯色）判定無效，需重測。

4治療方案

患病牛口服蒙脫石散，成年牛劑量為 20g/ 次，犢牛為 5～10g/ 次，溫水調成懸浮液，口服，2次/d，吸附毒素，保護腸黏膜，同時使用復方氯化鈉注射液50～80mL/kg^?bw ，靜脈滴注，速度為 10mL/kg/h ，糾正脫水，一次用量，連續使用2～3d；中藥治療選擇葛根芩連湯加減，中藥方劑為葛根 60g 、黃芩 、黃連20g 、甘草 15g 、白頭翁30g加水 800mL ，煎煮剩余藥液至 300mL ，濾液灌服，成年牛每日1劑（早晚分服），連用5d，特牛藥液使用減半。持續感染期口服硫酸粘菌素，劑量為 6.6mg/kg^?bw ，1次/d，連用5d，同時搭配使用四君子湯合參苓白術散，中藥方劑為黨參 _40g 、白術 30g 、茯苓 30g 、甘草 15g 、山藥 、薏苡仁 40g 加水 800mL ，煎煮剩余藥液至 300mL ，灌服，成年牛每日1劑，連用15d，犢牛藥液使用減半，補氣健脾。恢復期推薦使用復合維生素B注射液 20mL /頭，肌注，一次用量，搭配使用補中益氣湯，中藥方劑為黃芪60g 、黨參 40g 、當歸 、陳皮 20g 、升麻 15g ，將其研磨成粉末過篩處理后按照每頭成年牛每日1劑，添加到飼料中連用10d，特牛上述中藥方劑的藥物使用減半。

5預防措施

5.1疫苗接種管理

推薦使用牛病毒性腹瀉粘膜病滅活疫苗，犢牛首免為3月齡（母源抗體消失后），頸部皮下注射2mL，間隔21d注射同劑量以加強免疫。成年牛每年春、秋兩季各接種1次， 2mL 頭；妊娠母配種前4周接種，避免妊娠早期使用活疫苗，防胎兒感染，二免后30d抽取 5% 群體血清，ELISA抗體S/P值 ≥1.0 為合格，合格率 lt;80% 需全群補免，間隔 14d_c

5.2加強生物安全防范

生產環節要規范引種檢疫，新購牛在獨立區域隔離 30d ，距離主牛群 ≥200m. 。隔離第1天、第15天采集EDTA抗凝血，RT-PCR檢測BVDV核酸和ELISA抗體檢測。兩次PCR檢測為陰性（Ct值 ≥40 ）且抗體S/P值 lt;0.3 ，判定為合格。消毒操作過程中，圈舍地面可使用 2% NaOH溶液噴灑， 300mL/m² ，每周1次，作用時間 ，器械設備推薦使用 0.5% 過氧乙酸浸泡 30min ，溫度為 15～25‰ ，或進行紫外線照射，強度 ，作用 30min ，人員通道如腳踏池添加 12% 檸檬酸溶液，深度為 5cm ，每日更換。糞便進行發酵，堆肥發酵溫度 ，持續7d以殺滅病毒，病死牛處理采取深埋（深度 ≥2m ）并覆蓋生石灰（ 3kg/m² ），或在爐溫 ≥800% 條件下焚燒處理。

5.3監測與淘汰PI牛

重點要做好PI牛篩查，受到該種疾病威脅的養殖場或發生過該種疾病的養殖場，應在犢牛出生后24h進行耳緣組織采樣，RT-PCR檢測，Ct值 ≤35 判為PI牛，每年秋季采集 10% 牛的抗凝血，進行PCR檢測病毒（PI牛終身排毒）或者抗體篩查，檢測出PI牛應立即撲殺并進行無害化處理。所在圈舍全面消毒。急性感染牛隔離至獨立病區，連續3dPCR轉陰后歸群。

結語

綜上所述，牦牛病毒性腹瀉防控期間通過構建以“早期診斷一精準干預一綜合預防”為核心的防控技術體系，明確分階段中西醫協同治療的差異化方案，并形成覆蓋疫苗接種、生物安全、環境調控等全鏈條管理規范，推動牦牛養殖業的健康發展

參考文獻：

[1]文侯，邊瓊，次旦歐珠，黃豐立，米平.牦牛巴氏桿菌病和牛病毒性腹瀉病流行情況分析[J].西藏農業科技，2024，46（04）：73-77.

[2]林偉山，馬豆豆，雷萌桐，等.青海海北地區牦牛病毒性腹瀉病毒流行病學調查及5’-UTR遺傳進化分析[J].中國畜牧獸醫，2025，52（03）：1241-1249.

[3]武盼.牛病毒性腹瀉的主要癥狀與防治策略[J].畜牧業環境，2025，（01）：104-105.

收稿日期：2025-09-04

作者簡介：張發忠（1993—），男，漢族，青海省湟源縣，本科，獸醫師。研究方向：動物疫病監測和防控。