附子正丁醇萃取物的化學成分

何成軍， 李小紅， 耿 昭， 仰 蓮， 郭 力， 彭 成

（成都中醫(yī)藥大學藥學院，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地， 四川 成都611137）

附子正丁醇萃取物的化學成分

何成軍， 李小紅， 耿 昭， 仰 蓮， 郭 力， 彭 成*

（成都中醫(yī)藥大學藥學院，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地， 四川 成都611137）

目的 研究附子正丁醇萃取物的化學成分。方法 采用色譜技術進行分離純化，利用理化性質(zhì)及波譜技術鑒定化合物結構。 結果 從附子的正丁醇萃取物分離得到 9 個生物堿， 分別鑒定為尼奧靈 （1）、 附子靈 （2）、 異塔拉定（3） 、 subcusine（4） 、 塔拉薩敏 （5） 、 川附子堿 A（ 6） 、 易混翠雀花 堿 （7 ） 、 14-acetylkarakoline（8 ） 、 delstaphisine 8，14-deacetate（9）。 結論 化合物 9 為新天然產(chǎn)物， 化合物 8 為首次從該屬中分離得到， 化合物 6 和 7 為首次從該植物中分離得到。

附子； 正丁醇萃取物； 生物堿； delstaphisine 8，14-deacetate； 新天然產(chǎn)物

附 子為毛 茛科植 物烏頭 Aconitum carmichaelii Debx.子根的加工品， 收載于 《中國藥典》 2010年版，其性大熱，味辛、甘，有毒，入心、脾、腎，通行十二經(jīng)絡，具有回陽救逆、溫里助陽、祛寒止痛的功效，用于亡陽虛脫、肢冷脈微、陽痿、宮冷、 心腹冷痛 等癥［1］。 附子是我國傳統(tǒng)醫(yī)學臨床治病 “回陽救逆” 要藥。現(xiàn)代藥理研究顯示，附子具有強心、抗心率失常、提高免疫力、抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、舒張血管等藥理活性，其中生物堿類成分被認為是其特征性活性成分［2-7］。

為進一步研究附子的物質(zhì)基礎，尋找生物活性的化合物，對附子的正丁醇部位進行了化學成分研究，從其中分離得到了9個化合物，其中化合物9為新的天然產(chǎn)物，化合物8為首次從該屬中分得，化合物6和7為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Bruker-400 型和 Bruker-600 型核磁共振波譜儀（德國 Bruker公司）； Waters Synapt G2 型質(zhì)譜儀；XRC-1 型顯微熔點測定儀 （ 未校正）； Búchi Gradient Former B-687 型中壓液相色譜儀 （ Rp C18， 40-60 μ， Welch 公司）；MCI柱色譜 CHP 20P （日本Mitsubishi Chemical公司）； Sephadex LH-20 （瑞士Amershan Pharmacia公司）； 薄 層色譜 硅膠 GF254、柱色譜硅膠 （200-300 目）、 GF254硅膠制備薄層板（煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司）。 所用試劑均為分析純；顯色劑為改良碘化鉍鉀試液。

附子于 2010 年 7 月采自四川省江油市附子基地，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室李敏教授鑒定為 毛茛 科 植 物烏 頭 Aconitum carmichaelii Debx.的子根加工品，標本保存于成都中醫(yī)藥大學藥學院標本館 （SFZ-0710）。

2 提取與分離

干燥的附子藥材粉末 5.5 kg，用 10 倍量 95%乙醇回流提取5次，每次3 h， 紗布過濾， 合并濾液，減壓濃縮至無醇味，混懸于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，回收溶劑分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。正丁醇部位 （45 g） 用硅膠柱色譜分離， 三氯甲烷 -甲醇（100 ∶0-0 ∶100）梯度洗脫，得到 9 個洗脫部分A-I。 A部 分 經(jīng) MCI柱 色 譜、 反 復 硅 膠 柱 色 譜、Sephadex LH-20 柱色譜和制備薄層色譜等分離方法得到化合物 3 （18 mg）、4 （15 mg）、 6 （20 mg）、7 （30 mg） 和 8 （5.8 mg）。 B部分析出白色固體，經(jīng)三氯甲烷重結晶，得到化合物 1 （2.5 g）。 I部分析出白色針晶，經(jīng)甲醇重結晶，得到化合物2（1.0 g）； 剩余母液經(jīng) Sephadex LH-20 柱色譜和制備薄層色譜分離得到化合物 5 （10 mg） 和 9（5.5 mg）。

3 結構鑒定

化合物1： 白色塊狀結晶 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色呈橘紅色； mp 158 ～160 ℃； ESI-MS m/z438 ［ M +H］+； 460 ［ M+Na］+。1H-NMR（ CDCl3， 400 MHz）δ： 1.12 （3H， t， J=7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.32，3.32， 3.33 （ each 3H， s， 3 ×OCH3）。13C-NMR（ CDCl3， 100 MHz） δ： 72.3 （ C-1）， 29.4 （ C-2 ），30.0 （C-3）， 38.2 （ C-4），44.9 （ C-5）， 83.2 （C-6）， 52.2 （ C-7） ， 74.3 （ C-8）， 48.8 （ C-9 ） ， 40.4（C-10） ， 49.6 （ C-11 ）， 29.5 （ C-12 ）， 44.2 （ C-13），76.1 （ C-14）， 42.9 （ C-15 ）， 81.9 （ C-16 ），64.0 （ C-17 ）， 80.4 （ C-18 ）， 57.1 （ C-19 ）， 58.0（C-6'）， 56.5 （ C-16'）， 59.3 （ C-18'）， 48.4 （ NCH2CH3）， 13.2 （N-CH2CH3）。 以 上 數(shù) 據(jù) 與 文 獻［8］ 報道基本一致， 確定化合物 1 為尼奧靈 （neoline）。

化合物2： 白色針狀結晶 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色呈橘紅色； mp 208 ～209 ℃； ESI-MS m/z454 ［ M +H］+。1H-NMR（CD3OD， 600 MHz） δ： 1.43 （3H，t， J=6.6 Hz， N-CH2CH3）， 2.99 （2H， q， J= 6.6 Hz， N-CH2CH3）， 3.33， 3.35， 3.10 （each 3H，s， 3 ×OCH3）， 4.11 （1H， t， J=3.6 Hz， H-14β），4.41 （ 1H， d， J=6.6 Hz， H-15 ）。13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δ： 72.6 （ C-1）， 28.4 （ C-2），29.0 （C-3）， 39.3 （ C-4），45.3 （ C-5）， 83.6 （C-6）， 50.5 （ C-7） ， 79.2 （ C-8）， 48.6 （ C-9） ， 41.8（C-10） ， 51.0 （ C-11 ）， 31.6 （ C-12 ）， 43.7 （ C-13），79.9 （ C-14）， 76.1 （ C-15 ）， 92.6 （ C-16 ），64.4 （ C-17 ）， 79.2 （ C-18 ）， 57.6 （ C-19 ）， 58.5（C-6'）， 58.9 （ C-16'）， 59.5 （ C-18'）， 48.7 （ NCH2CH3）， 10.9 （ N-CH2CH3）。 以 上 數(shù) 據(jù) 與 文 獻［9］ 報道基本一致， 確定化合物 2 為附子靈 （fuziline） 。

化合物 3： 白色無定形粉末 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色呈橘紅色； ESI-MS m/z408 ［M+H］+。1HNMR（CDCl3， 600MHz） δ： 3.04 （1H， J=8.4 Hz，H-18a）， 3.13 （ 1H， J=8.4 Hz， H-18b）， 3.32，3.35 （each 3H， s， 2 ×OCH3）， 3.76 （1H， br s，W1/2=5.8 Hz， H-1β） ， 4.22 （1H， t， J=4.8 Hz，H-14β）。13C-NMR（ CDCl3， 150 MHz）δ： 72.6 （ C-1）， 29.5 （ C-2） ， 25.0 （ C-3）， 37.9 （ C-4） ， 25.0（ C-6 ）， 45.5 （ C-7 ）， 74.0 （ C-8）， 47.8 （ C-9 ），44.4 （ C-10 ）， 48.9 （C-11）， 28.3 （ C-12）， 39.6（C-13） ， 75.9 （ C-14 ）， 42.0 （ C-15 ）， 81.9 （ C-16），79.2 （ C-18）， 56.5 （ C-19）， 56.3 （ C-16'），59.6 （ C-18'）， 14.2 （ N-CH2CH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 ［10］報道基本一致，確定化合物 3 為異塔拉定 （ isotalatizidine） 。

化合物 4： 白色無定形粉末 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色呈橘紅色； ESI-MS m/z424 ［M+H］+。1HNMR（CD3OD， 400 MHz） δ： 1.08 （3H， t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.32， 3.34 （each 3H， s， 2 × OCH3）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz） δ： 73.4 （ C-1）， 29.7 （ C-2） ， 30.0 （ C-3）， 39.2 （ C-4） ， 49.0（ C-5 ）， 73.5 （ C-6 ）， 51.2 （C-7）， 76.4 （ C-8 ），45.5 （C-9）， 42.0 （C-10）， 49.6 （C-11），31.5 （C-12）， 45.5 （ C-13）， 76.1 （ C-14 ）， 42.6 （ C-15 ），84.3 （ C-16 ）， 64.5 （C-17）， 81.0 （ C-18）， 58.6（C-19）， 57.1 （ C-16'），59.4 （ C-18'）， 48.4 （ NCH2CH3）， 12.7 （ N-CH2CH3）。 以 上 數(shù) 據(jù) 與 文 獻［11］ 報道基本一致，確定化合物 4 為 subcusine。

化合物5： 白色無定形粉末 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色呈橘紅色； ESI-MS m/z 422 ［ M+H］+。1HNMR （ CDCl3， 400 MHz）δ：1.11 （ 3H，t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.27， 3.28， 3.33 （each 3H， s， 3 ×OCH3）。13C-NMR（CDCl3， 100MHz） δ： 85.8（ C-1 ）， 27.6 （ C-2 ）， 31.9 （ C-3）， 38.6 （ C-4 ），45.8 （C-5）， 24.7 （ C-6），48.8 （ C-7）， 72.7 （C-8）， 49.7 （C-9）， 45.6 （C-10）， 48.4 （C-11）， 29.4（C-12） ， 36.9 （ C-13 ）， 77.2 （ C-14 ）， 38.6 （ C-15）， 82.1 （ C-16）， 63.5 （ C-17 ）， 77.3 （ C-18 ），53.4 （C-19）， 56.5 （ C-16'），59.5 （ C-18'），14.1（N-CH2CH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 ［12］ 報道基本一致， 確定化合物 5 為塔拉薩敏 （talatisamine）。

化合物6： 白色膠狀物 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色呈橘紅色；ESI-MS m/z 438 ［M+H］+。1H-NMR（CD3COCD3， 600 MHz） δ： 1.08 （ 3H， t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.28， 3.34， 3.41 （each 3H，s， 3 ×OCH3）。13C-NMR（CD3COCD3， 150 MHz） δ：73.1 （ C-1）， 28.5 （ C-2）， 31.2 （ C-3）， 37.9 （ C-4）， 45.5 （ C-5） ， 83.8 （ C-6）， 51.6 （ C-7 ） ， 75.9（C-8）， 46.6 （ C-9）， 45.6 （ C-10）， 49.0 （ C-11），30.7 （ C-12 ）， 41.0 （ C-13 ）， 77.0 （ C-14 ）， 41.6（C-15） ， 82.7 （ C-16 ）， 65.9 （ C-17 ）， 78.4 （ C-18），58.3 （C-19 ），57.5 （C-6'），56.0 （ C-16'），59.1 （ C-18'）， 49.4 （ N-CH2CH3）， 13.3 （ NCH2CH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 ［13］報道基本一致，確定化合物 6 為川附子堿 A （senbusine A）。

化合物7： 白色無定形粉末 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色呈橘紅色； ESI-MS m/z 450 ［ M+H］+。1HNMR（CD3COCD3， 600 MHz） δ：1.10 （3H， t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 2.02 （3H， s， COCH3）， 3.02（1H， J=8.4 Hz， H-18a）， 3.16 （1H， J=9.0 Hz，H-18b）， 3.25， 3.28 （ each 3H， s， 2 ×OCH3）， 3.67（1H， br s， W1/2=5.6 Hz， H-1β）， 4.80 （1H， t，J=4.8 Hz， H-14β）。13C-NMR （ CD3COCD3，150 MHz） δ： 72.7 （ C-1）， 30.0 （ C-2），30.2 （C-3）， 38.5 （ C-4） ， 42.1 （ C-5）， 25.9 （ C-6 ） ， 47.1（C-7）， 74.5 （ C-8）， 44.3 （ C-9）， 44.6 （C-10），49.0 （ C-11 ）， 27.6 （ C-12 ）， 38.1 （ C-13 ）， 77.4（C-14） ， 42.9 （ C-15 ）， 83.4 （ C-16 ）， 64.2 （ C-17），79.6 （ C-18）， 57.3 （ C-19）， 56.1 （ C-16'），59.4 （ C-18'）， 49.0 （ N-CH2CH3）， 13.3 （ NCH2CH3）， 170.7 （-COCH3）， 21.1 （-COCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 ［10］ 報道基本一致， 確定化合物 7為易混翠雀花堿 （condelphine）。

化合物8： 無色無定形粉末 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色呈橘紅色； ESI-MS m/z 420 ［ M+H］+。1HNMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 0.90 （3H， s， CH3），1.14 （3H， t， J=7.2 Hz， N-CH2CH3） ， 2.07 （3H，s， CH3CO）， 3.27 （ 3H， s， OCH3）13C-NMR（ CDCl3， 100 MHz）δ： 72.2 （C-1）， 30.9 （ C-2），29.1 （C-3）， 32.8 （ C-4），43.3 （ C-5）， 29.5 （C-6）， 45.5 （ C-7） ， 74.8 （ C-8）， 46.2 （ C-9） ， 50.9（C-10） ， 49.1 （ C-11 ）， 29.7 （ C-12 ）， 44.7 （ C-13），76.7 （ C-14）， 42.6 （ C-15 ）， 82.0 （ C-16 ），63.1 （ C-17 ）， 36.6 （C-18）， 60.2 （ C-19）， 56.1（C-16'）， 170.5 （-COCH3）， 21.4 （-COCH3）， 48.5（N-CH2CH3）， 13.8 （ N-CH2CH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 ［14］報道基本一致， 確定化合物 8 為 14-acetylkarakoline。

化合物9： 無色無定形粉末 （甲醇）； 碘化鉍鉀顯色 呈 橘 紅 色； ESI-MS m/z 424 ［ M+H］+。1H-NMR （CDCl3，400 MHz）δ： 1.07 （3H，t， J= 7.2 Hz， N-CH2CH3）， 3.26， 3.30 （each 3H，s， 2 × OCH3）；13C-NMR（ CDCl3， 100 MHz） δ： 72.1 （ C-1）， 29.3 （ C-2） ， 30.0 （ C-3）， 37.9 （ C-4） ， 43.9（ C-5 ）， 82.3 （ C-6 ）， 53.4 （ C-7）， 74.4 （ C-8 ），47.9 （C-9）， 41.9 （C-10）， 49.6 （C-11），29.3 （C-12）， 45.4 （ C-13）， 77.4 （ C-14 ）， 44.7 （ C-15 ），72.3 （ C-16 ）， 63.7 （ C-17 ）， 80.1 （ C-18 ）， 57.2（ C-19 ）， 58.3 （ C-6'）， 59.2 （ C-18'） ， 48.3 （ NCH2CH3）， 12.7 （N-CH2CH3）。 以 上 數(shù) 據(jù) 與 文 獻［15］ 報道基本一致， 確定化合物 9 為 delstaphisine 8，14-deacetate。

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Chem ical constituents of n-BuOH extract of lateral roots of Aconitum carmichaelii

HE Cheng-jun， LIXiao-hong， GENG Zhao， YANG Lian， GUO Li， PENG Cheng*
（Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research Development and Utilization of Chinese Medicine Resources， Sichuan Province and Ministry of Science and Technology， Chengdu 611137， China）

AIM To study the chemical constituents of n-BuOH extract of the lateral roots of Aconitum car-michaelii.METHODS The constituentswere isolated by column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20， and identified by spectroscopic methods.RESULTS Nine alkaloids were isolated from the n-BuOH extract and identified as neoline（1） ， fuziline（2） ，isotalatizidine（3） ， subcusine（4） ， talatisamine（ 5） ，senbusine A（6） ， condelphine（ 7 ） ， 14-acetylkarakoline（ 8 ） ， delstaphisine 8，14-deacetate（9 ）.CONCLUSION Compound （9） is a new natural product， compound 8 is obtained from the genus Aconitum for the first time， and compounds6 and 7 are isolated from this plant for the first time.

lateral roots of Aconitum carmichaelii；n-BuOH extract；alkaloids；delstaphisine 8，14-deacetate；new natural product

R284.1

： A

： 1001-1528（2014）05-1004-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.026

2013-06-20

“十二五” 國家科技支撐計劃課題 （2010BAE00406）； 2012 年博士點基金聯(lián)合資助課題 （0125132110006）

何成軍 （1989—） ， 男， 碩士生， 研究方向： 天然藥物化學。 Tel： 13699449413， E-mail： heye1217@163.com

*通信作者： 彭 成， 男， 教授， 博士生導師， 研究方向： 中藥藥理和毒理。 Tel： 13708001778， E-mail： pengchengchengdu@126.com

日期： 2013-12-26

網(wǎng)絡出版地址： http： //www.cnki.net/kcms/detail/31.1368.R.20131226.1546.001.htm l